慢性咽炎的中药组合物的检测方法

慢性咽炎的中药组合物的检测方法

本发明为分案申请，原案申请号为200810056634.3，原案申请日为2008年1月23日， 原案名称为：慢性咽炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的检测方法，特别涉及一种慢性咽炎的中药组合物的检 测方法，属于中药技术领域。

背景技术

慢性咽炎是一种常见病，为慢性感染所引起的弥漫性咽部病变，主要是咽部粘膜炎症。 多发于成年人，其主要病因有屡发急性咽炎、长期粉尘或有害气体刺激、烟酒过度或其它不 良生活习惯、鼻窦炎分泌物刺激、过敏体质或身体抵抗力减低等。慢性咽炎也可以是某些全 身性疾病的局部表现，如贫血、糖尿病、肝硬化及慢性肾炎等。在城市居民中发病率占咽喉 疾病的10％至20％左右。因其病程长，症状顽固，短期难见显效，故不易治愈。

慢性咽炎一般不需要使用抗生素，因为慢性咽炎并非细菌感染。西医一般注重局部 用药，如：嗽口药，用2％硼酸溶液，3％盐水和1∶5000呋喃西林溶液反复嗽口，或者用2 ％碘甘油、5％强蛋白银液途于咽壁，或用碘含片、杜米芬、薄荷等含于口腔内等，有一定缓 解症状之功能，但一般很难治愈，疗效较差。

中医本病着重于治本，按辩证分型法用药，疗效较好。《素问·阴阳别论》云：“一 阴一阳结谓之喉痹。”是对本病的最早论述。历代医家有较多的发挥，对喉痹的病因病机从 不同方面作了探讨，归纳为痰热、虚火、津不上承等。常用药物有利咽灵片、清咽甘露丸、 青梅丸、利咽茶及一些口含片，还有中药喷雾疗法，均效果较好，所以进一步发挥中医药治 疗本病的优势，提供一种效果更好的中药组合物是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于慢性咽炎的中药组合物；

本发明的另一目的在于提供该中药组合物的制备方法；

本发明的第三个目的是提供该中药组合物的质量控制方法。

本法明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明所述慢性咽炎的中药组合物由以下重量份原料药组成：

本发明所述慢性咽炎的中药组合物，优选以下重量份原料药组成：

本发明所述慢性咽炎的中药组合物，还可以优选以下重量份原料药组成：

本发明中药组合物以养阴，润肺着力，而取清热解毒、清利咽喉、疏风散热、镇咳化痰， 利咽止痒之功，对素体阴虚，感受风热之邪，易从燥化之症甚宜，宜治急、慢性咽炎所致咽 喉红肿、咽干、咽痒、口干、口渴、咳嗽、发热、恶风、汗出及刺激性咳嗽、音哑，失音等 症。

本发明所述中药组合物，可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴 丸剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着剂、 粘合剂、润滑剂、基质等。

本发明所述的中药组合物片剂的制备方法为：

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮1～3 次，每次2～4小时，合并煎液，静置20～30小时，取上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70 ℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，在60℃以下减压干燥，粉碎至80目，加入药粉重量8％的 蔗糖，制成颗粒，喷加薄荷油，加颗粒重量0.5％的硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包糖 衣，即得。

本发明中药组合物的质量控制方法包括以下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种 或几种：

(1)款冬花的定性检测

取本发明药物制剂内容物，加乙醚使溶解，超声处理，过滤，滤液挥至1.5ml，作为供试品 溶液。

取款冬花对照药材，制成对照药材溶液。

照薄层谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点与同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开， 取出，晾干，喷以香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药 材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

(2)木蝴蝶的定性检测

取本发明药物制剂内容物，加无水乙醇超声处理，过滤，滤液蒸干，加无水乙醇溶解作 为供试品。

取木蝴蝶对照药材，制成对照药材溶液。

照薄层谱法试验，吸取上述样品溶液、对照药材溶液，分别点与同一硅胶G薄层板上， 以展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱 中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

(3)麦冬的定性检测

取本发明药物制剂内容物，加氯仿-甲醇混合液浸泡，超声处理，过滤，蒸干，用氯仿溶 解，作为供试品溶液。

取麦冬对照药材，剪碎，制成对照药材溶液。

照薄层谱法试验，吸取上述溶液，分别点与同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开， 取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材 谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

(4)正丁醇浸出物的定量检测：

取本发明药物制剂内容物，精密称定，精密加入甲醇，称定重量，置水浴上加热回流，放冷， 用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水使溶解，用 水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥，移置干燥 器中，放置，迅速精密称定重量，计算，即得。

