头痛的中药组合物的质量检测方法

头痛的中药组合物的质量检测方法 

本发明为分案申请，原案申请号为200810057967.8，原案申请日为2008年2月22日，原案名称为头痛的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。 

技术领域

本发明涉及一种药物组合物，尤其涉及一种头痛的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于中药技术领域。 

背景技术

头痛是临床上常见的病症，而目前以头痛为主症者则可见于感染性发热性疾病，高血压病、颅内疾患、神经官能症、脑震荡和偏头痛等病。 

凡外感六淫，内伤脏腑，导致阳气阻塞，浊邪上锯，肝阳上亢，精髓气血亏损，经络运行失常者，均能发生头痛。按病因分，头痛有外感、内伤之别。外感头痛，有感冒风寒、风热、风湿、伤暑，火邪致痛及伤寒头痛等。内伤头痛，有气虚、血虚、阳虚、阴虚、肝阳、伤食、瘀血致痛等。从经络分，有三阳头痛（太阳头痛、阳明头痛、少阳头痛）、三阴头痛（太阴头痛、少阴头痛、厥阴头痛）等。按病情轻重、病程长短、发作规律及疼痛部位分，有真头痛、头风、偏头痛、雷头痛、脑风、巅顶痛、久头痛等。 

头痛是因头颈部痛觉末梢感受器受到刺激产生异常的神经冲动传达到脑部所致。颅外组织除颅骨本身外，自骨膜直至五官、口腔均对疼痛敏感；颅内组织只有静脉窦及其回流静脉、颅底硬脑以及脑底动脉对疼痛敏感，脑部其余组织均对痛觉不敏感。颅内痛觉经第Ⅴ、Ⅳ、Ⅹ对脑神经和第2～3对颈神经传导，颅外痛觉除上述神经外，尚可经交感神经传导。 

首先在于积极预防和各种原发病。对症则可使用除类以外的止痛药物，如各种解热止痛剂，可根据病情顿服或短期2‑3次/d服用，严重者可少量服用可待因、颅痛定或二氢等。但以上这些药物长时间服用不仅会有成瘾性，而且耐受性差，无法从根本上解决患者的头痛问题。中药头痛不仅可以达到标本兼治的作用，能够有效各种原发病，而且不会产生依赖性，提高了患者使用的安全性。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种头痛的中药组合物；本发明的另一个目的在于提供该中药组合物的制备方法；本发明的第三个目的在于提供该中药组合物的质量控制方法。 

本发明目的是通过如下技术方案实现的： 

本发明所述的头痛的中药组合物的原料药组成为： 

羊角1300‑1500重量份、川芎200‑400重量份、白芷300‑500重量份、制川乌100‑300重量份。 

上述原料优选配比为： 

羊角1350‑1450重量份、川芎200‑300重量份、白芷400‑500重量份、制川乌100‑200重量份。 

本发明所述的头痛的中药组合物还可由如下重量比的原料药制成的： 

羊角1300‑1500重量份、川芎200‑400重量份、白芷300‑500重量份、制川乌100‑300重量份、钩藤100‑300重量份。 

上述原料优选配比为： 

羊角1350‑1450重量份、川芎200‑300重量份、白芷400‑500重量份、制川乌100‑200重量份、钩藤150‑250重量份。 

上述原料优选配比为： 

羊角1400重量份、川芎250重量份、白芷450重量份、制川乌150重量份、钩藤200重量份。 

上述本发明中药组合物原料药中： 

羊角可以由珍珠母、代赭石、牡蛎、刺蒺藜或鲜天麻替代；白芷可以由防风、羌活或苍耳子替代。 

本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴丸剂、软胶囊剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着剂、粘合剂、润滑剂、基质等。 

本发明所述的头痛的中药组合物的片剂的制备方法为： 

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至50℃时相对密度为1.32～1.35的稠膏；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩至50℃时相对密度为1.32～1.35的稠膏，与羊角膏及糊精100～150g混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包衣，即得。 

