咖啡二萜类化合物及其在制备具有提高皮肤细胞活力以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用应用的制作方法

1.本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种咖啡二萜类化合物及其在制备具有提高皮肤细胞活力以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用应用。

背景技术：

2.作为人体的第一道防御屏障，有着防止异物入侵、细菌感染等保护作用。而随着年龄渐长，皮肤细胞中的氧化自由基代谢变缓，而细胞内氧化自由基的增加与环境污染物暴露及紫外光辐照等密切相关。研究报道，uvb暴露会诱发皮肤细胞中不饱和脂肪酸氧化，形成脂质自由基，进而损伤细胞，破坏细胞膜、诱发蛋白和酶变性、失活，终将引起肌肤衰老。
3.天然活性小分子因其优秀的清除自由基能力而被人熟知，在食品、药品和化妆品等领域已被广泛使用。天然活性小分子的抗炎、抗氧化及皮肤抗衰老功能同样受到人们的重视，天然活性小分子不仅能促进新陈代谢、增强免疫，在细胞信号转导、细胞命运调控等过程中也发挥着重要作用。
4.咖啡是深受喜爱的膳食补充剂，咖啡豆具有广泛的生物活性，富含生物碱、糖类、有机酸、酯类、甾醇和二萜等化学成分。同时，咖啡具有较高的药用价值，如抗癌、抗炎、抗氧化、保肝等。咖啡提取物被证明具有抗氧化、免疫调节及降血脂等功效，咖啡提取物也被广泛应用于化妆品以发挥抗氧化、抗炎功效。然而，咖啡中的活性小分子是否能够缓解皮肤细胞氧化损伤、炎性损伤却鲜有研究及报道。

技术实现要素：

5.为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种咖啡二萜类化合物。研究表明所述的咖啡二萜类化合物不仅能够提高皮肤细胞活力，同时还能抑制皮肤细胞炎性损伤。
6.本发明的技术方案如下：
7.一种咖啡二萜类化合物，其具有式ⅰ或式ⅱ所示的结构；
8.9.发明人在研究中惊奇的发现，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物不仅能够提高皮肤细胞活力，同时还能抑制皮肤细胞炎性损伤。
10.本发明还提供了一种组合物，其包含式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。
11.发明人在研究中进一步惊奇的发现，将式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物组合后形成的组合物，其提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用得到了进一步提高，其提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用要显著高于单独的式ⅰ或式ⅱ所示结构的天然活性小分子化合物。
12.优选地，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的重量比为1～100:1～100。
13.进一步优选地，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的重量比为1～10:1～10。
14.最优选地，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的重量比为1:1。
15.本发明还提供了一种提取物，其包含式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。
16.优选地，式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物在提取物中的重量含量为1～99％。
17.进一步优选地，式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物在提取物中的重量含量为30～95％。
18.更一步优选地，式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物在提取物中的重量含量为50～90％。
19.优选地，所述的提取物为咖啡提取物。
20.本发明还提供了一种上述咖啡二萜类化合物、组合物或提取物在制备具有提高皮肤细胞活力作用的产品中的应用。
21.本发明还提供了一种上述咖啡二萜类化合物、组合物或提取物在制备具有抑制皮肤细胞炎性损伤作用的产品中的应用。
22.本发明还提供了一种上述咖啡二萜类化合物、组合物或提取物在制备具有抗炎作用的产品中的应用。
23.优选地，所述的产品为化妆品、护肤品或药品。
