新型人降钙素基因在大肠杆菌中表达

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发光片降钙素是一种重要的肽类激素，在肌体的钙磷代谢，骨的形成、分化和发育等相关的诸多环节中起着关键性作用。降钙素在临床上应用十分广泛，但其自然来源有限，必须以基因工程手段进行大规模生产才能满足需求。原核系统中表达出的降钙素无法完成Ｃ．末端的酰胺化，尚需体外处理才能具有较强的生物活性。

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网页电视太阳能光伏密封胶本文利用ＰＣＲ技术扩增新型人降钙素基因编码序列ｈＣＴ＋（将编码Ｃ－末端脯氨酸的密码子换为编码谷氨酰氨的密码子），将此基因克隆入大肠杆菌非融合型表达载体ｐＢＶ２２０及融合型表达载体ｐＥＴ４２ａ中。重组表达载体ｐＥＴ４２ａ／ｈＣＴ＊转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓ中诱导表达，经ＳＤＳ．ＰＡＧＥ证实细胞裂解物中含有与预期位置相同的融合蛋白，经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定证明此融合蛋白具有人降钙素的免疫活性。表达条件优化后，可溶性蛋白的表达量占胞内总蛋白的１０％。经超滤浓缩后，融合蛋白在Ｘａ因子作用下产生重组的新型降钙素，进一步分离纯化得到该蛋白的初级纯品。大鼠体内降血钙试验表明新型降钙索具有降血钙活性。

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关键词：新型降钙素大肠杆菌表达

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