羊角镑片是指将质地坚硬的羊角原料药材，按照传统炮制工艺用特制的镑刀镑成极细的饮片。 

本发明药物组合物质量控制方法包括如下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种或几种： 

（1）川芎的定性检测 

取本发明药物组合物内容物，研细，加乙醚超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液； 

取川芎对照药材，加乙醇超声处理制备成对照药材溶液； 

照薄层谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点； 

（2）白芷的定性检测 

取本发明药物组合物内容物，研细，加无水乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇分散，取上清液作为供试品溶液； 

取白芷对照药材，按照供试品溶液制备方法制备成对照药材溶液； 

照薄层谱法试验，吸取上述二种溶液各，分别点于同一硅胶G薄层板上，以‑甲醇‑甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点； 

（3）的定性限量检查 

取本发明药物组合物内容物，粉碎成细粉，精密称取，加氨试液，放置，加乙醚，振摇，放置，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇溶解，作为供试品溶液； 

取对照品，加无水乙醇制成对照品溶液； 

照薄层谱法试验，吸取上述两种溶液点于同一硅胶G板上，以环己烷‑醋酸乙酯‑二乙胺为展开剂，展开，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上出现的斑点颜应浅于对照品斑点或不出现斑点； 

(4)阿魏酸的定量检测： 

照高效液相谱法测定； 

谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑水‑冰醋酸为流动相；检测波长为322nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1500； 

对照品溶液的制备：精密称取阿魏酸对照品，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得； 

供试品溶液的制备：取取本发明药物组合物内容物，研细，精密称定，加甲醇，加热回流，放冷.滤过，残渣用甲醇洗2次，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水‑氨水分次溶解，置 分液漏斗中，用乙醚洗2次，弃去乙醚液，水液用稀盐酸调pH，用乙醚萃取4次，合并乙醚液，用水洗，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；   

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明药物组合物质量控制方法包括如下优选的定性检测方法和/或定量检测方法中的一种或几种： 

（1）川芎的定性检测 

本发明药物组合物内容物相当于原药材49g，研细，加乙醚30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，加乙醇30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层谱法试验，吸取供试品溶液8μl 、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7：3比例的环己烷‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点； 

（2）白芷的定性检测 

本发明药物组合物内容物相当于原药材15g，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml分散，取上清液作为供试品溶液；另取白芷对照药材1g，同法制备成对照药材溶液；照薄层谱法试验，吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9：1：0.1比例的‑甲醇‑甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点； 

（3）的定性限量检查 

本发明药物组合物内容物，粉碎成细粉，精密称取5g，加氨试液5ml，放置2小时，加乙醚100ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含2mg的对照品溶液；照薄层谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl点于同一硅胶G板上，以7：2：0.5比例的环己烷‑醋酸乙酯‑二乙胺为展开剂，展开，凉干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上出现的斑点颜应浅于对照品斑点或不出现斑点； 

(4)阿魏酸的定量检测： 

照高效液相谱法测定； 

谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20:80:1比例的乙腈‑水‑冰醋酸为流动相；检测波长为322nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1500； 

对照品溶液的制备：精密称取阿魏酸对照品3mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含阿魏酸30µg，即得； 

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物内容物适量，研细，取2.5 g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1h，放冷.滤过，残渣用5ml的甲醇洗2次，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加20:2比例的水‑氨水20ml分次溶解，置分液漏斗中，用20ml的乙醚洗2次，弃去乙醚液，水液用稀盐酸调pH至2，用乙醚萃取4次，每次20ml，合并乙醚液，用30ml的水洗，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。 

本发明药物中羊角平肝，镇惊，适用于肝阳上亢，头晕目眩，肝火上炎，目赤肿痛，惊风抽搐等症，为君药；川芎、白芷、制川乌祛风除湿，行气止痛为臣药；钩藤清热，平肝，息风，为佐药；各药合用共奏平肝，镇痛之效，用于偏头痛、血管性头痛、紧张性头痛及神经性头痛，效果显著。 

