抗逆性卵孢小奥德蘑菌株及其应用

1.本发明涉及食用菌技术领域，具体涉及一株抗逆性卵孢小奥德蘑菌株及其应用。

背景技术：

2.卵孢小奥德蘑oudemansiella raphanipes，又称长根菇、长根小奥德蘑，商品名为黑皮鸡枞，隶属于伞菌纲(agaricomy-cetes)伞菌目(agaricales)膨瑚菌科(physalacri-ceae)小奥德蘑属(oudemansiella)(zhuliang y，2009)。卵孢小奥德蘑子实体菌盖灰褐至浅黑棕，直径1～12cm，中心突起，至伞盖展开处有轻微凹陷，湿润时有粘性；菌褶白至乳白；菌柄白至黑，表面被黑至棕的小鳞片覆盖，长2～30cm，近圆柱形，剥开菌柄表皮，内部菌肉为白；菌柄下部为菌丝扭结形成的根状物，类似植物根茎，故被称作长根菇。
3.卵孢小奥德蘑是一种中高温型的食用菌，最佳的出菇温度为23～28℃，是较少数适合初夏早秋栽培的食用菌品种之一，具有补充市场食用菌品种供给、降低栽培中耗能及降低成本等优势的珍稀食用菌，有较高的推广价值；但目前在此温度范围栽培时，生产上的菌株表现为产量低、抗逆性差，其优良性状逐年退化，具体的表现为子实体出菇温度适应性退化和抗污染能力下降，由商业化栽培最初时23℃～28℃均可正常出菇的种性，现逐渐退变为适应出菇温度范围逐年缩小，特别是在原有25℃～28℃正常出菇的温度范围栽培时会出大面积木霉(trichoderma spp.)污染，说明抗杂菌能力下降，其主要原因为目前我国人工栽培的菌株多为野生驯化菌株，由于栽培历史较短，对人工栽培条件适应性差，野生菌株退化现象十分明显，随着逐年栽培菌株在生产实践中的弊端日趋突显，周年化栽培时污染率高，尤其是夏季栽培时污染率高至减产甚至绝产的现象屡见不鲜。目前生产上均采取降低栽培温度控制污染，但成效不显著，该问题成为限制卵孢小奥德蘑大规模种植的突出问题，生产上急需抗逆性强的卵孢小奥德蘑菌株。

技术实现要素：

4.针对上述现有技术，本发明的目的是提供一株抗逆性卵孢小奥德蘑菌株及其应用。本发明根据夏季高温高湿且易爆发木霉污染的环境，将高温、高湿度和木霉污染作为逆境条件，并加之对盐和碱的抗性，筛选出具有一定抗逆性的菌株并加以逆境驯化，将经过逆境驯化的菌株原生质体融合，经过条件下再生和逆境筛选，综合几种优势抗性，得到一株综合抗逆性强的卵孢小奥德蘑菌株，有效解决了目前限制卵孢小奥德蘑大规模种植的问题。
5.具体的，本发明涉及以下技术方案：
6.本发明的第一方面，提供一株卵孢小奥德蘑菌(oudemansiella raphanipes)，命名为y1，该菌株已于2022年8月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为：cgmcc no.40285。
7.本发明的卵孢小奥德蘑菌株y1具有如下特点：
8.(1)耐高温性：菌株在36℃高温胁迫24h后，再恢复常规培养条件仍不丧失活性。
9.(2)耐盐碱性：菌株能够在含盐量0.7％、ph为8.5的盐碱条件下正常生长。
10.(3)耐高湿度性：菌株能够在含水量大于70％的条件下生长良好。
11.(4)抗木霉污染：菌株抗木霉能力强，且在高温高湿条件下仍保持抗木霉活性。
12.(5)高产：出菇产量高、i级菇比例高。
13.本发明所请求保护的卵孢小奥德蘑菌株(oudemansiella raphanipes)，包括cgmcc no.40285所对应的菌株；也包括该菌株繁殖所产生的与所述菌株具有相同遗传学和/或形态学性状的后代。
14.本发明的第二方面，提供上述保藏编号为cgmcc no.40285的卵孢小奥德蘑菌株(o udemansiella raphanipes)作为亲本在育种中的应用。