(5)哈巴俄苷的定量检测：

照高效液相谱法测定。

谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以1％醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为278nm。理论板数按哈巴俄苷峰计算 应不低于5000。

对照品溶液的制备 精密称取哈巴俄苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物内容物，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入30％甲醇，密塞，称定重量，浸泡后，超声处理，放冷，再称定重量，用30％ 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相谱仪，测定，即得。

(6)梓醇的定量检测：

照高效液相谱法测定。

谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液 为流动相；检测波长为210hm。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备 精密称取梓醇对照品适量，加流动相制成对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备取本发明中药组合物相内容物，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇，称定重量，加热回流提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明中药组合物的质量控制方法包括以下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种 或几种：

(1)款冬花的定性检测

取相当于原料药10.5g的本发明药物制剂，研细，加乙醚25ml使溶解，超声处理40分钟， 过滤，滤液挥至1.5ml，作为供试品溶液。另取款冬花对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 照薄层谱法试验，吸取上述两种溶液各25μl，分别点与同一硅胶G薄层板上，以4∶1比例 正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显 清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

(2)木蝴蝶的定性检测

取相当于原料药4g的本发明药物制剂，研细，称取1g，加无水乙醇50毫升超声10分钟， 过滤，滤液蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为供试品。另取木蝴蝶对照药材2g，加无水乙醇 50毫升超声10分钟，过滤，滤液蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为对照药材溶液。照薄层 谱法试验，吸取上述样品溶液15μl，对照药材溶液5μl，分别点与同一硅胶G薄层板上， 以9∶1比例环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风 吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

(3)麦冬的定性检测

取相当于原料药10.5g的本发明药物制剂，研细，加70∶30比例的氯仿-甲醇20毫升，浸 泡3小时，超声30分钟，过滤，蒸干，用氯仿0.5毫升溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对 照药材2g，剪碎，以70∶30比例的氯仿-甲醇20毫升，浸泡3小时，超声30分钟，过滤， 蒸干，用氯仿0.5毫升溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法试验，吸取上述溶液分别10μl， 分别点与同一硅胶G薄层板上，以5∶1比例正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的 位置上，显相同颜的斑点。

(4)正丁醇浸出物的定量检测

取相当于原料药8.5g的本发明药物制剂，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇50ml， 称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml，置干 燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml， 合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30 分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

本发明中药组合物按干燥品计算，含正丁醇浸出物不得少于5.0％。

(5)哈巴俄苷的定量检测：

照高效液相谱法测定。

谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以1％ 醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为278nm。理论板数按哈巴俄 苷峰计算应不低于5000。

时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)

0～20 20→50 80→50

20～25 50→20 50→80

对照品溶液的制备 精密称取哈巴俄苷对照品适量，加30％甲醇制成每1ml含10μg的溶液， 即得。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物相当于原料药4.0g，研细，取约1.0g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡1小时后，在功率500W，频 率40kHz下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 取续滤液，即得。

测定法 别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明中药组合物相当于原药材4.0g，含哈巴俄苷(C₂₄H₃₀O₁₁)不得少于0.18mg。

(6)梓醇的定量检测

照高效液相谱法测定。

谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1∶99比例乙腈-0.1％ 磷酸溶液为流动相；检测波长为210nm。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备 精密称取梓醇对照品适量，加流动相制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物相当于原料药4.0g，研细，取约1.0g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1.5小时，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动 相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明中药组合物相当于原料药4.0g，含梓醇(C₁₅H₂₂O₁₀)不得少于0.25mg。

具体实施方式

以下实施例及试验例用于进一步说明但不限于本发明

试验例1 工艺研究试验

确定本发明中药组合物的制备工艺时，根据各药味所含有效成份的特点及节约能源的考 虑，确定玄参、百部(制)、天冬、牡丹皮、麦冬、木蝴蝶、地黄、板蓝根、青果、蝉蜕水提 取即可，款冬花采用全粉碎入药。辅料的种类和用量选择、包衣工艺的具体量化，对提高本 发明药物的质量稳定性、安全性、生产的时效性及对能源的节约都有显著性意义。

一、加水量试验

按处方量配置三份药材，每份含玄参170g、百部(制)130g、天冬120g、牡丹皮50g、 麦冬70g、木蝴蝶70g、地黄70g、板蓝根210g、青果140g、蝉蜕50g，分为三组做实验：第 一组加水量分别为10倍量、8倍量；第二组加水量为8倍量，6倍量；第三组加水量为6倍量，4 倍量。以出膏量为指标确定加水量。结果见表1

