适于qPCR 和 HRM 最佳（没有之一）荧光染料
图 1. EvaGreen® dye binds to dsDNA via a “release-on-demand” mechanism.
图2. EvaGreen无毒，无致突变性，对水生生物无危害性。
EvaGreen 是一种用于实时定量 PCR （ qPCR ）的强制系统 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性， EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。
首先， EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时， EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号（图 3）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR 鱿鱼捕捞
，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 4 ）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR Green I 5460a
无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。 特性:
极高的灵敏度
∙ 在推荐浓度下使用时可以获得最强的 PCR 扩增信号。
PCR 抑制性极小
∙ 智能化的“按要求释放” DNA 结合技术使得 EvaGreen 对 PCR 的抑制远小于 SYBR Green I 。
双面斜纹布和快速 PCR 兼容
∙ 对 PCR 干扰极小，从而极大的缩短了 PCR 延伸时间。
非常适合 HRM 分析
∙ 无“染料重分布”缺陷，兼容 PCR 后的高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析。
兼容多重 PCR
∙ 在推荐浓度下使用时，无扩增子之间的染料迁移现象。
超强稳定性
∙ 滑水鞋在大部分生化条件下非常稳定，可在室温下储存并可反复冻融。
安全性好
∙ 图6 细胞膜穿透性测试表明，EvaGreen几乎不能穿透细胞膜，安全性高
优越的兼容性
∙ 和 SYBR GREEN I 光谱相似,和各知名品牌的 qPCR 仪器兼容。 用 EvaGreen 替代 SYBR Green 1 ，毋须改变任何您目前使用的操作步骤和仪器设备。
第二， EvaGreen 的稳定性极好。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反， SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。
EvaGreen 降低了细胞膜透性，因而比 SYBR Green 1 更加安全。独立实验室的测试结果显示， EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性 。相反，虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制，使其有诱变增强作用 。考虑到 PCR 的广泛使用，其安全性应该得到足够重视。
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图3. 比较Biotium公司的 Fast EvaGreen master mix (green)和 ABI (blue) 和 Qiagen (red)fast SYBR Green master mixes, 显示相比 SYBR Green，EvaGreen 有着超级灵明度。 多媒体音频控制器（ A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.） | | 图 4 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析可以明显的区分三个不同的基因型：突变型（红）、杂合型（紫）和野生型（蓝）。（数据由 Corbett Research 提供） |
| | 图 5 . EvaGreen 在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱 |
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