15.上述应用中，所述育种为卵孢小奥德蘑菌株抗逆品种培育。
16.本发明的第三方面，提供培养上述保藏编号为cgmcc no.40285的卵孢小奥德蘑菌株(oudemansiella raphanipes)得到的菌丝体或孢子。
17.本发明的第四方面，提供栽培上述保藏编号为cgmcc no.40285的卵孢小奥德蘑菌株(oudemansiella raphanipes)得到的子实体。
18.本发明的第五方面，提供一种选育抗逆性强的卵孢小奥德蘑菌株(oudemansiella r aphanipes)的方法，包括以下步骤：
19.(1)分别驯化及筛选耐高温的卵孢小奥德蘑菌株、筛选耐高湿度的卵孢小奥德蘑菌株、筛选抗木霉的卵孢小奥德蘑菌株和筛选耐盐碱的卵孢小奥德蘑菌株；
20.(2)以步骤(1)筛选出的卵孢小奥德蘑菌株作为亲本进行原生质体融合，对原生质体融合菌株进行再次抗逆境筛选，选育得到抗逆性强的卵孢小奥德蘑(oudemansiella r aphanipes)菌株。
21.优选的，步骤(1)中，驯化及筛选耐高温的卵孢小奥德蘑菌株的方法为：依次进行(26℃，16h；30℃，8h)、(26℃，16h；32℃，8h)、(26℃，16h；34℃，8h)、(26℃，16h；36℃，8h)四个温度层次的循环驯化筛选，每个梯度进行16次循环后，测量各菌株在该温度条件下的生长速度；最终筛选出可在36℃条件下耐受8h的菌株。
22.优选的，步骤(2)中，对原生质体融合菌株进行再次抗逆境筛选具体包括：
23.将经原生质体融合并在(26℃，16h；32℃，8h)条件下再生后的菌株转接到新的平板，在(26℃，16h；34℃，8h)条件下培养，筛选生长速度较快且长势好的菌株，在含盐量0.7％、ph为8.5的条件下进行耐盐碱筛选；将耐盐碱条件下筛选出的菌株在高温胁迫后接种哈茨木霉，挑选与哈茨木霉对峙表现良好的菌株。
24.本发明的有益效果：
25.(1)本发明所提供的卵孢小奥德蘑(oudemansiella raphanipes)y1菌株是采用人工抗逆境驯化和原生质体育种相结合获得，与常规卵孢小奥德蘑品种相比，卵孢小奥德蘑菌(oudemansiella raphanipes)y1菌株的综合抗逆(耐高温、耐高湿、耐盐碱和抗木霉感染)能力得到大幅提高，有效解决了卵孢小奥德蘑菌夏季栽培时污染率高至减产甚至绝产的问题，在生产上具有较高的推广应用价值。
26.(2)本发明的卵孢小奥德蘑菌株(oudemansiella raphanipes)y1在具有优异的综合抗逆能力的同时，尤其是在25～28℃条件下抗木霉污染能力最强，还具有较好的生产性
能，其出菇产量相对较高，i级菇比例高。
附图说明
27.图1：抗木霉对峙试验结果图。
28.图2：36℃胁迫1d后接种哈茨木霉的侵染情况。
29.图3：y1与其他试验菌株出菇照片。
30.图4：y1菌株i级菇照片。
31.图5：y1菌株大田出菇的照片。
具体实施方式
32.应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本技术所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
33.术语说明：
34.子实体：是高等真菌的产孢构造，即果实体，由已组织化了的菌丝体组成。
35.菌丝：单条管状细丝，为大多数真菌的结构单位。
36.菌丝体：很多菌丝聚集在一起组成真菌的营养体，即菌丝体。
37.为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本技术的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本技术的技术方案。如果实施例中未注明的试验具体条件，通常按照常规条件，或者按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