表1：加水量试验结果

以上结果表明：以出膏量为指标加水量8倍量、6倍量提取基本完全，根据实际生产需 要加水量确定为8倍量、6倍量。

二、加入辅料的种类和用量

称取按照上述优选工艺提取原料药材，提取液浓缩后，将款冬花药材粉碎至100目加入， 混匀，干燥，粉碎至80目，加入适量辅料，制粒，干燥，整粒，再加入0.5％硬脂酸镁，压 片，即得。通过比较压片的难易、片剂外观，选择合适的辅料及辅料用量比例，结果见下表 2：

表2辅料选择试验结果

从上表可以看出，制备片剂时选择加入辅料为蔗糖，加入量为1∶0.08，即可以达到片 剂制备的要求。即加入辅料蔗糖，其处方用量为17g。

三、包衣工艺

1隔离层：将素片置于包衣锅中滚动，加入混合浆(35％桃胶∶70％糖浆＝1∶5)使均匀粘附 于片面上(素片∶混合浆＝50g∶1ml)，吹热风干燥，为防止药片相互粘连或粘附在包衣锅上， 加入滑石粉，热风40～50℃下干燥，重复操作两次。

2粉衣层：使片子继续在包衣锅中滚动，加入70％糖浆，使片子表面均匀润湿后，加入滑石 粉，使之粘着在片子表面，继续滚动并吹风干燥(50～55℃)，重复操作，直到片子棱面消失 为止，按素片重∶70％糖浆∶滑石粉＝3∶1.7∶1投料。

3糖衣层：使片子在包衣锅中滚动，加入70％糖浆(素片∶70％糖浆＝15∶1，糖浆加入量由大 到小递减)，片子表面缓缓干燥，形成细腻糖晶体衣层，增加衣层牢固性和甜味。

4有糖衣层：用70％糖浆稀释成2mg/ml的浆，将浆用70％糖浆稀释成不同浓度，浓 度由小到大，加入包衣锅，层层干燥。素片与素用量比为7.5kg∶1g。

5打光：为使糖衣片表面光亮美观，兼有防潮作用，加入虫白蜡，按素片∶虫白蜡＝3kg∶5g加 入，转动包衣锅使虫白蜡均匀地包在片子上，取出包衣片，干燥24小时，即得。

试验例2质量控制方法试验研究

本发明药物有多味中药原料药经提取加工而成，通过大量试验摸索，确定款冬花、木蝴 蝶、麦冬的薄层谱鉴别方法不仅重现性、稳定性好，而且结果可靠无干扰，而玄参中哈巴 俄苷、地黄中梓醇含量测定方法的建立则进一步提高了本发明药物质量的可控性，在检查项 中加入了正丁醇浸出物的含量测定，就更进一步完善了本发明药物质量控制方法。

款冬花的鉴别

1)供试品溶液的制备：

每份取按照实施例1制备的本发明药物片剂10片，除去糖衣，研细，分别加入乙醇、乙 醚、氯仿，超声处理，过滤，滤液挥至1.5ml，作为供试品溶液。同法制备对照药材溶液。 按照实施例1制备的缺款冬花的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

照薄层谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各25μl， 分别点与同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显清晰。比较不同提取溶剂和提取时间，所得供试品溶 液及对照药材溶液在薄层板上的显效果，结果见下表：

表3供试品溶液的制备

从上表可以看出，用乙醚超声提取40min时，供试品在与对照药材相应位置各班点显 均清晰，分离效果好，且阴性无干扰。经验证，该方法重现性好，符合试验要求。

2)展开剂的选择

按照上述优选方法制备供试品溶液、对照药材溶液及阴性对照品溶液，照薄层谱法(中 国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各25μl，分别点与同一硅胶G薄 层板上，以正己烷-醋酸乙酯2∶3、3∶2、3∶1、4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香 草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显清晰，比较各斑点在薄层板上的展开效果。结果见下表：

表4展开剂的选择

从上表可以看出，以正己烷-醋酸乙酯4∶1为展开剂，各斑点显清晰，分离效果好， 且阴性无干扰，符合试验要求。

2.麦冬的鉴别

我们参考2005版中国药典一部麦冬项下药材鉴别方法对本发明药物中的麦冬进行了薄 层鉴别方法摸索，但样品与麦冬对照药材没有对应的斑点，且阴性有干扰。我们又在此基础 上变换展开剂，并进行了三批样品的检验和阴性考察，建立了麦冬的鉴别方法，结果如下：