24.有益效果：本发明提供了一种全新结构的咖啡二萜类化合物；研究表明所述的咖啡二萜类化合物同时具有提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用；尤其是将式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物组合后形成的组合物，其具有提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用得到了进一步提高，具有更加优异的具有提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用；其提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用要显著高于单独的式ⅰ或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。由于式ⅰ或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物或其组合物具有提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用；因此，将式ⅰ或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物或其组合物或含有式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的提取物作为活性成分，用于制备具体具有提高皮肤细胞活力作用或抑制皮肤细胞炎性损伤作用或抗炎作用的化妆品、护肤品或药品具有重要的应用价值。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1为式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物的1h nmr、
13
c nmr及dept 135谱。
27.图2为式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物的1h-1
h cosy、hmbc及noesy谱。
28.图3为式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物的关键原子noesy相关图及计算和实验ecd谱。
29.图4为式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的1h nmr谱、
13
c nmr及dept135谱。
30.图5为式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的1h-1
h cosy、hmbc及noesy谱。
31.图6为式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的关键原子noesy相关图。
32.图7为组合物对人皮肤成纤维细胞活力及咖啡二萜组合物对uvb暴露人皮肤成纤维细胞活力的影响图。
33.图8为组合物对uvb暴露人皮肤成纤维细胞炎性因子分泌的影响图。
34.图9为组合物对uvb暴露人皮肤成纤维细胞nf-κb及nlrp3信号通路相关蛋白表达的影响图。
35.图10为组合物对uvb暴露小鼠皮肤细胞炎性因子分泌的影响图。
36.图11为组合物对uvb暴露小鼠皮肤细胞nf-κb及nlrp3信号通路相关蛋白表达的影响图。
具体实施方式
37.下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
38.实施例1式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物制备方法
39.(1)咖啡豆(生)1kg，粉碎，用15倍量的体积分数为50％的乙醇的渗漏提取，合并减压浓缩提取液，得浸膏。
40.(2)将浸膏用水混悬得混悬液，并分别用乙酸乙酯、氯仿萃取。萃取物冻干，分别得到乙酸乙酯、氯仿及水层浸膏。
41.(3)将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱谱分离，用氯仿-甲醇(100∶10；100∶30；100∶50；100∶70；100∶90)等5个梯度进行梯度洗脱分别获得5个馏分(fr.1～5)。
42.(4)将fr.3(30g)再用氯仿-甲醇(100∶20；100∶40；100∶60；100∶80；100∶100)等5个梯度进行梯度洗脱分别获得5个馏分(fr.3-1～3-5)；取fr.3-4用制备型hplc分离纯化，得到式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物(2.21g)和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物(2.14g)；
43.制备型hplc的具体条件为：
44.rp-hplc(安捷伦1200hplc)在zorbax，sb c-18柱(9.4
×
250mm，5μm)上分离。洗脱