38.实施例1：抗逆性卵孢小奥德蘑菌株的筛选
39.1、耐高温菌株的人工驯化筛选
40.将搜集到28个卵孢小奥德蘑菌株通过srap技术构建供试菌株的相似性矩阵图和ugma聚类图进行亲缘关系分析，在分析基础上去掉2株同株异名菌株，确定出26株不同菌株为试验材料(表1)。
41.表1：供试菌株
[0042][0043]
将26株试验菌株活化转接培养后进行人工耐高温驯化，试验设计4种循环温度梯度，在全自动生化培养箱中进行(26℃，16h；30℃，8h)、(26℃，16h；32℃，8h)、(26℃，16h；34℃，8h)、(26℃，16h；36℃，8h)四个温度层次的循环驯化筛选，每个处理3次重复。每个梯度进行16次循环后测量各菌株在该温度条件下的生长速度，以生长速率、菌落颜以及菌丝粗壮程度为指标进行综合筛选。筛选生长速度较快、长势良好的菌株。
[0044]
供试菌株在(26℃，16h；30℃，8h)条件下进行16次循环后，对菌丝的生长速度、长势进行对比的结果见表2。
[0045]
表2：菌株30℃耐高温驯化(mm/d)
[0046][0047]
注：“+++”生长旺盛；“++”生长一般；“+”生长较弱
[0048]
结果表明：供试26株菌株在30℃条件下菌株，菌丝生长速度较26℃恒温培养时有所降低，也表现出了不同菌株间的生长速度差异。26株菌株的菌丝颜没有明显变化，菌丝长势没有明显变化。经过30℃的耐高温驯化试验，说明多数卵孢小奥德蘑菌株在30℃条件下可以生长，但生长速度收到轻微抑制，菌丝颜和菌丝长势未受到明显影响。
[0049]
菌株在(26℃，16h；32℃，8h)条件下循环驯化16次后，生长速度、菌丝长势和菌丝颜测定结果见表3。
[0050]
表3：菌株32℃耐高温驯化(mm/d)
[0051][0052]
注：“+++”生长旺盛；“++”生长一般；“+”生长较弱
[0053]
结果表明：在32℃温度条件下，大多数菌丝生长速度较30℃恒温培养时明显降低，部分菌株颜由洁白变为白，且菌丝长势有所减弱。在32℃条件下，各菌株生长速度受到明显抑制，由于菌株c1受到温度抑制明显，生长速度急剧降低，菌株t6的菌丝生长速度较慢，菌丝颜由洁白变为白，菌丝长势也变为不旺盛，故剔除c1、t6菌株，不进行34℃的驯化。
[0054]
菌株在(26℃，16h；34℃，8h)条件下循环驯化16次后，生长速度、菌丝长势和菌丝颜测定结果见表4。
[0055]
表4：34℃耐高温驯化(mm/d)
[0056][0057]
注：“+++”生长旺盛；“++”生长一般；“+”生长较弱
[0058]
结果表明：34℃高温对卵孢小奥德蘑菌丝影响较大，所有菌株的菌丝生长速度都大幅度降低。菌株s和2h08长速最快，为1.36mm/d，且菌丝长势旺盛，菌丝颜为白，在30℃和32℃条件下，s和2h08菌株长势较快但不突出，在34℃条件下能有较高的生长速度和较为旺盛的生长势，说明其逐渐适应了高温环境，对高温产生了一定的耐受性，在一定程度上可以抵御高温，修复高温损伤。
[0059]
菌株在(26℃，16h；36℃，8h)条件下进行16次循环后菌丝的生长速度、生长势、菌丝是否出现角变或不均一等现象的试验结果见表5。
[0060]
表5：36℃耐高温驯化(mm/d)
[0061]
[0062][0063]
注：“+++”生长旺盛；“++”生长一般；“+”生长较弱
[0064]
