含布洛芬-香豆素骨架化合物及其应用

1.本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种含布洛芬-香豆素药效骨架化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

2.肿瘤和疼痛对人类的健康和生存构成威胁，也大大降低生活质量，是世界面临的最重要的社会问题之一，尤其是在癌症的中期和晚期发展阶段。近年来，虽然临床上基于“一药一病”，对待肿瘤患者是同时使用化疗和止痛两种药物，即运用“鸡尾酒疗法”，取得了一定的疗效，但易产生耐药性、不同药物之间相互作用的不确定性等不足之处。因此，对于癌症和疼痛，研发结构多样、高效低毒的新型抗肿瘤和镇痛双重功效的药物势在必行。
3.在肿瘤发生、发展中炎症反应发挥着重要的作用，环氧合酶(cox)是影响炎症反应的重要靶点之一。布洛芬是一种常见的cox抑制剂，在临床上可用于多种疾病，因其优秀的活性以及较高的安全性而被广泛应用。由于cox-2在肿瘤细胞中大量表达，而布洛芬具有抑制cox-2的作用。近年来，研究者们对布洛芬的分子结构进行修饰，所得到的化合物表现出一定的抗肿瘤活性。bahareh shokri实验组将布洛芬与已知的靶向多肽序列ngr偶联，其中ngr肽可以选择性地与肿瘤血管中过度表达的氨肽酶n靶向结合而发挥作用。抗肿瘤实验结果显示布洛芬的ngr偶联形式对skov-3肿瘤细胞有较好的抑制作用。的研究将α-硫辛酸(ala)与布洛芬通过共价键连接合成了一系列衍生物，并评估新合成的布洛芬衍生物对人类胶质母细胞瘤细胞的细胞毒性。结果显示，该类衍生物均能能够有效抑制人类胶质母细胞瘤细胞。
4.香豆素类化合物是一类重要的具有吡喃酮类含氧杂环化合物，具有高生物利用度和低毒性天然活性的先导结构骨架。基于其优秀的药理活性，一些香豆素的衍生物已被批准用于临床。
5.化合物的拼合是指将两个或者多个药效基团利用化学键进行连接，进而得到新型的化合物分子。得到的新分子通常会继承参与拼合药效基团的药理活性，并同时降低药效基团的毒副作用。两种药效基团的拼合方式主要有“重叠式”和“链接式”两种类型。其中较常见的“链接式”主要是指将两种药效基团通过合适的连接基团杂交在一起，使用不同的连接基团进行拼合可以构成不同的连接策略。
6.目前未见与本发明相关化合物的报道。

技术实现要素：

7.本发明提供一类具有较好的抗肿瘤活性的含布洛芬-香豆素骨架化合物，本发明利用香豆素天然的苯并吡喃酮环结构，利用双酰肼、噁二唑、酰腙键具有较大的偶极矩和氢键结合能力，将香豆素和布洛芬进行键接，形成了能与生物体内的多种酶及受体结合的含布洛芬-香豆素骨架化合物。
8.本发明含布洛芬-香豆素骨架化合物结构式如下：
[0009][0010]
其中：y选自(双酰肼)、(酰腙)、(噁二唑)；
[0011]
r1选自h、卤素；
[0012]
r2选自h、卤素、ch3、oh、no2、含有1-3个碳原子的脂肪直链烷烃基、含有4-7个碳原子的直链烷氧基、含有5-6个碳原子的环烷氧基、1-3个碳原子直链烷氧基取代的1-3个碳原子的直链烷氧基，含有2-4个碳原子的脂肪直链氨基、含有4-6个碳原子的脂肪支链氨基；
[0013]
r3选自含有1-3个碳原子的脂肪直链烷烃基、含有4-7个碳原子的直链烷氧基、含有5-6个碳原子的环烷氧基、1-3个碳原子直链烷氧基取代的1-3个碳原子的直链烷氧基，含有2-4个碳原子的脂肪直链氨基、含有4-6个碳原子的脂肪支链氨基；
[0014]
r4选自h、卤素。
[0015]
本发明含布洛芬-香豆素骨架化合物选自如下化合物：
[0016]
[0017]
[0018]
[0019][0020]
上述含有布洛芬-香豆素骨架化合物通过以下合成路线制得：化合物
ⅰ‑
9a～
ⅰ‑
9o的合成路线按照a-b-c合成步骤进行，化合物
ⅰ‑
10a～
ⅰ‑
10n的合成路线按照a-e-f合成步骤进行，化合物
ⅰ‑
11a～
ⅰ‑
11i的合成路线按照a-b-c-d合成步骤进行；
[0021][0022]
(1)化合物
ⅰ‑
9a～
ⅰ‑
9o在溶剂存在、碱性条件下制备得到；
[0023]
其中碱选用二甲基胺、二乙基胺、二丙基胺、吗啉中的一种；溶剂是二氯甲烷、甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环中的一种或两种；
[0024]
(2)化合物
ⅰ‑
10a～
ⅰ‑
10n在酸性条件下制备得到；
[0025]
其中酸选用醋酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乙酸、丁二酸和草酸中的一种；
[0026]
(3)化合物
ⅰ‑
11a～
ⅰ‑
11i由化合物
ⅰ‑
9a～
ⅰ‑
9o在脱水剂催化作用下发生脱水环化反应引入噁二唑，然后缚酸剂处理得到；
[0027]
其中脱水剂有三氯化铝、三氯氧磷、五氧化二磷中的一种；缚酸剂为碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、氢氧化钠、三乙胺、吡啶中的一种。
[0028]
本发明另一目的是将上述含布洛芬-香豆素骨架化合物应用在制备抗肿瘤药物中。
[0029]
本发明另一目的是将上述含布洛芬-香豆素骨架化合物应用在制备镇痛药物中。
[0030]
本发明优点及技术效果：
[0031]
以环氧化酶(cox)抑制剂布洛芬作为母体，根据药物的拼合原理，通过双酰肼、噁二唑、酰腙键与不同取代基香豆素骨架进行连接，合成一种新型的含有香豆素-布洛芬骨架的化合物，制备方法简单，收率较高，收率80％以上；并对其抗肿瘤活性进行初步研究，体外活性试验表明，本发明提供的含有布洛芬-香豆素骨架化合物有明显的抗肿瘤活性；镇痛试验表明该类化合物的镇痛作用优于布洛芬或与布洛芬相当，因此本发明化合物作为新型抗肿瘤和镇痛药物具有潜在的应用价值，对于新型抗肿瘤药物和镇痛药物的开发具有重要意义。
具体实施方式
[0032]
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容，实施例中方法如无特殊说明均为常规方法，使用的试剂，如无特殊说明均是常规市售试剂或按常规方法配制的试剂；
[0033]
实施例1：化合物9a的制备
[0034]
称取2.06g(10mmol)布洛芬酰肼、2.09g(10mmol)香豆素甲酰氯置于反应器中，然后加入20ml干燥的ch2cl2作为溶剂，在冰浴条件下，边搅拌边缓慢滴入无水(c2h5)3n，直至体系的ph变为弱碱性，tlc法检测反应至原料全部消失，反应液减压浓缩除去溶剂，向浓缩液中加入60ml饱和食盐水，然后再加入60ml乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，无水硫酸钠干燥，再浓缩，用硅胶(200-300目)柱层析，石油醚-乙酸乙酯混合液(体积比1:2)洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥得到目标化合物9a，产率：92％，白固体。
[0035]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.07(s,1h,nh),10.73(s,1h,nh),8.90(s,1h,h-4coumarin),8.04-7.11(m,8h,arh),3.84-3.83(m,1h,ch),2.42(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.85-1.80(m,1h,ch),1.41(d,j＝4.0hz,3h,ch3),0.87(d,j＝8.0hz,6h,2
×
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13
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23h25
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+