由于处方中含有大量的挥发性成分，在本发明药物的制备过程中选择渗漉法提取有效成分，是使药物疗效得到提高的关键；且制剂中含有的浸膏粉有很强的吸湿性，如果仅制成素片，不仅容易吸潮，影响药物的溶解，分布、吸收和制剂的稳定性，制成包衣片则可以有效避免以上问题。 

通过本发明的质量控制方法，不仅定性检测川芎、白芷，还对进行了含量限度检查，而且定量控制药物中阿魏酸的含量，显著地控制产品的质量和疗效，保证了本发明药物的安全性。 

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的内容，下面对本发明药物组合物及其制备方法和质量控制方法进行详细的说明。 

有益效果

以下试验例及实施例用于进一步说明本发明但不限于本发明。 

试验例1   工艺试验研究 

1、渗漉速度试验： 

按实施例1处方配置三份药材，每份含川芎250g，白芷450g,制川乌150g、钩藤200g加30%乙醇作溶剂，冷浸24小时，渗漉，共分五组,渗漉速度分别为：100ml/min.kg、120ml/min.kg、150ml/min.kg、180 ml/min.kg、200 ml/min.kg，根据出膏量确定渗漉速度。 结果见表1。 

表 1：渗漉速度试验 

根据以上数据，可以看出，渗漉速度为150ml/min.kg， 出膏基本完全，实际生产中渗漉速度定为150ml/min.kg。 

2、粉碎药材的粉碎细度试验 

按实施例1处方量配置川芎 、白芷、制川乌。分别分四组做实验：粉碎细度分别为：10目、24目、50目、65目，分别以粉碎损耗为指标确定粉碎细度。结果见表2:

表2：粉碎试验结果 

以上结果表明：粉碎细度为24目时，各项指标较好，故生产中选用24目。 

3、加水量试验 

按实施例1处方配制三份药材，每份含羊角镑片1400g分组进行试验， 第一组加水量为药材的6倍量、4倍量；第二组加水量为药材10倍量、8倍量；第三组加水量为药材8倍量、6倍量。以出膏量为主要指标确定加水量。见表3： 

表3：加水量试验 

以上结果表明：以出膏量为指标加水量8倍量、6倍量提取基本完全，根据实际生产需要加水量确定为8倍量、6倍量。 

4、辅料的选择: 

鉴于本发明药物内容物为全浸膏,具有很强的粘性和吸潮性,不利于制剂成型，需加入适宜的填充剂，分别对糊精、淀粉、乳糖进行考查，考查结果见表4： 

表4　填充剂的考查结果 

  综合评定结果

糊精 可压性强，价格低廉。

淀粉 单独作为填充剂，可压性差。

乳糖 价格较贵，规格也不一致。

[0083] 故选用糊精，既可改变片的粘性，又易于压片，选择糖衣片，具有一定的防潮、隔绝空气作用并可掩饰不良气味，改善外观并易于吞服。

5、糖衣片包衣工艺 

5.1隔离层：将素片置于包衣锅中滚动，加入混合浆（35％桃胶：70％糖浆＝1：5）使均匀粘附于片面上（素片：混合浆＝50 g：1 ml），吹热风干燥，为防止药片相互粘连或粘附在包衣锅上，加入滑石粉，热风40～50℃下干燥，重复操作两次。 

5.2粉衣层：片子继续在包衣锅中滚动，加入70％糖浆，使片子表面均匀润湿后，加入滑石粉，使粘着在片子表面，继续滚动并吹风干燥（50～55℃），重复操作，直到片子棱面消失为止，按素片重：70％糖浆：滑石粉＝3：1.7：1投料。 

5.3糖衣层：片子在包衣锅中滚动，加入70％糖浆（素片：70％糖浆＝15：1，糖浆加入量由大到小递减）片子表面缓缓干燥，形成细腻糖晶体衣层，增加衣层牢固性和甜味。 

5.4有糖衣层：用70％糖浆稀释成2mg/ml的浆，将浆用70％糖浆稀释成不对浓度，浓度由小到大，加入包衣锅，层层干燥。素片与素用量比为7.5kg：1g。 

5.5打光：为糖衣片表面光亮美观，兼有防潮作用，加入虫白蜡，按素片：虫白蜡＝3kg：5g加入，转动包衣锅使虫白蜡均匀的包在片子上，取出包衣片，干燥24小时后，即得。 