结果表明：36℃的高温对卵孢小奥德蘑的菌丝影响非常大，所有菌株的菌丝生长速度都大幅度降低，生长速度都小于1mm/d。w3、t4未生长，其余菌株的生长周期也达到了40d，所有菌株受到的高温抑制非常明显，菌株的颜都有不同程度的变黄，有的菌株颜由白变为了较白，有的菌株颜变为了淡黄。菌株的生长势逐渐变弱，菌丝的密集程度由浓密变为稀疏，也有多个菌株出现角变、菌丝生长不均一，菌丝末端出现珊瑚状分叉严重等现象。因s和2h08在36℃和34℃筛选试验中表现较好，生长速度及生长势优于其余菌株，故将驯化后的s和2h08菌株定为驯化出的耐高温菌株，改名sgw、h08gw，以备后续试验使用。
[0065]
2、耐高湿度菌株的筛选
[0066]
将26株卵孢小奥德蘑的供试菌株全转接到67.5％含水量的试管中，挑选其中长速快、长势好的菌株，进行后续驯化筛选。试验发现，s、t1、c2、w1、2h01、g、jx、hp菌株长速较快，选用这8个菌株进行多个梯度水分的筛选。按67.5％、70.0％、72.5％、75.0％四个不同含水量的栽培料装入试管，在26℃恒温培养箱中培养15d，进行6次培养处理，每个处理重复3次。以含水量65％为对照。
[0067]
接种后3d观察接种点是否萌发定植，测量培养15d菌丝生长速率，统计长满试管所需天数，挑选其中长势优良的菌株。结果见表6。
[0068]
表6：耐湿度筛选菌株生长速度
[0069][0070]
结果表明：8个菌株在栽培料含水量70％的条件下，菌丝的生长速度达到最快，并随着含水量的增高和降低，菌丝的生长速度逐渐降低。菌株2h01在栽培料含水量65％时，菌丝生长速度最快，随着含水量的增加，菌丝的生长速度逐渐降低，菌株c2在含水量72.5％和75％的条件下未生长。菌株s在含水量65％时，菌丝的生长速度为8个菌株中最快的菌株。但随着含水量的增加，菌株hp的喜高湿度的特性就表现得更加明显，超越了菌株s，达到了生长速度最快的菌株，且随含水量的增加，hp菌株的生长速度变化较小，表现了其对高湿度条件的耐性，故选择菌株hp为耐湿菌株。
[0071]
3、抗木霉菌株筛选
[0072]
从出菇现场污染土块上及菌棒上采集10个样本进行了分离培养及纯化，将得到的8株菌株进行its和tef1测序及ncbi数据库序列比对，结果表明，分离物7株为哈茨木霉(trichoderma harzianum)，1株为棘孢木霉(trichoderma asperellum)。试验选择哈茨木霉为试验材料，将上述卵孢小奥德蘑菌株与哈茨木霉进行平板对峙试验，进一步筛选抗哈茨木霉的卵孢小奥德蘑菌株。
[0073]
平板对峙试验具体为：
[0074]
将直径0.5
㎝
的卵孢小奥德蘑菌丝块接种到培养皿的一侧，26℃恒温箱避光培养6d。之后，在平板另一侧对应位置接种同样大小的哈茨木霉菌丝块，两菌块间隔5cm，接种后置于26℃条件下培养，每个处理3个重复，避光培养7d。观察培养皿上哈茨木霉对卵孢小奥德蘑菌的侵染情况。
[0075]
图1为21个菌株在26℃条件下培养6d，相距5cm处接种木霉后，培养7d后的对峙试验结果。其中w1、d1、q、qgw未能抵御住木霉的侵染，被木霉越过拮抗线侵染。多个菌株的菌丝都可与木霉形成对峙，并且越过拮抗线生长，覆盖到木霉表面。菌株c1、d2能与木霉保持对峙，但卵孢小奥德蘑的菌丝未能覆盖木霉菌丝。菌株2h09出现棕菌皮，出现了菌株老化的特征。菌株sgw、lgw、h08gw是菌株s、l、2h08经过耐高温驯化得到的菌株，在与木霉的对峙试验中表现较未经过高温驯化的s、l、2h08，sgw、lgw和h08gw菌株，在相同的培养时间下覆盖到整个培养皿，但菌丝颜变为较白至淡黄。f2菌株生长越过拮抗线，且菌丝粗壮，长势较好。故在木霉对峙试验中，将sgw菌株和f2菌株作为筛选出的抗木霉菌株。
[0076]
4、耐盐碱菌株的筛选
[0077]
(1)耐盐菌株的筛选
[0078]