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝24.588min,purity 97.48％,uv 330nm.
[0036]
实施例2：化合物9b的制备
[0037]
化合物9b的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6-甲基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9b，产率：96％，白固体。
[0038]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.18(d,j＝8.0hz,1h,nh),9.04(d,j＝8.0hz,1h,nh),
8.73(s,1h,h-4 coumarin),7.49-7.10(m,7h,arh),3.77-3.72(m,1h,ch),2.45-2.41(m,4h,1
×
ch 1
×
ch3),1.87-1.81(m,1h,ch),1.58(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.64,160.70,157.77,152.72,148.69,140.99,137.44,135.83,135.39,129.66,129.44,127.39,118.07,116.66,116.57,45.05,44.60,30.18,22.42,20.77,18.55；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h27
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+
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝25.447min,purity 97.19％,uv 330nm.
[0039]
实施例3：化合物9c的制备
[0040]
化合物9c的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-羟基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9c，产率：82％，黄固体。
[0041]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.02(s,1h,nh),10.63(s,1h,nh),8.82(s,1h,h-4coumarin),7.96-6.82(m,7h,arh),3.82(t,j＝8.0hz,1h,ch),2.41(m,2h,1
×
ch2),1.84-1.79(m,1h,ch),1.39(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.86(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
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23h25
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+
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝22.876min,purity 96.05％,uv 330nm.
[0042]
实施例4：化合物9d的制备
[0043]
化合物9d的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6-氯香豆素甲酰氯，得到目标化合物9d，产率：92％，白固体。
[0044]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.05(d,j＝4.0hz,1h,nh),8.74(s,1h,nh),8.40(d,j＝8.0hz,1h,h-4 coumarin),7.65-7.13(m,7h,arh),3.71(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.89-1.82(m,1h,ch),1.61-1.58(m,3h,ch3),0.91(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
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23h24
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝25.773min,purity 96.37％,uv 330nm.
[0045]
实施例5：化合物9e的制备
[0046]
化合物9e的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6-氟香豆素甲酰氯，得到目标化合物9e，产率：90％，白固体。
[0047]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.07(s,1h,nh),10.73(s,1h,nh),8.85(s,1h,h-4coumarin),7.92-7.09(m,7h,arh),3.81(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.41(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.84-1.77(m,1h,ch),1.38(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.84(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
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23h24
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+
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝24.828min,purity 98.92％,uv 330nm.
[0048]
实施例6：化合物9f的制备
[0049]
化合物9f的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-丁氧基香豆素甲酰氯，得到
目标化合物9f，产率：91％，白固体。
[0050]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.04(d,j＝8.0hz,1h,nh),10.65(d,j＝4.0hz,1h,nh),8.87(s,1h,h-4 coumarin),7.94-7.05(m,7h,arh),4.14(t,j＝8.0hz,1h,ch),3.82(q,j＝8.0hz,2h,ch2),2.42(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.83-1.71(m,3h,1
×
ch 1
×
ch2),1.50-1.43(m,2h,ch2),1.37(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.95(t,j＝8.0hz,3h,ch3)0.87(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
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27h33
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝28.293min,purity 99.50％,uv 330nm.