溶剂系统由水-三氟乙酸(溶剂a；100:0.1，v/v)和乙腈-三氟乙酸(溶剂b；100:0.1，v/v)组成。使用30％至60％溶剂b的梯度洗脱，以5.0ml/min的流速25min，检测波长设置为300nm；收集11.87min处的谱峰对应的洗脱液浓缩干燥后得式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物；收集10.15min处的谱峰对应的洗脱液浓缩干燥后得式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。
45.式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物的结构解析如下：白粉末，hr-esi-ms m/z 439.2481[m+na]
+
(calcd for c
25h36
nao
5 439.2455)，提示化合物分子式为c
25h36
o5，分子量为416。
[0046]1h nmr(300mhz,cdcl3)谱(图1a)，化合物有4个甲基质子信号[δ
h 1.48(3h,s),1.33(3h,d,j＝5.4hz),1.24(3h,s),1.01(3h,s)]，2个烯烃质子信号[δh4.77(1h,s),4.72(1h,s)]，及2个连氧碳的氢质子信号[δ
h 4.46(1h,dd,j＝12.0,4.5hz),3.34(1h,dd,j＝10.8,5.4hz)]。
[0047]
13
c nmr(75mhz,cdcl3)谱(图1b)和dept谱(图1c)分析，化合物具有4个甲基、9个亚甲基、5个次甲基，共25个碳信号。其中包括3个连氧碳信号(δc 80.5,58.2,57.8)、2个羰基碳信号(δc 179.9,171.5)和2个双键碳信号(δc 155.5,103.7)。
[0048]
从1h-1
h cosy谱(图2a)中可以看到h-3(δ
h 4.47)与h2-2(δ
h 2.33,1.75)有相关。
[0049]
在hmbc谱(图2b)中，可观察到h-3与c-19(δ
c 179.9)、c-1'(δc171.5)、c-4(δ
c 48.0)、c-18(δ
c 24.0)相关。由此证明了化合物结构中的(2
′
r,3
′
s)-或(2
′
s,3
′
r)-2
′
,3
′‑
环氧-2-甲基丁酯基取代基团连接在c-3位上。
[0050]
在noesy谱(图2c)中，可以观察到h-3(δ
h 4.47)分别与h-5(δ
h 1.09)、h-18(δ
h 1.24)有相关，所以h-3与h-5、h-18位于同侧。同时，h-4
′
(δ
h 1.33)与h-5
′
(δ
h 1.48)相关，所以h-4
′
与h-5
′
位于同侧(图3a)。
[0051]
该化合物的ecd图谱和3r,4s,5s,8s,9r,10s,13r,2
′
r,3
′
s构型的ecd计算值的图谱(图3b)相似，在226nm处有正的cotton效应，所以确定了化合物的绝对构型为3r,4s,5s,8s,9r,10s,13r,2
′
r,3
′
s。综合以上解析及图谱信息，鉴定了化合物的结构为式ⅰ所示结构的咖啡二萜类化合物，命名为咖啡二萜-1。
[0052]
式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的结构解析如下：白粉末，hr-esi-ms m/z 469.2360[m+na]
+
(calcd for c
29h34
nao
4 469.2349)，同时结合该化合物nmr谱图，提示化合物分子式c
29h34
o4，分子量为446。
[0053]1h nmr(300mhz,cdcl3)谱中(图4a)，化合物具有一个苯环结构片段[δh7.46-7.44(2h,overlapped),7.23-7.16(3h,overlapped)]，5个烯烃质子信号[δ
h 7.64(1h,d,j＝15.9hz),6.38(1h,d,j＝15.9hz),5.24(1h,s),4.91(1h,br s),4.80(1h,br s)]，2个甲基单峰质子信号[δ
h 1.32(3h,s),1.16(3h,s)]及1个连氧碳的氢质子信号[δ
h 4.73(1h,dd,j＝11.7,4.2hz)]。
[0054]
13
c nmr(75mhz,cdcl3)谱(图4b)和dept谱(图4c)，化合物具有2个甲基、8个亚甲基、11个次甲基、8个季碳，共29个碳信号。
[0055]1h-1
h cosy谱(图5a)，h-11(δ
h 5.24)与h2-12(δ
h 2.59,2.40)的相关。
[0056]
hmbc谱(图5b)，h-11与c-13(δ
c 41.3),h2-7(δ
h 2.00,1.51)，h2-15(δ
h 2.60,2.19)/h-20(δ
h 1.16)与c-9(δ
c 158.2)相关，由此证明c-9和c-11之间的连接方式。noesy谱(图5c)，h-3(δ
h 4.73)分别与h-5(δ
h 1.82)、h-18(δ
h 1.32)有相关，所以h-3与h-5、h-18位
于同侧(图6)。
[0057]
综上，故化合物的绝对构型为3r,4s,5s,8s,10s,13r。综合以上谱图信息及解析，鉴定化合物的结构为式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物，命名为咖啡二萜-2。