采用液体菌种配制一定浓度的盐溶液，液体菌种培养基配制后及时装入三角瓶内，同时加入10粒玻璃珠，分别配置成0.3％、0.7％、1.1％三个浓度的液体培养基，紧密包扎封口后121℃灭菌30min，取出冷却至室温后再接入对应菌株，标记菌株名称和接种日期。本试验摇床培养菌种时，温度为26℃，转速为200r/min，培养时间10d。一般瓶内培养基通透并含有较多菌丝球，同时散发出该菌类独特的气味时，摇瓶液体菌种培养结束。
[0079]
待菌丝长好后，用滤纸过滤出菌丝。将空的玻璃培养皿进行编号称重，将过滤好的菌丝转移至对应的平皿中，放入80℃的鼓风干燥机中进行烘干。烘干后对平皿进行称重，计算出菌丝质量。分别在含盐量0.3％、0.7％、1.1％三个梯度下进行试验，挑选出其中长速较快，长势好的菌株。结果见表7。
[0080]
表7：耐盐菌株筛选试验菌丝烘干质量
[0081][0082]
表7为6个菌株的耐盐试验的筛选结果，6个菌株为耐高温驯化试验、耐高湿度筛选试验、抗木霉菌株筛选试验中筛选出的菌株和未被筛选到的菌株t3。在盐浓度为0.3％的条件下，各菌株的生长未受到明显抑制，此时菌株s的生长最旺盛，菌丝干重最高。当盐浓度增加至0.7％时，所有菌株的菌丝生长速度都受到了不同程度的抑制，其中菌株s的菌丝干重变化幅度最大，故认为s易被盐浓度影响，耐盐特性较差；hp菌株的菌丝干重在此条件下为6个菌株中最高。当盐浓度增加至1.1％时，所有菌株生长速度缓慢，受到高渗透压的影响，菌丝在锥形瓶中围绕接种的菌块形成了紧实的菌球，形成小菌球的数量要少于低浓度条件下形成的。在盐浓度为1.1％时，各菌株菌丝干重都较低，hp菌株在6个菌株中菌丝干重最高，且hp菌株在0.7％浓度下也表现较好，故选择hp为耐盐菌株。
[0083]
(2)耐碱菌株的筛选
[0084]
采用液体菌种培养的方式，初试验发现，卵孢小奥德蘑菌株在ph为11.5的液体培养基中不能生长，故分别配制ph为7.5、9.5、10.5的液体培养基溶液，液体菌种培养基配制后及时装入三角瓶内，同时加入10粒玻璃珠，紧密包扎封口后121℃灭菌30min，取出冷却至室温后，选出三瓶培养基测ph，通常情况下ph值会向7降低，对这三瓶培养基进行ph的重新调节，平均这三个培养基加入的naoh的量，对其余培养基进行ph的重新调节，再接入对应的菌种，标记菌株名称和接种日期。本试验摇床培养菌种时，温度为26℃，转速为200r/min，培养时间10d。一般瓶内培养基通透并含有较多菌丝球，同时散发出该菌类独特的气味时，摇
瓶液体菌种培养结束。
[0085]
待菌丝长好后，用滤纸过滤出菌丝。将空的玻璃培养皿进行编号称重，将过滤好的菌丝转移至对应的平皿中，放入80℃的鼓风干燥机中进行烘干。烘干后对平皿进行称重，计算出菌丝质量。分别在ph为7.5、9.5、10.5的三个梯度下进行试验，挑选出其中长速较快，长势好的菌株。结果见表8。
[0086]
表8：耐碱菌株筛选试验菌丝长速
[0087][0088]
表8为6个菌株的耐碱试验的筛选结果，试验过程中发现所有菌株在ph为11.5的液体培养基中均不萌发，故最后一个梯度的ph定为10.5。试验结果如表13所示，各菌株在ph为7.5时长势最好。当ph增加到9.5和10.5时，所有菌株的生长都受到了很大的抑制，其中表现最好的是sgw，作为筛选出的耐碱菌株。
[0089]
5、原生质体育种
[0090]
原生质体融合育种的目的是将亲本的优势性状集合到一起，获得具有亲本优秀遗传性状的稳定融合菌株。
[0091]