表5麦冬鉴别展开剂选择试验

所以确定本发明药物中麦冬的薄层鉴别方法如下：

取相当于原料药材10.5g的本发明药物制剂，研细，氯仿-甲醇(70∶30)20毫升，浸 泡3小时，超声30分钟，过滤，蒸干，用氯仿0.5毫升溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对 照药材2g，剪碎，以氯仿-甲醇(70∶30)20毫升，浸泡3小时，超声30分钟，过滤，蒸干， 用氯仿0.5毫升溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法(中国药典2005年版一部附录VI B) 试验，吸取上述溶液分别10μl，分别点与同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(5∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品 谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

3.木蝴蝶的鉴别

我们参考2005版中国药典一部木蝴蝶项下药材鉴别方法对本发明药物中的木蝴蝶进行 了薄层鉴别方法摸索，但样品与木蝴蝶对照药材没有对应的斑点，且阴性有干扰。我们又在 此基础上变换展开剂，并进行了三批样品的检验和阴性考察，建立了麦冬的鉴别方法，结果 如下：

表6木蝴蝶鉴别展开剂选择试验

所以确定本发明药物中木蝴蝶的薄层鉴别方法如下：

取相当于原料药材4g的本发明药物制剂，研细，称取1g，加无水乙醇50毫升超声10分 钟，过滤，滤液蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为供试品。另取木蝴蝶对照药材2g，加无水 乙醇50毫升超声10分钟，过滤，滤液蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为对照药材溶液。照 薄层谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述样品溶液15μl，对照药材 溶液5μl，分别点与同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材 谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

4、正丁醇浸出物的含量测定

取相当于原料药材8.5g的本发明药物制剂，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇 50ml，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml， 置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次 25ml，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放 置30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

按照以上测定方法，对按照实施例1制备的3批本发明药物进行浸出物含量测定，测定结果 如下：

表7浸出物含量测定结果

根据以上测定结果，该方法稳定性好，简便易行，故将本发明药物按干燥品计算，含正丁 醇浸出物不得少于5.0％。

5、含量测定

(1)玄参中哈巴俄苷的含量测定

1)谱条件谱柱：依利特C18谱柱(4.6x200ram，51xm)；流动相：A乙腈，B1％醋酸溶 液，按表2进行梯度洗脱。

表8流动相比例

时间(min) A(％) B(％)

0～20 20→50 80→50

20～25 50→20 50→80

流速：1mL/min；柱温：35℃；检测波长：278nm。理论板数：按哈巴俄苷峰计算应不低于5000。

2)对照品溶液的制备 取哈巴俄苷对照品适量，加30％甲醇制成每1ml含哈巴俄苷10μg的溶 液，即得.

3)供试品溶液的制备 取按照实施例1制备的本发明药物适量，除去糖衣，研细，取1.0g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡1h后，超声处 理(功率5000W，频率40kHz)30rain，取出，放冷，再称定重量，用30％的甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各201～1，注入高 效液相谱仪，测定，记录25min的谱图，即得。

4)阴性对照品溶液的制备 按实施例1制备缺玄参的阴性空白样品，用供试品制备方法阴性 对照溶液。

5)专属性试验 分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相 谱仪，记录谱图。由谱图可见，供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上有相同保 留时间的谱峰，阴性试验无干扰。

6)线性关系的考察 精密吸取浓度为10μg/ml的哈巴俄苷对照品溶液5、10、15、20、25μl 注入高效液相谱仪，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐峰面积积分值为纵坐标，绘制 标准曲线，其回归方程为：Y＝1416.8x+12864，r＝0.9998。结果表明，哈巴俄苷在50-250μg 范围内具有良好的线性关系。

表9线性关系考察

进样量(μl) 5 10 15 20 25

峰面积 20124 26887 34032 41099 48437

7)精密度试验 精密吸取同一供试品溶液(按照实施例1制备的供试品)，重复进样5次，测 定其峰面积，RSD＝1.43％。结果表明，本方法精密度好。

表10精密度考察

8)稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(按照实施例1制备的供试品)20μl，分别于0、4、 8、12、16h进样，测定其峰面积积分值，峰面积平均值为21846.6。RSD＝1.57％，结果表明， 供试品溶液在16h内峰面积积分值基本稳定。