[0051]
实施例7：化合物9g的制备
[0052]
化合物9g的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6-硝基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9g，产率：84％，黄固体。
[0053]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.02(s,1h,nh),10.63(s,1h,nh),9.01-7.10(m,8h,arh),3.80(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.41(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.84-1.79(m,1h,ch),1.39(d,j＝4.0hz,ch3),0.86(d,j＝4.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
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+
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[0054]
实施例8：化合物9h的制备
[0055]
化合物9h的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6,8-二氯香豆素甲酰氯，得到目标化合物9h，产率：86％，黄固体。
[0056]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.05(s,1h,nh),10.64(s,1h,nh),8.83(s,1h,h-4coumarin),8.15-7.10(m,6h,arh),3.80(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.42(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.85-1.80(m,1h,ch),1.40(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.87(d,j＝4.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:170.82,158.47,157.73,148.32,146.10,139.50,138.52,132.95,128.81,128.74,128.20,127.08 120.88,120.74,120.31,44.22,42.21,29.61,22.16,18.41；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
23h23
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝26.959min,purity 99.15％,uv 330nm.
[0057]
实施例9：化合物9i的制备
[0058]
化合物9i的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6,8-二溴香豆素甲酰氯，得到目标化合物9i，产率：90％，白固体。
[0059]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:10.09(s,1h,nh),8.69(s,1h,h-4 coumarin),8.27(s,1h,nh),8.02-7.14(m,6h,arh),3.70(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.89-1.82(m,1h,ch),1.60(d,j＝4.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝4.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
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23h23
br2n2o4([m+h]
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(m
+
,100),uv 330nm.
[0060]
实施例10：化合物9j的制备
[0061]
化合物9j的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-戊氧基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9j，产率：94％，白固体。
[0062]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.01(d,j＝4.0hz,1h,nh),8.74(s,1h,h-4 coumarin),8.23(d,j＝8.0hz,1h,nh),7.56-6.84(m,7h,arh),4.05(t,j＝8.0hz,2h,ch2),3.70(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.89-1.80(m,3h,1
×
ch 1
×
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×
ch2),0.96-0.90(m,9h,3
×
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13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.45,164.97,158.38,156.92,148.69,141.18,137.20,130.99,129.80,127.42,114.70,112.76,111.97,110.86,69.10,45.05,44.95,30.18,28.56,28.05,22.42,22.40,18.46,14.00；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
28h35
n2o5([m+h]
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+
,100)；anal.rp-uplc tr＝29.468min,purity 96.68％,uv 330nm.
[0063]
实施例11：化合物9k的制备
[0064]
化合物9k的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-己氧基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9k，产率：88％，白固体。
[0065]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.02(d,j＝8.0hz,1h,nh),8.74(s,1h,h-4 coumarin),8.38(d,j＝8.0hz,1h,nh),7.55-6.84(m,7h,arh),4.05(t,j＝8.0hz,2h,ch2),3.70(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.89-1.79(m,3h,1
×
ch 1
×
ch2),1.63-1.58(m,4h,2
×
ch2),1.49-1.44(m,4h,2
×
ch2),1.36-1.34(m,3h,ch3),0.93-0.90(m,9h,3
×
ch3)；
13
cnmr(100mhz,cdcl3)δ:170.47,164.96,161.01,158.37,156.91,148.68,141.14,137.25,130.99,129.77,127.41,114.70,112.76,111.96,100.86,69.12,45.05,44.88,31.49,30.18,28.83,25.60,22.57,22.43,18.48,14.03；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
29h37
n2o5([m+h]
+
):493.2702,found:493.2707(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝30.513min,purity 99.92％,uv 330nm.
[0066]
实施例12：化合物9l的制备
[0067]
化合物9l的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-环己氧基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9，产率：86％，白固体。
[0068]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.04(s,1h,nh),8.72(s,1h,h-4 coumarin),8.46(s,1h,nh),7.54-6.84(m,7h,arh),4.39-4.34(m,1h,ch),3.71(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.45(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.02-1.66 and 1.46-1.32(m,10h,5
×
ch
2 1
×
ch3),1.59(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.47,163.86,161.05,158.41,156.95,148.64,141.11,137.29,131.06,129.75,127.40,115.40,112.54,111.76,101.68,76.64,45.05,44.85,31.37,30.19,25.35,23.54,22.43,18.49；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
29h35
n2o5([m+h]
+
):491.2546,found:491.2549(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝29.335min,purity 99.65％,uv 330nm.
[0069]
实施例13：化合物9m的制备
[0070]
化合物9m的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-甲氧基乙氧基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9m，产率：93％，白固体。
[0071]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.01(d,j＝8.0hz,1h,nh),8.83(s,1h,h-4 coumarin),
8.49(d,j＝4.0hz,1h,nh),7.56-6.89(m,7h,arh),4.21(t,j＝8.0hz,1h,ch),3.71(q,j＝8.0hz,h,ch),3.46(s,3h,ch3),2.45(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.89-1.83(m,1h,ch),1.59(d,j＝4.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝4.0hz,3h,ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.53,164.49,160.91,158.28,156.74,148.60,141.11,137.30,131.03,129.74,127.41,114.69,113.14,112.29,101.10,70.51,68.27,59.32,45.05,44.84,30.17,22.42,18.49；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
26h31
n2o6([m+h]
+
):467.2182；found:467.2182(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝24.565min,purity 99.35％,uv 330nm.