将卵孢小奥德蘑耐高温驯化得到的菌株、高湿度试验中筛选出的菌株、耐盐试验筛选出的菌株、耐碱试验筛选出的菌株、抗木霉试验筛选出的菌株分别接种于培养基中，培养6d～10d，提取菌丝，加入酶液，制备原生质体，灭活原生质体融合，经原生质体融合并在(26℃，16h；32℃，8h)条件下再生后，筛选出y1～y10、z1～z10，共20个菌株。将20个菌株转接到新的平板，在(26℃，16h；34℃，8h)条件下培养，发现菌株y1、y4、y7、z1、z9在该条件下生长速度较快且长势好。将y1、y4、y7、z1、z9五株原生质融合再生菌株进行后续的筛选。
[0092]
将经过耐高温条件下再生的耐高温菌株，进行盐碱条件筛选。配置含盐量0.7％、ph为8.5的液体培养基溶液，液体菌种培养基配制后及时装入三角瓶内，同时加入10粒玻璃珠，紧密包扎封口后121℃灭菌30min，取出冷却至室温后对液体培养基进行ph的重新调节，再接入对应的菌种，标记菌株名称和接种日期。本试验摇床培养菌种时，温度为26℃，转速为200r/min，培养时间10d左右。一般瓶内培养基通透并含有较多菌丝球，同时散发出该菌类独特的气味时，摇瓶液体菌种培养结束。
[0093]
待菌丝长好后，用滤纸过滤出菌丝。将空的玻璃培养皿进行编号称重，将过滤好的菌丝转移至对应的平皿中，放入80℃的鼓风干燥机中进行烘干。烘干后对平皿进行称重，计算出菌丝质量，挑选出其中长速较快，长势好的菌株，定为具有耐高温特性，且具备一定耐盐碱特性的菌株。
[0094]
表9为菌株y1、y4、y7、z1、z9进行耐盐碱筛选试验的筛选结果，菌株y7的菌丝长势较差，液体培养基中菌丝的烘干质量低，故剔除菌株y7，保留y1、y4、z1、z9菌株。
[0095]
表9：盐碱筛选试验
[0096][0097]
以初始菌株s为对照，对比经过耐高温条件下再生，且在耐盐碱条件下筛选出的卵孢小奥德蘑菌株在高温胁迫后接种哈茨木霉的感染情况。将卵孢小奥德蘑菌株接种到培养皿的一侧，26℃恒温箱避光培养5d，置于36℃条件下培养1d。之后，在平板另一侧对应位置接种同样大的哈茨木霉菌种，接种后置于26℃条件下培养，每个处理3个重复，避光培养5d。观察培养皿上哈茨木霉对卵孢小奥德蘑菌株的侵染情况。挑选其中与哈茨木霉对峙表现良好的菌株，定为具有耐高温特性、具备一定耐盐碱特性、且对哈茨木霉有一定抗性的菌株，即为本试验筛选出的抗性菌株。
[0098]
图2为初始菌株s和原生质体育种选育出的菌株在36℃胁迫1d后接种哈茨木霉的侵染情况。如图2所示未经过耐高温驯化的菌株s和经过多种逆境驯化并通过原生质体育种选育出的菌株，在受到36℃高温胁迫1d后，菌株s未能与哈茨木霉形成明显的对峙，几乎被哈茨木霉的菌丝完全覆盖。而经过选育的菌株在经过高温胁迫后，保持了自身的活性，并在温度变回到最适培养温度26℃时，形成了高温抑制线，并逐渐向外延伸菌丝。由此试验可看出经过逆境驯化和筛选的菌株，再经过原生质体融合，条件下再生试验，获得的抗性菌株，在经过高温胁迫后仍能保持一定的活性，并与哈茨木霉形成有效的对峙。
[0099]
将上述菌株进行出菇试验，结果如图3所示，结果表明：与其他试验菌株相比，y1出菇早抗污染能力强。
[0100]
综合考虑菌株的耐盐碱、耐高温、抗木霉性能和出菇性能，本发明选择原生质体融合菌株y1进行生物保藏。
[0101]
菌株y1的保藏信息如下：
[0102]
参据的生物材料(株)：y1；
[0103]
分类命名：卵孢小奥德蘑oudemansiella raphanipes；也可称为黑皮鸡枞菌oudemansiella raphanipes。
[0104]
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
[0105]
保藏机构简称：cgmcc
[0106]
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0107]
保藏日期：2022年8月26日.