表11 稳定性考察

9)重复性试验 取同一批号样品(按照实施例1制备的供试品)5份，依法测定5次，平均 含量为0.2646mg/g，RSD；1.61％，结果表明，本方法重复性较好。

表12重复性考察

10)回收率试验 精密称取已知含量为0.2637mg/g样品(按照实施例1制备的供试品)约 1.0g，共5份，分别精密加入哈巴俄苷对照品溶液(1.5mg/ml)1ml，依法测定含量，结果见 表13。

表13加样回收率测定结果

结果表明，本方法加样回收率较好。

从以上方法学考察结果可以看出，玄参中哈巴俄苷的含量测定方法精密度、重现性、稳 定性等均符合试验要求，故确定以测定玄参中哈巴俄苷的含量为质量控制方法之一。

(2)地黄中梓醇的含量测定

1仪器和试液

仪器：Aglient 1100 HPLC测定仪，chem station for LC谱数据处理软件。试剂：甲醇、 乙晴为谱纯，水为注射用水，其他试剂均为分析纯。对照品：梓醇对照品(供含量测定用， 中国药品生物制品检定所提供)。样品：按照实施例1制备的本发明药物。

2谱条件

谱柱为C18谱柱(Type Waters，4.6x250mm)，流动相为乙晴∶甲醇∶水(6∶3∶150)， 检测波长为210nm，流速为0.8mldmin。

3检测波长的确定

取梓醇对照品，用分光光度计在200～400nm测定其吸收曲线。发现其在210nm处有最大吸收， 故选择210nm为检测波长。

4实验方法

4.1对照品溶液的制备 精密称取梓醇对照品4.58mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并 稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL对照品溶液含梓醇0.0458mg)。

4.2供试品溶液的制备 称取按照实施例1制备的本发明药物适量，除去糖衣，研细，取 2g，精密称定，置索氏提取器中加甲醇适量，提取4h，取出，放冷，滤过，甲醇提取液低温 回收甲醇至约10mL，将甲醇提取液定量转移至25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 作为供试品溶液。

4.3阴性对照溶液的制备 按实施例1制备缺地黄的阴性空白样品，用供试品制备方法阴性 对照溶液。

4.4测定方法 分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照品溶液各20uL，注入液相 谱仪，测定，即得。阴性样品溶液在供试品梓醇的相应位置未出现干扰。

4.5线性关系的考察 精密称取梓醇对照品溶液(0.235mg/mL)1，5，9、13、17、20mL，置 20mL容量瓶中，加甲醇至刻度，得浓度为0.01175、0.05875、0、1058、0.1528、0.1998、 0.235mg/mL的梓醇对照品溶液，分别吸取上述6种溶液各20uL，注入液相谱仪测定，回 归方程为A＝94153C+198.11，相关系数，r＝0、9996。

表14线性关系考察

结果表明，梓醇在0.235-4.70μg的范围内线性关系良好。

4.6重复性试验 取同一批样品(按照实施例1制备的本发明药物)，平行制备6份样品， 按样品测定法测定，结果0.306mg/g，RSD为1.59％。

表15重复性考察

4.7精密度试验 精密吸取同一梓醇对照品溶液(0.0458mg/mL)20uL，注入液相谱仪中， 连续测定6次，测定峰面积值，RSD为0.80％。

表16精密度考察

4.8加样回收率试验 按加样回收率试验的要求，用同一批样品(按照实施例1制备的本发 明药物)制备供试品溶液，精密量取4份5mL供试品溶液，分别置10mL量瓶中，分别加入梓 醇对照品溶液(0.0458mg/mL)置刻度，按样品测定方法，取未加对照品的供试品5mL置容量 瓶中同法测定，取5mL的总含量为本底值RSD为1.40％。详见表17。

表17回收率实验结果

从以上方法学考察结果可以看出，地黄中梓醇的含量测定方法精密度、重现性、稳定性 等均符合试验要求，故确定以测定地黄中梓醇的含量为质量控制方法之一。

试验例3药效学研究试验

1实验材料

1.1药品 按照实施例1、2制备的本发明药物制剂I、II；咽炎片(规格：0.25g/片(糖衣 片)，吉林感康制药有限公司生产；阿司匹林由沈阳医学院生产；氯化铵为分析纯；依文思 兰，5-羟胺Fluka进口分装，上海化学试剂采购供应站分装厂。