[0072]
实施例14：化合物9n的制备
[0073]
化合物9n的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为6-乙基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9n，产率：94％，白固体。
[0074]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.18(d,j＝8.0hz,1h,nh),9.04(d,j＝8.0hz,1h,nh),8.73(s,1h,h-4 coumarin),7.49-7.10(m,7h,arh),3.77-3.72(m,1h,ch),2.7-2.9(d,2h,ch2),2.45-2.41(m,4h,1
×
ch 1
×
ch3),1.87-1.81(m,1h,ch),1.58(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.64,160.70,157.77,152.72,148.69,140.99,137.44,135.83,135.39,129.66,129.44,127.39,118.07,116.66,116.57,45.05,44.60,30.18,22.42,20.77,18.55；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h27
n2o4([m+h]
+
):421.1971,found:420.1970(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝25.447min,purity 97.19％,uv 330nm.
[0075]
实施例15：化合物9o的制备
[0076]
化合物9o的制备方法同实施例1，不同在于香豆素为7-环戊氧基香豆素甲酰氯，得到目标化合物9o，产率：89％，白固体。
[0077]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.04(s,1h,nh),8.72(s,1h,h-4 coumarin),8.46(s,1h,nh),7.54-6.84(m,7h,arh),4.39-4.34(m,1h,ch),3.71(q,j＝8.0hz,1h,ch),2.45(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.02-1.66 and 1.46-1.32(m,11h,4
×
ch
2 1
×
ch3),1.59(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.47,163.86,161.05,158.41,156.95,148.64,141.11,137.29,131.06,129.75,127.40,115.40,112.54,111.76,101.68,76.64,45.05,44.85,31.37,30.19,25.35,23.54,22.43,18.49；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
29h35
n2o5([m+h]
+
):479.1639,found:479.1639(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝29.335min,purity 99.65％,uv 330nm.
[0078]
实施例16：化合物10a的制备
[0079]
称取2.06g(10mmol)布洛芬酰肼，2.06g(10mmol)3-乙酰基-6-氟香豆素置于反应器中，加入20ml etoh作为溶剂，滴加数滴冰醋酸(hac)作为催化剂，在60℃加热条件下回流搅拌反应，tlc法检测反应至原料全部消失，反应液减压浓缩除去溶剂，向浓缩液中加入60ml饱和碳酸氢钠水溶液，然后再加入60ml乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，无水硫酸钠干燥，浓缩，用硅胶(200-300目)柱层析洗脱，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合液(石油醚:乙酸乙酯体积比＝1:3)，得到目标化合物10a，产率：89％，黄固体。
[0080]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.67 and 8.34(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 33/67),8.08 and 7.57(s,1h,h-4 coumarin),7.33-7.12(m,7h,arh),4.56-4.51 and 3.78-3.76(m,1h,ch),2.48(d,j＝
1.85(m,1h,ch),1.66 and 1.51(d,j＝4.0hz,3h,ch3),0.90(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.33,162.54,155.90,145.09,141.56,140.15,139.00,130.06,129.48,129.27,127.58,123.27,113.63,112.89,101.12,70.64,68.02,59.32,45.12,41.89,30.23,22.45,18.75,14.29；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
27h33
n2o5([m+h]
+
):465.2389,found:465.2389(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝24.668min,tr(enol)＝26.070min,purity 98.75％,uv 330nm.
[0090]
实施例20：化合物10e的制备
[0091]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-6,8-二溴香豆素，得到目标化合物10e，产率：89％，白固体。
[0092]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.92 and 8.43(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 30/70),8.00 and 7.89(s,1h,h-4 coumarin),7.59-7.11(m,7h,arh),4.53-4.48 and 3.78-3.76(m,1h,ch),2.49(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.18 and 1.90(s,3h,ch3),1.89-1.85(m,1h,ch),1.66 and 1.50(d,j＝4.0hz,3h,ch3),0.91-0.90(m,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.45,158.29,149.79,143.68,140.22,139.49,139.02,137.51,130.12,129.90,129.36,127.47,121.36,117.14,111.09,45.11,42.23,30.24,22.44,18.89,14.21；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h25
br2n2o3([m+h]
+
):547.0232,found:547.0235(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝30.123min,purity 99.54％,uv 330nm.
[0093]
实施例21：化合物10f的制备
[0094]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-7-羟基香豆素，得到目标化合物10f，产率：87％，黄固体。
[0095]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.77(s,1h,ar-oh),8.70 and 8.53(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 20/80),7.63 and 7.31(s,1h,h-4coumarin),7.29-6.96(m,7h,arh),3.85-3.80 and 3.76-3.71(m,1h,ch),2.49(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.16 and 1.92(s,3h,ch3),1.87-1.84(m,h,ch),1.68 and 1.50(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:172.54,161.90,160.42,155.36,152.20,142.57,141.79,136.76,130.13,129.73,127.58,120.58,114.34,110.93,103.46,45.68,44.98,30.23,22.31,18.04,14.69；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h27
n2o4([m+h]
+
):407.1971,found:407.1970(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝22.742min,tr(enol)＝23.904min,purity 99.40％,uv 330nm.