实验例2 质量检测方法试验研究 

1 、川芎的薄层鉴别 

（1）供试品溶液与对照品溶液的制备 

取按照实施例1制备的制剂20片共四份，除去糖衣，研细，分别加乙醚30ml超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。 

取川芎对照药材1g共四份，加乙醇30ml超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。 

按照实施例1制备方法制备缺川芎的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

照薄层谱法试验，吸取供试品溶液及阴性对照溶液各8μl 、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷‑醋酸乙酯（7：3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。比较不同提取时间，供试品溶液与对照药材溶液在薄层板上的显效果，结果见下表5： 

表5      超声提取时间的比较 

（2）展开剂的选择 

按照上述优选的方法制备供试品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液，照薄层谱法试验，吸取供试品溶液及阴性对照溶液各8μl 、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。比较不同展开剂，供试品溶液与对照药材溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表6： 

表6  展开剂的选择 

从上表可以看出，选择环己烷‑醋酸乙酯7：3为展开剂，展开效果好，且阴性无干扰，符合试验要求。通过多次重复试验，证明该方法稳定性和重现性均好，故以川芎的定性检测作为本发明药物组合物的质量控制方法之一。 

2、白芷的薄层鉴别 

取按实施例1制备的制剂6片，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml分散，取上清液作为供试品溶液。 

取白芷对照药材1g，同法制备成对照药材溶液。 

按照实施例1制备方法制备缺白芷的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

（1）展开剂的比较 

按上述的方法制备供试品、对照药材溶液及阴性对照品溶液，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以‑甲醇‑甲酸为展开剂，配比分别为7：3：0.2、8：2：0.1、9：1：0.2、9：1：0.1,展开，取出，晾干，置紫外光（365nm）下检视。比较供 试品溶液和对照品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表7： 

表7 展开剂配比的选择 

从上表可以看出，以‑甲醇‑甲酸9：1：0.1为展开剂时，供试品溶液和对照品溶液在薄层板上展开效果最好，且阴性无干扰，符合试验要求。 

（2）点样量的选择 

按上述方法制备供试品和对照药材溶液，吸取供试品溶液2µl、5µl、8µl、10µl，对照品溶液10µl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯‑醋酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，用浓氨溶液熏3分钟后，置紫外光（365nm）下检视。比较供试品溶液和对照品溶液在薄层板上的显效果，结果见下表8： 

表8  供试品点样量的选择 

点样量 2µl 5µl 8µl 10µl

显效果 没有显斑点 斑点显很浅 斑点显浅 斑点显清晰

从上表可以看出，对照品溶液点样量为10µl，供试品溶液与对照品溶液薄层板相应位置，斑点显清晰，符合试验要求，继续加大点样量则点样点直径过大，影响了点样的质量。

3、的定性限量检查 

发明人在确定的定性限量检查前，对本发明药物中的含量进行了研究。结果如下： 

含量测定　照高效液相谱法(附录VID)测定。 

谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－0.5％三乙胺(4：1) 为流动相；检测波长为235nm；流速：0.5ml/min； 柱温：室温；柱型：安捷伦，C18,150mm。 

对照品溶液的制备  精密称取对照品适量，加甲醇制成每1ml 含0.25mg 的溶液，即得。 

供试品溶液的制备  取按照实施例1制备的本发明药物制剂适量，去糖衣，粉碎成细粉，精密称取粉末2g，加氨水2ml润湿5min后加二氯甲烷25ml，振摇提取30min，倾出提取液，再用25ml二氯甲烷分数次洗涤药渣与容器，合并二氯甲烷，水浴（80℃）蒸干，残渣用甲醇溶解，并定容至10ml，微孔过滤，即得。 

