最优考马斯亮蓝染Protocol

考马斯亮蓝染

推荐选用前三种染方法,另有传统考马斯亮蓝染法和网上经验,染效果不好,不推荐使用,仅供参考;见后页比对照片

操作步骤：

1、取出SDS-PAGE凝胶,经超纯水漂洗；以下每步操作皆在摇床上进行;

2、固定：将凝胶放入相应的固定液中,固定1小时；

3、染：取出凝胶,放入相应的染液中,过夜染；也可依实际情况缩短时间

4、脱胶体法&改良法：凝胶放入纯水中洗脱,换液数次；

脱Neuhoff法：取出凝胶,用 M Tris-H3PO4缓冲液漂洗2分钟;再用25%乙醇淋洗＜1 min;然后再用10%乙酸中在室温脱2小时即可;

试剂的配制：

1、胶体考马斯亮蓝染法colloidal Coomassie brilliant blue,cCBB：

固定液：40%甲醇、10%乙酸

染液：%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇

脱液：H2O

2、改良考马斯亮蓝染法modified Coomassie brilliant blue,mCBB：

固定液：40%甲醇、10%乙酸

染液：10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇着1小时即可;

脱液：H2O

3、Neuhoff染法：

固定液：12%三氯醋酸

染液：2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇;染时,取一定体积的染液,加入1/4体积的甲醇;

脱所需： M Tris-磷酸缓冲液、25%乙醇、10%醋酸

4、传统考马斯亮蓝染法：

固定液：%甲醇、%乙酸

染液：%甲醇、%乙酸、% CBB-G250

脱液：5%甲醇、%乙酸

5、网上方法：

固定液：40%甲醇、10%乙酸

染液：30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250

脱液：30％甲醇,10％乙酸

比对照片：每块胶左道是Marker质量原因,未跑开 ˇˇ 上样量5μl,右道是BSA分子量68kDa,上样量为3μg.

本文发布于:2024-09-20 15:26:42，感谢您对本站的认可！

标签：染色凝胶放入染色法乙醇床上取出

留言与评论（共有 0 条评论）