[0096]
实施例22：化合物10g的制备
[0097]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-7-二乙基氨基香豆素，得到目标化合物10g，产率：97％，黄固体。
[0098]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.77 and 8.41(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 37/63),8.04 and 7.62(s,1h,h-4 coumarin),7.31-6.43(m,7h,arh),4.63-4.58 and 3.78-3.76(m,1h,ch),3.47-3.38(m,4h,2
×
ch2),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.18 and 1.94(s,3h,ch3),1.88-1.84(m,1h,ch),1.65 and 1.51(d,j＝4.0hz,3h,ch3),1.27-1.19(m,6h,2
×
ch3),0.90(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.36,161.15,156.96,151.22,142.09,140.01,139.14,
129.94,129.67,129.20,127.63,118.98,109.29,108.51,97.00,45.13,44.93,41.77,30.21,22.46,22.31,14.40,12.48；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
28h36
n3o3([m+h]
+
):462.2757,found:462.2760(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝27.011min,tr(enol)＝28.871min,purity 99.24％,uv 400nm.
[0099]
实施例23：化合物10h的制备
[0100]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-6-甲基香豆素，得到目标化合物10h，产率：94％，白固体。
[0101]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.81 and 8.37(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 32/68),8.07 and 7.61(s,1h,h-4 coumarin),7.38-7.12(m,7h,arh),4.60-4.54 and 3.78-3.76(m,1h,ch),2.49-2.47(m,2h,ch2),2.45-2.39(m,3h,ch3),2.19 and 1.91(s,3h,ch3),1.88-1.83(m,1h,ch),1.66 and 1.51(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:178.44,160.18,152.19,145.00,141.44,140.13,138.98,134.43,133.35,130.08,129.29,127.59,.126.66,118.82,116.31,45.14,41.92,30.25,22.48,20.83,18.79,14.40；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
25h29
n2o3([m+h]
+
):405.2178,found:405.2181(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝25.734min,tr(enol)＝27.580min,purity 98.55％,uv 330nm.
[0102]
实施例24：化合物10i的制备
[0103]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-6,8-二氯香豆素，得到目标化合物10i，产率：89％，白固体。
[0104]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.66 and 8.35(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 34/66),8.04 and 7.61(s,1h,h-4 coumarin),7.47-7.12(m,7h,arh),4.53-4.48 and 3.78-3.76(m,1h,ch),2.49(d,j＝4.0hz,2h,ch2),2.17 and 1.90(s,3h,ch3),1.90-1.87(m,1h,ch),1.66 and 1.51(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.91-0.90(d,j＝4.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.24,148.27,139.60,132.22,132.06,130.16,129.91,129.37,128.50,127.47,126.50,126.15,122.53,120.89,104.48,45.09,42.22,30.25,22.45,18.89,14.05；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h25
cl2n2o3([m+h]
+
):459.1242,found:459.1246(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝27.339min,tr(enol)＝29.455min,purity 99.55％,uv 330nm.
[0105]
实施例25：化合物10j的制备
[0106]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基香豆素，得到目标化合物10j，产率：95％，白固体。
[0107]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.85 and 8.33(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 34/66),8.14 and 7.68(s,1h,h-4 coumarin),7.59-7.12(m,8h,arh),4.57-4.55 and 3.78-3.76(m,1h,ch),2.50-2.47(m,2h,ch2),2.18 and 1.91(s,3h,ch3),1.89-1.83(m,1h,ch),1.66 and 1.51(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝4.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.31,159.95,154.03,144.68,141.41,140.22,138.94,132.29,130.10,129.30,128.47,127.58,124.76,119.08,116.63,45.12,41.98,30.26,22.46,22.32,18.79；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h27
n2o3([m+h]
+
):391.2022,found:391.2025(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝
24.710min,tr(enol)＝26.277min,purity 99.55％,uv 330nm.
[0108]
实施例26：化合物10k的制备
[0109]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-6-氯香豆素，得到目标化合物10k，产率：93％，白固体。
[0110]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.65 and 8.42(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 29/71),8.33 and 8.05(s,1h,h-4 coumarin),7.64-7.13(m,7h,arh),4.55-4.50 and 3.78-3.76(m,1h,ch),2.49(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.17 and 1.90(s,3h,ch3),1.87-1.84(m,1h,ch),1.66 and 1.51(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.91(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.28,159.33,152.34,144.08,140.04,138.96,134.28,132.13,130.00,129.35,127.81,127.62,127.50,120.10,118.20,118.02,30.25,22.45,18.85,17.99,14.18；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h26
cln2o3([m+h]
+
):425.1632,found:425.1636(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝19.105min,tr(enol)＝28.065min,purity 96.19％,uv 330nm.
[0111]
实施例27：化合物10l的制备
[0112]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-7-丙基氨基香豆素，得到目标化合物10l，产率：94％，黄固体。
[0113]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.77 and 8.41(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 37/63),8.04 and 7.62(s,1h,h-4 coumarin),7.31-6.43(m,7h,arh),4.63-4.58 and 3.78-3.76(m,1h,ch),3.47-3.38(m,4h,2
×
ch2),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.18 and 1.94(s,3h,ch3),1.88-1.84(m,1h,ch),1.64(d,j＝4.0hz,3h,ch3),1.27-1.19(m,6h,2
×
ch3),0.90(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.36,161.15,156.96,151.22,142.09,140.01,139.14,129.94,129.67,129.20,127.63,118.98,109.29,108.51,97.00,45.13,44.93,41.77,30.21,22.46,22.31,14.40,12.48；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
28h36
n3o3([m+h]
+
):447.2757,found:447.2760(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝27.011min,tr(enol)＝28.871min,purity 99.24％,uv 400nm.