结果 所测本发明药物中含量低于万分之一，且分离效果差，故检测方法没有包括 的含量检测。 

虽然对的定量检测没有列入质量控制方法中，但由于属于毒性成分，所以对本发明药物的质量控制中必须进行的检测，然后对进行了定性限量检查试验，结果如下： 

供试品溶液的制备  取按照实施例1制备的本发明药物制剂适量，去糖衣，粉碎成细粉，精密称取5g，加氨试液5ml，放置2小时，加乙醚100ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。 

对照品溶液的制备  根据2005版药典中对制川乌中限量的规定，取对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含2mg的对照品溶液。 

照薄层谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl点于同一硅胶G板上，以环己烷‑醋酸乙酯‑二乙胺的不同配比为展开剂，展开，凉干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上出现的斑点颜应浅于对照品斑点或不出现斑点。结果见下表9： 

表9  展开剂配比的选择 

从上表可以看出，以环己烷‑醋酸乙酯‑二乙胺7：2：0.5为展开剂，展开效果好，且稳定性好，符合试验要求。 

4、川芎中阿魏酸含量测定  

方法一： 

检测仪器：岛津公司SPD‑10ATvp型高效液相谱仪 

 谱 柱：迪玛公司（Zorbax C18 4.6×150 mm , 5µm） 

流 动 相：甲醇‑2%冰醋酸（1：4）                 流    速：0.800ml/min 

检测波长： 323nm                                柱    温：室温 

阿魏酸对照品  购于中国药品生物制品检定所 批号：0773‑9910 

对照品溶液的制备  精密称取阿魏酸对照品适量，加流动相制成每1ml含25µg的溶液， 作为对照品溶液。 

供试品溶液的制备  取按照实施例1制备的本发明药物制剂适量，去糖衣，粉碎，取粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，精密称重，超声处理30分钟，放凉，称重，用流动相补足减失的重量， 摇匀，微孔滤膜过滤，即得 

阴性对照溶液  按照实施例1的方法制备缺川芎的空白样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。 

用微孔滤膜（0.45µm），分别精密吸取阴性对照液、对照品溶液与供试品溶液各5～10µl,注入液相谱仪，测定。 

结果：阿魏酸对照品出峰时间为6.3min，在供试品谱与阴性对照谱中此处也有峰，随后更换流动相为甲醇‑2%冰醋酸（32：68），阴性仍有干扰且含量很低。

方法二： 

仪器  岛津LC一10A高效液相谱仪，检测器:SPD ‑IOA紫外检测器。工作站:依利特 EC2003谱工作站。 

试药  阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:0773‑9910);本发明药物(按照实施例1自制)；甲醇、乙睛为谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。 

谱条件  谱柱:Hypesil C18（250 mm x4.6 mm, 5µm)带前置保护柱;乙腈‑水‑冰醋酸(20: 80:1)为流动相;流速为1.0 ml/min;检测波长为322 nm。理论板数按阿魏酸峰计算，应不低于1500。 

对照品溶液的制备  精密称取阿魏酸对照品3mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含阿魏酸30µg）。 

供试品溶液的制备  取本品适量，研细，取2.5 g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1h，放冷.滤过，残渣用5ml的甲醇洗2次，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水‑氨水(20:2)20ml分次溶解，置分液漏斗中，用20ml的乙醚洗2次，弃去乙醚液，水液用稀盐酸调pH至2，用乙醚萃取4次，每次20ml，合并乙醚液，用30ml的水洗，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。   

阴性对照溶液的制备   按实施例1处方量除去川芎，制得阴性对照制剂，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。 

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。 

结果：阿魏酸的谱峰分离良好，制剂中无其他成分的干扰，保留时间为11min。经方法学考察，本发明检测方法线性、精密度、稳定性、重现性及回收率均好，能够准确测定药物中阿魏酸的含量。 

根据以上两种方法的考察结果，确定以方法二为本发明药物中阿魏酸的含量检测方法。 

5、 白芷中欧前胡素的含量测定 

检测仪器：岛津公司SPD‑10ATvp型高效液相谱仪 

 谱 柱：迪玛公司（Zorbax C18 4.6×150 mm , 5µm） 

流 动 相：甲醇‑水（55：45）              流    速：1.000ml/min 

检测波长： 300nm                             柱    温：室温 

欧前胡素对照品  购于中国药品生物制品检定所 批号：11826‑200410 

对照品溶液的制备  精密称取欧前胡素对照品适量，加流动相制成每1ml含10µg的溶液，作为对照品溶液。 

供试品溶液的制备  取按照实施例1制备的本发明药物制剂适量，去糖衣，粉碎，取粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，精密称重，超声处理30分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，微孔滤膜过滤，即得。 