[0058]
实施例2咖啡提取物
[0059]
(1)咖啡豆(生)1kg，粉碎，用15倍量的体积分数为50％的乙醇的渗漏提取，合并减压浓缩提取液，得浸膏；
[0060]
(2)将浸膏用水混悬得混悬液，并分别用乙酸乙酯、氯仿萃取。萃取物冻干，分别得到乙酸乙酯、氯仿及水层浸膏；取乙酸乙酯层浸膏即得所述的咖啡提取物。
[0061]
实施例3组合物
[0062]
将咖啡二萜-1和咖啡二萜-2按质量比为1:1混合均匀即得所述的组合物。
[0063]
实验例1提高皮肤细胞活力实验
[0064]
人皮肤成纤维细胞于mem培养基(含5％胎牛血清)，5％ co2，湿度95％，37℃培养箱中培养。播种细胞于96孔板(1
×
103/孔)，细胞附着后，分别加入200μg/ml咖啡二萜-1(ft-1)、咖啡二萜-2(ft-2)及组合物(咖啡二萜-1和咖啡二萜-2按质量比为1:1组成的组合物)溶液10μl，以加入相同体积pbs缓冲液作为空白对照组。在添加咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及组合物溶液后培养细胞24h，cck 8检测细胞活性。
[0065]
实验结果显示(图7a)，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及组合物与人皮肤成纤维细胞共培养后，人皮肤成纤维细胞的细胞活力具有较大提高，说明咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及组合物对体外培养人皮肤成纤维细胞的活力具有较大的提升作用。
[0066]
相比于空白对照组，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及组合物组细胞活力分别提高11.3％(p《0.05)，9.27％(p《0.05)及20.5％(p《0.01)。同时，组合物提高人皮肤成纤维细胞活力方面，比相同浓度下咖啡二萜-1、咖啡二萜-2活性更佳。
[0067]
实验例2抑制紫外光(uvb)辐照导致的皮肤细胞炎性损伤实验
[0068]
人皮肤成纤维细胞于mem培养基(5％胎牛血清)在5％ co2，湿度95％，37℃培养箱中培养过夜。播种细胞于96孔板(1
×
103/孔)，细胞附着后，uvb的辐照。uvb的辐照强度为5.0
×
10-5
j/cm2，辐照光源与人皮肤成纤维细胞相距14cm。辐照时吸去细胞培养液，pbs冲洗2次，再加入少量覆盖底面避免干燥。培养板于室温水浴下照光以避免辐照后过热，辐照后弃去pbs，重新加入dmem培养基或咖啡二萜-1(ft-1)、咖啡二萜-2(ft-2)及组合物(咖啡二萜-1和咖啡二萜-2按质量比为1:1组成的组合物)溶液(400μg/ml)培养基继续培养24h。之后，收集细胞及培养液，cck 8试剂盒检测细胞活力，elisa试剂盒检测相关炎性细胞因子含量；western blotting检测相关蛋白变化。
[0069]
实验结果(图7b)显示，uvb暴露后，人皮肤成纤维细胞活力显著降低，说明uvb暴露使人皮肤成纤维细胞受到损伤。而相比于uvb暴露组，经过咖啡二萜-1、咖啡二萜-2或其组合物后，人皮肤成纤维细胞活力分别提高8.93％(p《0.05)，9.44％(p《0.05)及15.6％(p《0.01)，说明咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及其组合物对uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞损伤及细胞活力降低具有一定的抑制活性。进一步分析发现，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2的组合物在抑制uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞导致的损伤，提高细胞活力方面，比同等浓度的咖啡二萜-1或咖啡二萜-2活性更好。我们推测，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2可能是通过联合用药发挥协同作用，进而更好的抑制uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞损伤并提高细胞活力
的。
[0070]
进一步的，我们检测了咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及其组合物对uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞炎性因子分泌增加的影响。
[0071]
