2.革兰氏染法?? (1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染液,经1—2min,水洗。 (2)加革兰氏碘溶液于抹片上媒染,作用1—3min,水洗。 (3)加95%酒精于抹片上脱,约30s---1min,水洗。 (4)加碱性复红液(或沙黄或稀释石炭酸复红液)复染10---30s,水洗。 (5)吸干或烘干,镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫,革兰氏阴性菌呈红。 3.抗酸性染法 (2)用3%盐酸酒精脱,直至标本无脱出为止,充分水洗。 (3)用美蓝染液复染约1min,水洗。 以下方法也可:即在干燥、固定好的抹片上,滴加石炭酸复红染1min,水洗,用1%美蓝染液复染约20s,水洗。 对光观察,标本务必全呈蓝,在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红,非抗酸性细菌和背景呈蓝。 4.瑞氏染法 (1)抹片自然干燥后,滴加瑞氏染液于其上,为了避免很快变干,染液可稍多加些,或看情况补充滴加,经1—3min,加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液,轻轻晃动玻片,使与染液混匀,约3min左右,直接用水冲洗(不可先将染液倾去),吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝,组织、细胞等物呈其它颜。 (2)另一方法? 抹片自然干燥后,按涂抹点大小,盖上一块略大的清洁滤纸片,在其上轻轻滴加染液,至略浸过滤纸,并看情况进行补滴,维持不使变干;染3--5min,直接用水冲洗,吸干或烘干、镜检。此法使染液经滤纸过滤,可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5.姬姆萨染法 (1)于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染液原液,即稀释成为常用的姬姆萨氏染液。 (2)抹片经甲醇固定干燥后,在其上滴加足量的染液或将抹片浸入盛有染液的染缸中,染30min,或者染数小时至24h,取出水洗,吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青,组织、细胞等呈其它颜。视野常呈淡红。 6.克利特氏荚膜染法 (1)染液配制 ①美蓝溶液? 美蓝1g,95%酒精10ml,蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内,再加蒸馏水混合。 ?②碱性复红溶液? 碱性复红0.03g,95%酒精1ml,蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内,再加蒸馏水混合。 (2)染法 ①涂片经火焰固定后,滴加美蓝溶液,将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗,以碱性复红溶液复染15—30s。 ?③水洗后、吸干、镜检。 ④染后,菌体呈蓝,荚膜呈红。 ?7.结晶紫福尔马林荚膜染法 ?(1)染配制 ?①结晶紫福尔马林染液? 结晶紫10g,福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解,隔夜过滤。 ②碱性复红溶液? 见前:克利特氏荚膜染法 (2)染法 ①涂片用结晶紫福尔马林染液染—1min。 ?②水洗后,以碱性复红染液复染15—30s。 ?③水洗、吸干、镜检。 ④染后,菌体呈深蓝,荚膜呈淡红。 ?8.番红染液荚膜染法 ?(1)染液配制? 番红(或沙黄)0.7g,95%酒精20ml,蒸馏水15ml。 ?将番红溶解于酒精内,再加蒸馏水混合而成。 (2)染法 ①涂片滴加番红染液,将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。 ?②水洗、吸干、镜检。 ③染后,菌体呈暗红,荚膜呈淡黄。 ?9.赫斯氏荚膜染法 ?(1)染液配制? ?①龙胆紫酒精溶液?? 龙胆紫酒精饱和液5ml,蒸馏水95ml。 ?②硫酸铜水溶液?? 硫酸铜20g,蒸馏水100ml。 ?(2)染法 ?①涂片加热固定,将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。 ?②用硫酸铜液代替水冲洗染液,用吸水纸吸干、镜检。 ?③染后,菌体呈深紫,荚膜呈浅蓝。 ?10.安沙尼氏荚膜染法 ?(1)染液配制 ①1%结晶紫水溶液。 ②20%硫酸铜水溶液。 ?(2)染法 ①将涂片在空气中自然干燥。 ?②以1%结晶紫水溶液染2min(不必加热),再以20%硫酸铜代水冲洗染液。 ③吸干、镜检。 ?④染后,菌体呈紫,荚膜呈淡紫。 ?11.苗列尔氏芽孢染法 ?(1)染液配制? ①媒染液? 5%铬酸液(铬酸5ml,加蒸馏水95ml) ?②染液? 石炭酸复红液 ?③脱液? 2%硫酸液(纯硫酸2ml,加蒸馏水98ml) ④复染液 碱性美蓝 (2)染法 ?涂片,干燥,火焰固定,用媒染液染10min,充分水洗,用炭酸酸复红液加温染(最好在标本上覆盖一张滤纸)2min,水洗,用脱剂脱10s,水洗,用美蓝液复染1min,水洗,干燥、镜检。 ?? 结果:芽孢呈红,菌体呈蓝。 12.孔雀绿沙黄芽孢染法 (1)染液? 5%孔雀绿液,%沙黄液。 (2)染法 涂片火焰固定,加5%孔雀绿液微微加温染30s—1min,至发生蒸气为止,待冷后水洗,再加沙黄液复染30s,水洗,干燥后镜检。 结果:芽孢呈绿,菌体其它部分呈淡红。 13.李富逊氏鞭毛染法 (1)染液配制?? 5%钾明矾水溶液10ml,20%鞣酸水溶液10ml,1%碱性复红酒杯精溶液10ml。 将上述三种溶液按次混合配成,如发生沉淀,用其上清液,本染液保存1周,复染液可用下列染液:美蓝,硼砂 ,蒸馏水100ml。 (2)染法 ①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天,用镊子取出后以清水冲洗干净(冲洗时切勿用手捏玻片),然后斜插于木架上,置37度温箱中任其干燥后备用。 ?②菌液最好用10—16h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落,则用接种环挑取少许,置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液,切忌用接种环多作搅动,以免损伤鞭毛。 ?③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环,轻置于玻片一滴,玻片作倾斜放置,使菌液沿玻片面顺向下流,自成一薄菌膜,置37度恒温箱内干燥。 ?④将上述染液滴加于涂片上,染10—15min,染时间的长短随室温的高低而不同,如在冬季,可置于37度温箱内染。 ⑤轻轻地水洗1—2min。 ?⑥在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检,细菌菌体及鞭毛呈红。 ?⑦如需复染,则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后,染10min,用水冲洗,干燥后作镜检。菌体呈蓝,鞭毛呈红。 ?⑧良好的鞭毛染涂片,应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。 ?14.过碘酸锡夫氏真菌染法 (1)染液配制???? 甲液:1%过碘酸液???? 乙液:碱性复红,95%乙醇5ml,蒸馏水95ml???? 丙液:亚硫酸氢锌1g,酒石酸 ,蒸馏水100ml ?丁液:%饱和液 ?(2)染法 ?将标本在甲液中染10min,水洗后再用乙液染2—3min,置丙液中染30—40min,至玻片呈淡红为合适,水洗1min,再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄液体为止。脱水、透明,树胶封固后镜检。 ?结果:真菌组织染鲜红。 ?15.中国蓝真菌染法 (1)染液?? 纯石炭酸20ml,乳酸20ml,甘油40ml,蒸馏水20ml。 将上述成分混合,加温溶解后加入中国蓝,混合振荡即成。 (2)染法 先将染液加在载玻片上,将培养物被检样放在玻片上的染液中,涂匀后覆盖盖玻片,微加温后镜检。 16.黑素螺旋体染法 (1)染液配制? 黑素5g,蒸馏水50ml。混合加热使其溶解,在溶液中加1%福尔马林作防腐剂,临用前过滤。 (2)染法? 取被检物一滴,墨汁一滴混合后涂片,室温下放干燥后镜检。 结果:螺旋体无发亮,背景呈黑。 17.墨汁螺旋体染法 (1)染液? 印度墨汁5ml,蒸馏水20ml,震荡混合而成。 (2)染法? 取被检物一滴,墨汁一滴混合后涂片,室温下放干燥后镜检。 结果:螺旋体无发亮,背景呈黑。 ? |
本文发布于:2024-09-20 21:18:02,感谢您对本站的认可!
本文链接:https://www.17tex.com/tex/1/93038.html
版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系,我们将在24小时内删除。
留言与评论(共有 0 条评论) |