[0108]
保藏中心登记入册编号：cgmcc no.40285。
[0109]
实施例2：出菇试验
[0110]
将耐高温驯化(sgw、h08gw)、耐高湿度筛选(hp)、耐盐碱筛选(sgw、hp)、木霉对峙筛选(f2、sgw)、原生质体育种筛选出的抗性菌株y1，对其进行栽培试验。
[0111]
2022年6月在冬暖式大棚内进行覆土栽培，7月1日开始出菇，8月中旬出菇结束，出菇期气温23℃～30℃，地温25℃～26℃，出菇期co2浓度比较稳定，通常在25～29ppm，光照100～200lux，出菇的环境湿度80％～90％。进行出菇质量统计，并对木霉污染情况进行统计。
[0112]
卵孢小奥德蘑的分级标准如表10所示。
[0113]
表10：卵孢小奥德蘑分级标准
[0114][0115]
对木霉污染的情况以菌棒污染率进行计算：
[0116]
菌棒污染率(％)＝(埋土中污染菌棒/埋土中的总菌棒)
×
100％
[0117]
抗性菌株y1的一级菇照片如图4所示；抗性菌株y1的大田出菇照片如图5所示。具体的出菇试验的结果见表11。
[0118]
表11：卵孢小奥德蘑出菇情况及产量统计
[0119][0120]
注：表中出菇产量为9个菌包的总产量，每个菌包500g左右。
[0121]
综上，本发明的卵孢小奥德蘑菌(oudemansiella raphanipes)y1菌株的综合抗逆(耐高温、耐高湿、耐盐碱和抗木霉感染)能力得到大幅提高，有效解决了卵孢小奥德蘑菌夏季栽培时污染率高至减产甚至绝产的问题，在生产上具有较高的推广应用价值。
[0122]
以上所述仅为本技术的优选实施例而已，并不用于限制本技术，对于本领域的技术人员来说，本技术可以有各种更改和变化。凡在本技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。

技术特征：

1.一株卵孢小奥德蘑菌(oudemansiella raphanipes)，其保藏编号为cgmccno.40285。2.权利要求1所述的卵孢小奥德蘑菌株作为亲本在育种中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述育种为卵孢小奥德蘑菌株抗逆品种培育。4.栽培权利要求1所述的卵孢小奥德蘑菌株得到的子实体。5.培养权利要求1所述的卵孢小奥德蘑菌株得到的菌丝体和/或孢子。6.一种选育抗逆性强的卵孢小奥德蘑菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分别驯化及初筛选耐高温的卵孢小奥德蘑菌株、筛选耐高湿度的卵孢小奥德蘑菌株、筛选抗木霉的卵孢小奥德蘑菌株和筛选耐盐碱的卵孢小奥德蘑菌株；(2)以步骤(1)筛选出的卵孢小奥德蘑菌株作为亲本进行原生质体融合，对原生质体融合菌株进行再次抗逆境筛选，选育得到抗逆性强的卵孢小奥德蘑菌株。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，驯化及筛选耐高温的卵孢小奥德蘑菌株的方法为：依次进行(26℃，16h；30℃，8h)、(26℃，16h；32℃，8h)、(26℃，16h；34℃，8h)、(26℃，16h；36℃，8h)四个温度层次的循环驯化筛选，每个梯度进行16次循环后，测量各菌株的在该温度条件下的生长速度；最终筛选出可在36℃条件下耐受8h的菌株。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，对原生质体融合菌株进行再次抗逆境筛选具体包括：将原生质体融合后的融合子在(26℃，16h；32℃，8h)条件下再生，再生后的菌株转接到新的平板，在(26℃，16h；34℃，8h)条件下培养，筛选生长速度较快且长势好的菌株，在含盐量0.7％、ph为8.5的条件下再进行耐盐碱筛选；将耐盐碱条件下筛选出的菌株在高温胁迫后接种哈茨木霉，挑选与哈茨木霉对峙表现良好的菌株。

技术总结

本发明公开了一株抗逆性卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)菌株及其应用，属于食用菌技术领域。本发明针对卵孢小奥德蘑菌株在商业化栽培中，菌株适应性、抗逆性退化突出，尤其是夏季高温高湿且易爆发木霉污染等问题，将高温、高湿度、抗盐碱和木霉污染作为逆境条件，将收集菌株在初筛的基础上进行抗逆境条件下驯化，然后再将筛选出优势菌株进行原生质体融合技术育种，将融合子经过逆境条件下再生筛选培养，最后通过生理试验、出菇验证，评价其优势抗性，得到一株综合抗逆性强的卵孢小奥德蘑菌株，其保藏编号为CGMCC No.40285，有效解决了目前限制卵孢小奥德蘑大规模种植的问题。决了目前限制卵孢小奥德蘑大规模种植的问题。决了目前限制卵孢小奥德蘑大规模种植的问题。