实验结果见图8所示，相比于空白对照组(空白组，il-4、il-6、il-13、tnf-α、ifn-γ及、pge2含量设为100％)，uvb辐照后，人皮肤成纤维细胞炎性因子分泌增加。说明，uvb辐照损伤细胞并诱发细胞炎性反应，进而使炎性细胞因子分泌增加。相比于空白组，uvb暴露后，il-4、il-6、il-13、tnf-α、ifn-γ及、pge2含量分别增加151％(p《0.01)，125％(p《0.01)，232％(p《0.01)，101％(p《0.01)，112％(p《0.01)，88.4％(p《0.01)。而咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及其组合物后，uvb辐照诱发的人皮肤成纤维细胞炎性因子分泌增加被抑制；说明咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及组合物能够抑制uvb辐照诱导的人皮肤成纤维细胞炎性因子过量分泌，进而缓解uvb辐照诱发的炎性反应，减少炎性损伤。进一步的分析实验结果发现，相同浓度条件下，咖啡二萜-1与咖啡二萜-2的组合物抑制uvb辐照诱导的人皮肤成纤维细胞炎性因子过量分泌活性，比咖啡二萜-1或咖啡二萜-2单独使用效果更佳。同时，咖啡二萜-1与咖啡二萜-2的组合物抑制uvb辐照诱导的人皮肤成纤维细胞组胺的分泌也表现出类似的效果，咖啡二萜-1与咖啡二萜-2的组合物抑制uvb辐照诱导的人皮肤成纤维细胞组胺的分泌活性强于同等浓度条件下的咖啡二萜-1或咖啡二萜-2。
[0072]
实验结果见图9所示，相比于空白对照组，uvb暴露后，人皮肤成纤维细胞nf-κb及nlrp3信号通路被激活，ikkα、ikkβ、iκbα及p65蛋白磷酸化加重，nlrp3炎症小体相关caspase-1、asc及nlrp3蛋白表达显著增加。我们推测，uvb暴露损伤人皮肤成纤维细胞并诱发了炎性反应可能是通过激活nf-κb及nlrp3信号通路进而诱发炎性细胞因子过表达实现的。而咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及其组合物后，uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞nf-κb及nlrp3信号通路激活被抑制，我们推测，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及其组合物能够抑制uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞nf-κb及nlrp3信号通路激活，进而抑制uvb暴露诱发的人皮肤成纤维细胞炎性损伤。相比于咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及咖啡提取物组，同等浓度条件下组合物对uvb暴露导致的人皮肤成纤维细胞nf-κb及nlrp3信号通路激活的抑制活性更好。
[0073]
实验例3抑制uvb暴露导致的小鼠皮肤炎性损伤实验
[0074]
随机将小鼠(裸鼠)分为6组，每组8只：空白对照组：未给予任何处理；uvb对照组：不涂任何药物，uvb照射方法同各药物组；uvb照射+100mg/ml咖啡二萜-1(ft-1)溶液组；uvb照射+100mg/ml咖啡二萜-2(ft-2)溶液组；uvb照射+100mg/ml组合物(咖啡二萜-1和咖啡二萜-2按质量比为1:1组成的组合物)溶液组；uvb照射+100mg/ml咖啡豆提取物溶液组(ftt)。上述各组在实验开始前1天小鼠背部范围为2cm*2cm部位皮肤涂用上述相应药物20min后给予500mj/cm
2 uvb照射，1次1日，连续4周，颈椎脱臼处死小鼠。取上述小鼠照射部位皮肤组织，剪碎，参考elisa检测试剂盒使用说明，检测小鼠皮肤中相关炎症因子(il-4、tnf-α、il-6、ifn-γ、pge2及il-13)及组胺含量变化，检测小鼠皮肤细胞中nf-κb及nlrp3信号通路相关蛋白的表达变化。
[0075]
结果分析：
[0076]
实验结果见图10所示，相比于空白对照组(il-4、il-6、il-13、tnf-α、ifn-γ及pge2含量设为100％)，uvb暴露后，小鼠皮肤细胞炎性因子分泌显著增加。相比于空白对照组，uvb暴露后，小鼠皮肤细胞炎性因子分泌增加201％(p《0.01)，152％(p《0.01)，252％(p《
0.01)，125％(p《0.01)，158％(p《0.01)，104％(p《0.01)。我们推测，uvb暴露损伤皮肤细胞并诱发了炎性反应。而咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及期组合物后，uvb暴露导致的小鼠皮肤细胞炎性因子分泌增加被抑制，我们推测，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及其组合物能够抑制uvb暴露导致的小鼠皮肤细胞炎症反应及诱发的炎性损伤。相比于咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及咖啡提取物组，组合物对uvb暴露导致的小鼠皮肤细胞炎性因子的过量分泌的抑制作用最显著。相比于uvb暴露组，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2组合物处理后，il-4、il-6、il-13、tnf-α、ifn-γ及、pge2含量分别减少47.1％(p《0.01)，46.8％(p《0.01)，42.8％(p《0.01)，44.4％(p《0.01)，59.1％(p《0.01)，9.71％。同时，分析实验结果发现，咖啡提取物虽然能够抑制uvb暴露导致的炎性因子分泌，但未显示出显著的抑制效果。同时，咖啡二萜-1与咖啡二萜-2的组合物抑制uvb辐照诱导的小鼠皮肤细胞组胺的分泌也表现出类似的效果，咖啡二萜-1与咖啡二萜-2的组合物抑制uvb辐照诱导的小鼠皮肤细胞组胺的分泌活性强于同等浓度条件下的咖啡二萜-1或咖啡二萜-2，强于同等浓度条件下的咖啡豆提取物。