[0114]
实施例28：化合物10m的制备
[0115]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-7-二丙基氨基香豆素，得到目标化合物10m，产率：90％，黄固体。
[0116]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.77 and 8.41(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 37/63),8.04 and 7.62(s,1h,h-4 coumarin),7.31-6.43(m,7h,arh),4.63-4.58 and 3.78-3.76(m,1h,ch),3.47-3.38(m,4h,2
×
ch2),2.87-3.08(m,4h,2
×
ch2),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.18 and 1.94(s,3h,ch3),1.88-1.84(m,1h,ch),1.65 and 1.51(d,j＝4.0hz,3h,ch3),1.27-1.19(m,6h,2
×
ch3),0.90(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
cnmr(100mhz,cdcl3)δ:176.36,161.15,156.96,151.22,142.09,140.01,139.14,129.94,129.67,129.20,127.63,118.98,109.29,108.51,97.00,45.13,44.93,41.77,30.21,22.46,22.31,14.40,12.48；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
28h36
n3o3([m+h]
+
):490.1548,found:490.1548(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝27.011min,tr(enol)＝28.871min,purity 99.24％,uv 400nm.
[0117]
实施例29：化合物10n的制备
[0118]
制备工艺同实施例16，不同在于香豆素为3-乙酰基-7-乙基氨基香豆素，得到目标化合物10n，产率：92％，黄固体。
[0119]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.77 and 8.41(s,1h,nh and oh,keto-enol tautomerism,keto(-conh-)/enol(-hoc＝n-)ratio 37/63),8.04 and 7.62(s,1h,h-4 coumarin),7.31-6.43(m,7h,arh),4.63-4.58 and 3.78-3.76(m,1h,ch),3.47-3.38(m,4h,2
×
ch2),2.46(d,j＝8.0hz,2h,ch2),2.18 and 1.94(s,3h,ch3),1.88-1.84(m,1h,ch),1.64(d,j＝4.0hz,3h,ch3),1.27-1.19(m,6h,2
×
ch3),0.90(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:176.36,161.15,156.96,151.22,142.09,140.01,139.14,129.94,129.67,129.20,127.63,118.98,109.29,108.51,97.00,45.13,44.93,41.77,30.21,22.46,22.31,14.40,12.48；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
28h36
n3o3([m+h]
+
):434.2399,found:433.2365(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr(keto)＝27.011min,tr(enol)＝28.871min,purity 99.24％,uv 400nm.
[0120]
实施例30：化合物11a的制备
[0121]
称取4.10g(10mmol)实施例5得到的化合物9e，加入5ml三氯氧磷，在80℃加热条件下回流搅拌反应6h，tlc法检测反应至原料全部消失，冷却至室温，依次加入饱和食盐水、碳酸氢钠饱和水溶液搅拌5min，然后加入50ml乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，无水硫酸钠干燥，在浓缩，用柱层析洗脱，柱层析硅胶为200-300目，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合液(石油醚:乙酸乙酯＝1:3)，得到目标化合物11a，产率：90％，白固体。
[0122]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.48(s,h,h-4 coumarin),7.39-7.11(m,7h,arh),4.46(q,j＝8.0hz,h,ch),2.45(d,j＝4.0hz,2h,ch2),1.87-1.86(m,1h,ch),1.82(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.28,160.70,155.89,150.75,143.68,141.18,137.14,.129.68,127.10,121.69,121.45,118.67,118.59,114.31,114.07,45.02,37.18,30.17,22.38,19.70；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
23h22
fn2o3([m+h]
+
):393.1614,found:393.1613(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝26.713min,purity 99.27％,uv 330nm.
[0123]
实施例31：化合物11b的制备
[0124]
采用4.27g(10mmol)实施例4制得的化合物9d为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11b，产率：93％，白固体。
[0125]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.48(s,h,h-4 coumarin),7.60-7.11(m,7h,arh),4.46(q,j＝8.0hz,h,ch),2.45(d,j＝4.0hz,2h,ch2),1.87-1.84(m,1h,ch),1.82(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.28,160.63,155.86,152.89,143.36,141.19,137.11,133.89,130.56,129.68,128.18,127.10,118.96,118.40,113.98,45.02,37.18,30.17,22.39,19.89；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
23h22
cln2o3([m+h]
+
):409.1319,found:409.1322(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝27.959min,purity 99.20％,uv 330nm.
[0126]
实施例32：化合物11c的制备
[0127]
采用4.61g(10mmol)实施例8得到的化合物9h为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11c，产率：86％，白固体。
[0128]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.45(s,h,h-4 coumarin),7.69-7.12(m,6h,arh),4.46(q,j＝8.0hz,h,ch),2.45(d,j＝4.0hz,2h,ch2),1.87-1.86(m,1h,ch),1.82(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.52,160.29,154.54,148.83,142.90,141.24,137.01,133.73,130.38,129.69,127.10,126.70,123.01,119.75,114.71,45.02,37.19,30.17,22.37,19.66；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
23h21
cl2n2o3([m+h]
+
):443.0929,found:443.0933(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝29.108min,purity 97.29％,uv 330nm.
[0129]
实施例33：化合物11d的制备
[0130]
采用5.50g(10mmol)实施例9得到的化合物9i为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11d，产率：90％，白固体。
[0131]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.42(s,h,h-4 coumarin),7.98-7.11(m,6h,arh),4.46(q,j＝8.0hz,h,ch),2.45(d,j＝4.0hz,2h,ch2),1.87-1.84(m,1h,ch),1.82(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.49,160.25,154.83,150.36,142.81,141.24,139.27,137.02,130.44,129.69,127.11,120.19,117.68,114.61,111.54,45.02,37.19,30.17,22.38,19.55；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
23h21
br2n2o3([m+h]
+
):530.9919,found:530.9921(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝29.544min,purity 98.94％,uv 330nm.
