一套鉴定筛选耐热瓠瓜砧木的方法

本发明属于生物领域，特别涉及瓠瓜类型砧木材料的耐热性鉴定方法。

瓠瓜(Bottle gourd，Lagenaria siceraria(Molina)Standl.)，别名瓠子、扁蒲、葫 芦，隶属葫芦科葫芦属一年生攀援草本植物。它根系发达，作为黄瓜、西瓜和甜瓜等重要瓜 类作物的嫁接砧木，能有效提高植株对不良环境的适应性。在我国，大部分地区夏季露地气 温在35℃以上，保护地气温则高达40℃以上，高温胁迫是制约瓜类作物夏季栽培和周年供应 的主要因素。选育耐热性强的瓠瓜砧木品种，通过嫁接提高瓜类作物耐热性，是解决上述问 题的有效途径。

建立可靠的耐热性鉴定方法，是快速筛选耐热材料进行品种选育的基础。当前瓠瓜砧木 耐热性鉴定多运用田间自然鉴定法，该法易受环境影响，准确性低，耗时长，不能满足品种 选育过程中对快速筛选目的材料的要求。随着西瓜、甜瓜、黄瓜等瓜类作物市场需求不断增 大，嫁接越夏栽培技术逐年推广，耐热瓠瓜砧木品种的选育日益迫切。为此，发明一套利用 人工胁迫、结合统计手段，快速、准确、可靠的耐热性鉴定筛选方法已成为当务之急。

针对以上问题，本发明提供一套鉴定筛选耐热瓠瓜砧木的方法，即利用瓠瓜高温种子发 芽和苗期电导率测定，计算相对发芽率(40‑45℃/30‑35℃)、相对发芽指数(40‑45℃/30‑35℃)和相对电导率(6h/0h) 三项鉴定指标，应用SPSS13.0软件聚类功能，进行瓠瓜耐热种质鉴定筛选。

本发明的优点：与广占田地、耗费人工的常规田间自然鉴定相比，本发明鉴定流程简单， 耗时短，成本低，逆境可控，结果更准确，且对于批量材料的筛选更方便。

图1为本发明实施例中37份瓠瓜高温胁迫下相对发芽率(40‑45℃/30‑35℃)、相对发芽指数(40‑45℃/30‑35 ℃)和相对电导率(6h/0h)耐热性聚类分析图。

以37份瓠瓜耐热性鉴定，筛选耐热材料为例，对本发明具体实施方式进行说明。

(1)瓠瓜高温种子发芽

选取37份瓠瓜材料饱满无病虫正常种子各90粒，首先在55‑60℃水中温烫20min，再在 30℃温水中浸种12h。浸种结束后，取出种子沥干水分，均匀摆放在铺有四层纱布的培养皿 (PL‑9)内，发芽密度为15粒/培养皿，用去离子水保湿。分作两组(45粒/组，3培养皿/ 组)，分别在30‑35℃和40‑45℃条件下黑暗发芽。按照国际种子检验规程1996版，以种子胚 芽长达种子一半时为发芽标准。每天用去离子水冲洗种子1次，并统计当天发芽数，发芽于 两周后停止。依照下列公式，计算30‑35℃和40‑45℃两个温度下瓠瓜种子的发芽率和发芽指 数：

发芽率＝(种子总发芽数/供试种子数)×100％

发芽指数＝∑(GT/DT)，其中，GT是在时间t日的发芽数，DT是相应的发芽日数。 依照下列公式，计算40‑45℃下瓠瓜种子的相对发芽率和相对发芽指数：

相对发芽率(40‑45℃/30‑35℃)＝发芽率(40‑45℃)/发芽率(30‑35℃)

相对发芽指数(40‑45℃/30‑35℃)＝发芽指数(40‑45℃)/发芽指数(30‑35℃)

(2)苗期高温电导率测定

播种37份瓠瓜材料各16株，待植株长至两叶一新(第3叶为幼叶)，转入光照培养箱， 在45‑50℃条件下热处理6h。分别在热处理前和处理6h取样，测定电导率。每次取样避开主 叶脉用直径为0.6cm打孔器随机取圆片，每株取圆片一个，重复3次。取样后，首先测定的 电导率值记为EC0；45℃水浴15min，冷却后测定值为EC1；100℃水浴15min，冷却后测定值 为EC2。根据下列公式计算处理前和处理6h电导率：

电导率＝(EC2‑EC0)/(EC1‑EC0)

依照下列公式，计算处理6h的相对电导率：

相对电导率(6h/0h)＝电导率(6h)/电导率(0h)

(3)SPSS13.0软件聚类功能进行瓠瓜耐热种质鉴定筛选。

利用SPSS13.0软件聚类程序：Analysis——Classify——Hierarchical Cluster，选择 37份瓠瓜材料相对发芽率(40‑45℃/30‑35℃)、相对发芽指数(40‑45℃/30‑35℃)和相对电导率(6h/0h)作为变量， 进行聚类。相对发芽率和相对发芽指数与耐热性呈正比，相对电导率与耐热性呈反比。依照 聚类结果，鉴定筛选耐热材料4份，分别是23、24、27和30号；6、26、7、20、11、21和 5号七份材料被鉴定为不耐热；其余材料耐性适中。