[0077]
实验结果见图11所示，相比于空白对照组，uvb暴露后，小鼠皮肤细胞nf-κb及nlrp3信号通路被激活，其中，ikkα、ikkβ、iκbα及p65蛋白磷酸化增加，进一步的，小鼠皮肤细胞中caspase-1、asc及nlrp3蛋白的表达在uvb暴露后也显著增加。我们推测，uvb暴露损伤小鼠皮肤细胞并诱发的炎性反应及炎性因子过量分泌可能是通过激活小鼠皮肤细胞中nf-κb及nlrp3信号通路实现的。本实验中，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2、咖啡提取物及组合物后，uvb暴露诱导的小鼠皮肤细胞中nf-κb及nlrp3信号通路的激活被抑制，我们推测，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2、咖啡提取物及组合物能够抑制uvb暴露导致的小鼠皮肤细胞中nf-κb及nlrp3信号通路的激活，进而抑制uvb暴露诱发的小鼠皮肤细胞中炎性损伤。相比于咖啡提取物，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2及组合物对uvb暴露导致的小鼠皮肤细胞nf-κb及nlrp3信号通路激活抑制作用更明显。进一步的，在同等浓度条件下，咖啡二萜-1、咖啡二萜-2组合物对uvb暴露导致的小鼠皮肤细胞nf-κb及nlrp3信号通路激活抑制活性强于咖啡二萜-1、咖啡二萜-2单独使用，我们推测咖啡二萜-1、咖啡二萜-2可能是通过发挥协同作用进而抑制小鼠皮肤细胞的nf-κb及nlrp3信号通路激活。
[0078]
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

技术特征：

1.一种咖啡二萜类化合物，其特征在于，具有式ⅰ或式ⅱ所示的结构；2.一种组合物，其特征在于，包含式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的重量比为1～100:1～100。4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的重量比为1～10:1～10；最优选地，式ⅰ和式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的重量比为1:1。5.一种提取物，其特征在于，包含式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。6.根据权利要求5所述的提取物，其特征在于，式ⅰ和/或式ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物在提取物中的重量含量为1～99％。7.根据权利要求5所述的提取物，其特征在于，所述的提取物为咖啡提取物。8.权利要求1～7任一项所述的咖啡二萜类化合物、组合物或提取物在制备具有提高皮肤细胞活力作用的产品中的应用。9.权利要求1～7任一项所述的咖啡二萜类化合物、组合物或提取物在制备具有抑制皮肤细胞炎性损伤作用的产品中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的产品为化妆品、护肤品或药品。

技术总结

本发明公开了一种咖啡二萜类化合物及其在制备具有提高皮肤细胞活力以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用应用。所说的咖啡二萜类化合物，其特征在于，具有式Ⅰ或式Ⅱ所示的结构。所述的组合物和提取物，包含式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。由于式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物或其组合物具有提高皮肤细胞活力作用以及抑制皮肤细胞炎性损伤作用；因此，将式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物或其组合物或含有式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物的提取物作为活性成分，用于制备具体具有提高皮肤细胞活力作用或抑制皮肤细胞炎性损伤作用或抗炎作用的化妆品、护肤品或药品具有重要的应用价值。品或药品具有重要的应用价值。品或药品具有重要的应用价值。