[0132]
实施例34：化合物11e的制备
[0133]
采用4.64g(10mmol)实施例6得到的化合物9f为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11e，产率：91％，白固体。
[0134]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.45(s,h,h-4 coumarin),7.50-6.83(m,7h,arh),4.45(q,j＝8.0hz,h,ch),4.06(t,j＝8.0hz,2h,ch2),2.44(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.87-1.84 and 1.80-1.78(m,1h,ch),1.81(d,j＝8.0hz,3h,ch3),1.56-1.47(m,2h,ch2),0.99(t,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:169.67,164.47,161.45,156.89,156.79,144.88,141.04,137.40,130.24,129.62,127.10,114.20,111.61,108.76,101.11,68.73,45.03,37.17,30.92,30.15,22.38,19.76,19.15,13.75；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
27h31
n2o4([m+h]
+
):447.2284,found:447.2288(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝30.316min,purity 98.05％,uv 330nm.
[0135]
实施例35：化合物11f的制备
[0136]
采用4.06g(10mmol)实施例2得到的化合物9b为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11f，产率：92％，白固体。
[0137]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.47(s,h,h-4 coumarin),7.45-7.11(m,7h,arh),4.46(q,j＝8.0hz,h,ch),2.45-2.43(m,5h,1
×
ch
2 1
×
ch3),1.87-1.84(m,1h,ch),1.82(d,j＝4.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.01,161.15,156.58,152.78,144.89,141.11,137.27,135.20,135.04,129.65,128.82,127.12,117.78,116.66,112.65,45.03,37.17,30.17,22.39,20.75,19.74；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
24h25
n2o3([m+h]
+
):389.1865,found:389.1867(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝27.415min,purity 99.83％,uv 330nm.
[0138]
实施例36：化合物11g的制备
[0139]
采用3.92g(10mmol)实施例1得到的化合物9a为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11g，产率：87％，白固体。
[0140]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.53(s,h,h-4 coumarin),7.66-7.11(m,8h,arh),4.46(q,j＝8.0hz,h,ch),2.45(d,j＝4.0hz,2h,ch2),1.87-1.84(m,1h,ch),1.82(d,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝8.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:170.06,161.01,156.29,154.60,144.81,141.12,137.26,134.02,129.66,129.19,127.10,125.16,118.03,116.95,112.88,45.03,37.18,30.15,22.38,19.73；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
23h23
n2o3([m+h]
+
):375.1709,found:375.1709(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝26.348min,purity 99.49％,uv 330nm.
[0141]
实施例37：化合物11h的制备
[0142]
采用4.78g(10mmol)实施例10得到的化合物9j为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11，产率：86％，黄固体。
[0143]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.44(s,h,h-4 coumarin),7.50-6.82(m,7h,arh),4.45(q,j＝8.0hz,h,ch),4.06(t,j＝8.0hz,2h,ch2),2.44(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.92-1.83(m,3h,1
×
ch 1
×
ch2),1.81(d,j＝8.0hz,3h,ch3),1.49-1.37(m,4h,2
×
ch2),0.94(t,j＝8.0hz,3h,ch3),0.89(d,j＝4.0hz,6h,2
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:169.60,164.46,161.42,156.84,156.76,144.87,141.01,137.41,130.29,129.61,127.10,114.18,111.58,108.67,101.9,69.03,45.02,37.14,30.15,28.58,28.07,22.39,19.77,13.99；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
28h33
n2o4([m+h]
+
):461.2440,found:461.2443(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝31.467min,purity 99.89％,uv 330nm.
[0144]
实施例38：化合物11i的制备
[0145]
采用4.92g(10mmol)实施例11得到的化合物9k为原料，反应过程同实施例30，得到目标化合物11i，产率：94％，白固体。
[0146]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.45(s,h,h-4 coumarin),7.50-6.82(m,7h,arh),4.44(q,j＝8.0hz,h,ch),4.05(t,j＝8.0hz,2h,ch2),2.44(d,j＝8.0hz,2h,ch2),1.87-1.75(m,6h,1
×
ch 1
×
ch
2 1
×
ch3),1.49-1.44(m,2h,ch2),1.37-1.35(m,4h,2
×
ch2),0.93-0.88(m,9h,3
×
ch3)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:169.64,164.46,161.44,156.87,156.76,144.86,141.02,137.41,130.25,129.61,127.10,114.19,111.60,108.72,101.11,69.05,45.03,37.16,31.49,30.14,28.86,25.59,22.55,22.38,19.77,13.99；hrms(esi)m/z:anal.calcd for c
29h35
n2o4([m+h]
+
):475.2597,found:475.2592(m
+
,100)；anal.rp-uplc tr＝32.963min,purity 99.35％,uv 330nm.