1.2动物Wistar大鼠，ICR小鼠及SD大鼠，♀♂均用。

2方法与结果

2.1抑制毛细血管通透性的作用 取大鼠60只，体重200～250g，雌雄各半，每组10只。 随机分为6组，本发明药物组分别给本发明药物I大剂量组70g/kg、小剂量组35g/kg，本发 明药物II小剂量组35g/kg(药液所含生药量)，盐水对照组给生理盐水20ml/kg，阿司匹林 组给阿司匹林268mg/kg，阳物对照组给咽炎片37g/kg(药液所含生药量)，各组于ig 给药或盐水30min后，在大鼠背部中线左侧皮下注射1μg/ml的5-羟胺0.1ml，立即iv1％ 依文思兰4ml/kg。15min后处死动物，将背部着皮肤剪下并剪碎放入3ml生理盐水-丙酮 (3∶7)混合液中，放置24h，取上清液，用721分光光度计(610nm)测光密度。结果见表 18。

表18抑制毛细血管通透性的作用

组别 剂量 光密度值(x±s)

盐水对照组 20ml/kg 0.1233±0.0526

阿司匹林组 268mg/kg 0.0611±0.0224**

阳物对照组 37g/kg 0.0747±0.0224*

本发明药物组I大剂量 70g/kg 0.0570±0.0218**

本发明药物组I小剂量 35g/kg 0.0628±0.0208**

本发明药物组II小剂量 35g/kg 0.0651±0.0236*

注：n＝10，与盐水对照组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

本发明药物各组对5-羟胺所致毛细血管通透性均有抑制作用，本发明药物的抑制作 用优阳性对照药物，且本发明药物I的作用优于本发明药物II。

2.2对角叉莱胶致大鼠足跖肿胀的影响 取雄性Wistar大鼠60只，体重140～160g，分 组及给药同上，给药后1h，于大鼠右足跖皮下注入1％角叉莱胶0.1ml/只。致炎后1～6h分 别测定足跖容积，计算出肿胀值(致炎前后足跖容积差)。结果见表19。

表19对角叉莱胶致大鼠足跖肿胀的影响

注：n＝10，与盐水对照组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

本发明药物各组对角叉莱胶致大鼠足跖肿胀均有抑制作用，本发明药物的抑制作用优于 阳性对照药物，且本发明药物I的作用优于本发明药物II。

2.3对大鼠肉芽肿增生的影响 取雄性Wistar大鼠60只，体重140-160g，分组及给药同 上。在麻醉状态下行背部正中切口1cm，在左肩部皮下埋藏一直径9mm，厚1.5mm，重9.25mg 的无菌滤纸片。每天给药2次，连续7天，第8天取出肉芽组织，60℃干燥24h后称重，求 出各组织净重的平均数和抑制率。结果见表20。

表20对大鼠肉芽肿增生的影响

组别 剂量 肉芽组织净重(mg，x±s) 抑制率(％)

盐水对照组 20ml/kg 76.9±10.6 --

阿司匹林组 268mg/kg 41.9±9.0** 45.5

阳物对照组 37g/kg 49.2±11.2* 36.0

本发明药物组I大剂量 70g/kg 41.0±8.2** 46.7

本发明药物组I小剂量 35g/kg 44.1±11.0** 42.6

本发明药物组II小剂量 35g/kg 46.9±8.0** 39.7

注：n＝10，与盐水对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05

从上表可以看出，本发明药物各组对大鼠肉芽肿增生均有抑制作用，本发明药物的抑制 作用显著高于阳性对照药物，且本发明药物I的作用优于本发明药物II。

2.4对大鼠排痰量的影响(毛细玻管法)SD大鼠，♀♂各半，体重200～250g，随机分为6 组，每组10只，阳物对照组为给药37g/kg咽炎片和1g·kg氯化铵。插入玻璃毛细管记录 给药前2h内的正常痰液分泌量，然后各组分别以1mL/100g十二指肠给予相应药物，继续记录 给药后2h内的痰液分泌量。以毛细管吸取痰液长度评价药物的化痰效果。结果见表21。

表21对大鼠排痰量的影响

结果显示，3种剂量的本发明药物组合物、氯化铵和咽炎片均能显著增加大鼠的排痰量， 且本发明药物I的作用优于本发明药物II。

2.5对浓氨水引咳的影响 ICR小鼠，♀♂各半，体重20～24g，随机分为5组，每组10只， 阳物对照组为37g/kg咽炎片。动物均以0.1mL/10g体重ig给药，一日两次，连续5次。参 照文献方法于末次给药45min后，观察小鼠通入雾化的27％的浓氨水后咳嗽潜伏期(喷雾结束 至开始出现咳嗽的时间)和3min内的咳嗽次数。结果见表22。

表22对浓氨水引咳的影响

组别 剂量(g*kg) 咳嗽潜伏期(s) 30min内咳嗽次数

盐水对照组 等体积 45.8±8.7 75.3±6.5

阳物对照组 37g/kg 48.1±10.3 70.0±7.4

本发明药物组I大剂量 70g/kg 77.8±9.8* 46.1±5.9*

本发明药物组I小剂量 35g/kg 57.7±15.0* 59.7±6.2

本发明药物组II小剂量 35g/kg 53.1±7.5 62.3±5.1

本实验结果表明，本发明药物I高剂量能显著延长咳嗽潜伏期并减少咳嗽次数，中剂量 时仅延长咳嗽潜伏期，对咳嗽次数元明显影响，本发明药物II的咳嗽潜伏期和咳嗽次数均元 显著变化。但本发明药物与阳性对照药物比较对浓氨水引咳的抑制作用更好。

试验例4 临床试验

临床资料 150例慢性咽炎均系医院门诊患者，随机分成两组，组90例，男60例，女30例；年 龄最大者75岁，最小12岁；病程1个月～1年。对照组60例，男45例，女15例，最大年龄72岁，最小 13岁；病程1个月～1年。诊断标准符合《中医常见病症诊疗常规》。

方法 组使用按照实施例1制备的本发明药物制剂，口服，1次5片，1日3次。连续服用 10d为1个疗程，1～3个疗程观察结果。对照组采用吉林感康制药有限公司生产的咽炎 片，0.25g/片，1d3次，1次5片，连续服用10d为1个疗程，1～3个疗程观察结果。

疗效标准 参照《中医常见病症诊疗常规》中慢喉痹标准拟定。治愈：自觉症状消失，咽部充 血、水肿消失；显效：症状明显减轻，咽部充血、水肿基本控制；有效：症状有所改善，咽部充血、 水肿明显减轻；无效：症状改善轻微或无改善，咽部充血水、肿无明显减轻。

结果 组90例，临床治愈23例，显效30例，有效31例，无效6例，总有效率为93.33％。对 照组60例，临床治愈6例，显效16例，有效25例，无效13例，总有效率为78.33％。两组比较有显著 性差异(P＜0.01)。

临床研究表明本发明药物慢性咽炎效果显著。

具体实施例

实施例1

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取 上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，在60℃以下减压 干燥，粉碎至80目，加入25g的蔗糖，制成颗粒，喷加薄荷油，加1.75g硬脂酸镁，混匀， 压制成1000片，包糖衣，即得。

实施例2

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取 上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，在60℃以下减压 干燥，粉碎至80目，加入25g的蔗糖，制成颗粒，喷加薄荷油，加1.5g硬脂酸镁，混匀， 压制成1000片，包糖衣，即得。

实施例3

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取 上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，在60℃以下减压 干燥，粉碎至80目，加入15g的蔗糖，制成颗粒，喷加薄荷油，加0.8g硬脂酸镁，混匀， 压制成1000片，包糖衣，即得。

实施例4

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取 上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，在60℃以下减压 干燥，粉碎至80目，加入15g的蔗糖，制成颗粒，喷加薄荷油，加颗粒重量0.8g硬脂酸镁， 混匀，压制成1000片，包糖衣，即得。

实施例5 按照实施例1～4制备的本发明药物制剂的质量控制方法

鉴别：

(1)取本品10片，除去糖衣，研细，加乙醚25ml使溶解，超声处理40分钟，过滤，滤液挥 至1.5ml，作为供试品溶液。另取款冬花对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层谱 法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各25μl，分别点与同一硅 胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛浓硫酸试 液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜 的斑点。

(2)取本品，除去糖衣，研细，称取1g，加无水乙醇50毫升超声10分钟，过滤，滤液 蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为供试品。另取木蝴蝶对照药材2g，加无水乙醇50毫升超 声10分钟，过滤，滤液蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为对照药材溶液。照薄层谱法(中 国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述样品溶液15μl，对照药材溶液5μl，分别 点与同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 ％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置 上，显相同颜的斑点。

(3)取样品10片，除去糖衣，研细，氯仿-甲醇(70∶30)20毫升，浸泡3小时，超声 30分钟，过滤，蒸干，用氯仿0.5毫升溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材2g，剪碎， 以氯仿-甲醇(70∶30)20毫升，浸泡3小时，超声30分钟，过滤，蒸干，用氯仿0.5毫升 溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上 述溶液分别10μl，分别点与同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对 照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

检查：

正丁醇浸出物 称取本品，除去糖衣，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇50ml， 称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml，置干 燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml， 合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30 分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