[0147]
实施例39：cck-8法检测上述实施例制得的含有布洛芬-香豆素骨架化合物的抗肿瘤活性
[0148]
取对数生长期的细胞，弃去旧的培养基，用pbs清洗三次以洗净培养基及细胞代谢废物，然后加入1ml 0.25％胰蛋白酶，37℃下消化1-2min，消化完毕，加入1-2ml完全培养基终止消化，并用移液轻轻将贴壁细胞吹打下来，转移至15ml离心管内，1000r/min离心5分钟，离心完毕弃去上清，加入1-2ml完全培养基，通过移液吹打使细胞悬浮，吸取10μl细胞悬液于细胞计数板上，盖上盖玻片，在显微镜下进行计数。在96孔板中心55个孔中接种上一步制备好的细胞悬液(100μl/孔)，同时设置5个孔只添加培养基作为空白组，在37℃、5％
co2培养箱中培养24h，之后吸去培养基，加入pbs清洗，加入含有5种不同浓度受试化合物的培养基，每种浓度设立5个复孔，设置5个接种过细胞的复孔只加培养基作为对照组；加完药后培养48h，弃去孔内培养基，向每个孔中加入含有10μl增强型cck-8溶液的培养基，转入培养箱中在37℃、5％co2条件下孵育4h；使用酶标仪测量其在450nm处的吸光度(a)，重复测量三次取其平均值。
[0149]
某种浓度下受试化合物的抑制率＝[1-(a
药物-a
空白
)/(a
对照-a
空白
)]
×
100％；将浓度和抑制率数据导入spss软件中，即可算出该药物的ic
50
值；
[0150]
通过cck-8法检测了化合物对hepg2细胞以及hela细胞的增殖抑制作用，检测结果见表1、表2、表3：
[0151]
表1化合物(9a-9m)对hepg2和hela的增殖抑制活性
[0152]
[0153][0154]
表2化合物(10a-10k)对hepg2和hela的增殖抑制活性
[0155][0156][0157]
表3化合物(11a-11i)对hepg2和hela的增殖抑制活性
[0158][0159]
从表中可以看出：以吉非替尼为阳性对照，本发明含布洛芬-香豆素骨架化合物对hepg2肝癌细胞和hela宫颈癌细胞都有潜在的抗肿瘤活性，9e、9g、9i、10d、10e、10f、10h、10i、10k、11g活性较好，其中10e最为优异，抑制两种癌细胞的活性均优于布洛芬和常用抗肿瘤药物吉非替尼。
[0160]
实施例40：醋酸扭体法检测上述实施例制得的含布洛芬-香豆素骨架化合物的镇痛活性
[0161]
取24只小鼠，随机分成阴性对照组、阳性对照组、给药组，每组8只，给药组按照小鼠体重2mg/10g给药剂量对小鼠灌胃化合物溶液(4mg/ml)，阳性对照组按照小鼠体重1mg/10g的给药剂量对小鼠灌胃布洛芬溶液(4mg/ml)，阴性对照组小鼠灌胃等量生理盐水，1.5h后腹腔注射0.7％冰醋酸0.1ml/10g，观察记录小鼠在注射冰醋酸后20min内的扭体次数，平行做三次，计算镇痛率；
[0162]
镇痛率(％)＝(阴性对照组小鼠扭体反应次数-给药组小鼠扭体反应次数)/阴性对照组小鼠扭体反应次数
×
100％，结果见表4；
[0163]
表4化合物镇痛率
[0164]
化合物标准差t检验镇痛率9a5.94620.0110301536.25％9d6.86610.0006649580.00％
9f6.31890.0300735531.25％9g5.25760.036716126.25％9h8.29800.760185875.00％9i9.51600.0122601761.88％9j4.24260.0001865860.00％9m8.01330.0867064928.75％10a8.68790.0071061057.71％10b6.18180.3920790211.25％10e5.81720.0001161584.38％10g6.33100.0072799357.30％10h6.49040.0208859734.38％11b6.02230.35814179-11.88％11e5.63150.0798713622.50％11f4.97850.0201330228.75％11h8.33130.0114509356.88％生理盐水3.7033
‑‑‑‑
布洛芬3.25141.26574
×
10-7
85.00％
[0165]
从表中数据可以看出：本发明化合物均具有镇痛活性，其中10e和9d的镇痛效果较好与布洛芬镇痛效果相当。

技术特征：

1.结构式如下式所示的含布洛芬-香豆素骨架化合物：其中：y选自r1选自h、卤素；r2选自h、卤素、ch3、oh、no2、含有1-3个碳原子的脂肪直链烷烃基、含有4-7个碳原子的直链烷氧基、含有5-6个碳原子的环烷氧基、1-3个碳原子直链烷氧基取代的1-3个碳原子的直链烷氧基，含有2-4个碳原子的脂肪直链氨基、含有4-6个碳原子的脂肪支链氨基；r3选自含有1-3个碳原子的脂肪直链烷烃基、含有4-7个碳原子的直链烷氧基、含有5-6个碳原子的环烷氧基、1-3个碳原子直链烷氧基取代的1-3个碳原子的直链烷氧基，含有2-4个碳原子的脂肪直链氨基、含有4-6个碳原子的脂肪支链氨基；r4选自h、卤素。2.根据权利要求1所述的含布洛芬-香豆素骨架化合物，其特征在于，含布洛芬-香豆素药效骨架化合物为如下任一结构：
3.权利要求1所述的含布洛芬-香豆素骨架化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。4.权利要求1所述的含布洛芬-香豆素骨架化合物在制备镇痛药物中的应用。

技术总结

本发明公开了一类含布洛芬-香豆素骨架化合物，其结构式如下：此类化合物基于布洛芬和不同取代基的香豆素为药效骨架，以双酰肼、酰腙、噁二唑为键桥键接制得，制备方法简单，收率均在80％以上，初步抗肿瘤活性试验表明，该类化合物对HepG2肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞的抑制活性表现较突出，化合物9e、9i、10d、10i、10e、10k对HepG2肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞的活性均优于常用抗肿瘤药物吉非替尼，其中10e对HepG2肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞的活性最优，镇痛试验表明该类化合物的镇痛作用优于布洛芬或与布洛芬相当。布洛芬或与布洛芬相当。