本品按干燥品计算，含正丁醇浸出物不得少于5.0％。

含量测定：

玄参：

照高效液相谱法(附录VI D)测定。

谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以1％醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为278nm。理论板数按 哈巴俄苷峰计算应不低于5000。

时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)

0～20 20→50 80→50

20～25 50→20 50→80

对照品溶液的制备 精密称取哈巴俄苷对照品适量，加30％甲醇制成每1ml含10μg的 溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物相当于原药材4.0g，研细，取约1.0g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡1小时后，超声处理(功 率500W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得。

测定法 别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明中药组合物相当于原药材4.0g，含哈巴俄苷(C₂₄H₃₀O₁₁)不得少于0.18mg。 地黄：

照高效液相谱法(附录VI D)测定。

谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液 (1∶99)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备 精密称取梓醇对照品适量，加流动相制成每1ml含10μg的溶液， 即得。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物相当于原药材4.0g，研细，取约1.0g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1.5小时，放冷，再称 定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用 流动相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即 得。

本发明中药组合物相当于原药材4.0g，含梓醇(C₁₅H₂₂O₁₀)不得少于0.25mg..

实施例7胶囊剂

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮三次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加6倍量水煎煮2小 时，合并煎液，静置30小时，取上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款 冬花粉末混合，在60℃以下减压干燥，粉碎至80目，加入25g的蔗糖，制成颗粒，喷加薄 荷油，加1.5g硬脂酸镁，混匀，装入1000粒胶囊，即得。

实施例8颗粒剂

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取 上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，再加入250g淀粉、 500g蔗糖，混匀，制成颗粒，喷加薄荷油，制成1000g颗粒，即得。

实施例9滴丸剂

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加水煎煮二次， 第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取 上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏，与款冬花粉末混合，干燥，粉碎至120 目，与熔融的聚乙二醇4000按照1∶3的比例混合均匀，迅速加入薄荷油混匀，滴制成滴丸， 即得。

实施例10糖浆剂

以上十二味，除薄荷油外，其余玄参等十一味加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3 小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取上清液，浓缩至适量，另 取蔗糖650g加水煮沸，溶解后，滤过，浓缩制成糖浆，与上述浓缩液混匀，煮沸，放冷，加 入薄荷油、防腐剂与香精，并用冷开水稀释至1000ml，即得。

实施例11口含片

以上十二味，除薄荷油外，其余玄参等十一味加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3 小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，合并煎液，静置24小时，取上清液，浓缩相对密度为 1.35(60-70℃)的稠膏，加入蔗糖750g、香兰素1.5g、甜蜜素10g、柠檬酸15g混合，制 成颗粒，干燥，整粒，喷入挥发油，混匀，压制成1000片，即得。

实施例12

以上十二味，除薄荷油外，款冬花粉碎至100目，过筛；其余玄参等十味加8倍量水煎 煮4小时，滤过，煎液静置24小时，取上清液，浓缩成相对密度为1.35(60-70℃)的稠膏， 与款冬花粉末混合，干燥，粉碎至80目，加入25g的蔗糖，制成颗粒，喷加薄荷油，加1.5g 硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包糖衣，即得。

其质量控制方法包括如下几项：

鉴别：

(1)取本品10片，除去糖衣，研细，加乙醚25ml使溶解，超声处理40分钟，过滤，滤液挥 至1.5ml，作为供试品溶液。另取款冬花对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层谱 法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各25μl，分别点与同一硅 胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛浓硫酸试 液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜 的斑点。

(2)取本品，除去糖衣，研细，称取1g，加无水乙醇50毫升超声10分钟，过滤，滤液 蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为供试品。另取木蝴蝶对照药材2g，加无水乙醇50毫升超 声10分钟，过滤，滤液蒸干，加无水乙醇1毫升溶解作为对照药材溶液。照薄层谱法(中 国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述样品溶液15μl，对照药材溶液5μl，分别 点与同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 ％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置 上，显相同颜的斑点。

(3)取样品10片，除去糖衣，研细，氯仿-甲醇(70∶30)20毫升，浸泡3小时，超声 30分钟，过滤，蒸干，用氯仿0.5毫升溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材2g，剪碎， 以氯仿-甲醇(70∶30)20毫升，浸泡3小时，超声30分钟，过滤，蒸干，用氯仿0.5毫升 溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上 述溶液分别10μl，分别点与同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显清晰。供试品谱中，在与对 照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

检查：

正丁醇浸出物 称取本品，除去糖衣，研细，取粉未2g，精密称定，精密加入甲醇50ml， 称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液25ml，置于 燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml， 合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30 分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。