阴性对照溶液  按照实施例1的方法制备缺白芷的空白样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。 

用微孔滤膜（0.45µm），分别精密吸取阴性对照液、对照品溶液与供试品溶液各5～10µl,注入液相谱仪，测定。 

结果：欧前胡素对照品出峰时间为8.5min，在供试品谱与阴性对照谱中此处没有峰出现，随后取部分白芷药材粉末按照成药的制备方法制备样品，再按供试品制备方法处得单味白芷药材供试品溶液，结果同样未能检测出欧前胡素，说明白芷的30%乙醇提取液中没有欧前胡素。 

根据以上实验结果，因此未将欧前胡素的含量测定列入本发明药物的质量控制方法中。 

6、醇溶性浸出物的定量检测： 

通过对本发明药物中、阿魏酸、欧前胡素的含量检测方法的研究，但由于以上三种成分含量过低，故未能在本发明药物的质量控制方法中建立起、阿魏酸、欧前胡素的含量检测方法。发明人又对浸出物含量进行了研究，拟定如下：用甲醇为溶剂，照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定。三批浸出物检测结果见表10： 

表10：浸出物检测结果 

批号 浸出物结果

1701 27.5％

1802 26.8％

1903 28.4％

[0170] 从上表可以看出，使用该方法能够稳定地控制药物中总有效成分含量，保证药物疗效。 

7、含氮量的测定： 

本发明药物中羊角含有大量角蛋白，经水解后为多种氨基酸类物质，因此对含氮量的测定能够更有效控制本发明药物的质量，保证药品使用的安全性、有效性，提高药品质量标准的科学性。 

取按照实施例1制备的本发明药物片剂3批，除去糖衣，粉碎成细粉，精密称取0.4g，采用中国药典2005年版一部附录IXL第一法测定，结果如下： 

表11：氮含量检测结果 

批号 氮含量

1701 5.9％

1802 6.1％

1903 6.2％

从上表可以看出，使用该方法控制药物中含氮量稳定性、重现性均较好。 

试验例3   药效学试验研究 

1、 试验材料 

1.1 药物  本发明药物Ⅰ、Ⅱ分别为按照实施例1、2制备的片剂； 

阳性对照药物为复方羊角片，由黑龙江江宝制药厂出品； 

以上药物用时研碎并配成20%的混悬液灌胃。 

1.2 动物  昆明种小鼠及Wistar种大鼠，由本院试验动物室提供。 

2、 方法及结果 

2.1 镇痛作用 

2.1.1  热板法：选取20±2g雌性小鼠40只，随机分为4组，给药组灌胃给与本发明药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ5.3g/kg(所含生药量)、阳性对照药物（复方羊角片）3.9g/kg(所含生药量)，阴性对照组给同体积水，每天1次，连续7天，末次给药后1h，将动物置于55±1℃热板上，记录动物从放入至开始舔后足的时间（即痛阈值），每隔1h测定1次，共测3次。结果见表12． 

表12  对热刺激痛阈值的影响（X±SD） 

与阴性对照组比较##P＜0.01，# P＜0.05；与阳物对照组比较*P＜0.05.  

从以上结果可以看出，本发明药物与阳性对照药物均能显著提高小鼠对热刺激的痛阈值，其中本发明药物Ⅰ的效果显著好于阳性对照药物。 

2.1.2   醋酸扭体法：昆明种小鼠雌雄各半，分组与给药同2.1.1，末次给药后 30min，小鼠腹腔注射1%醋酸溶液0.1ml／10g，记录10min内动物的扭体次数 结果见表13．  

表13    对醋酸扭体反应的影响（X±SD） 

组别 剂量（g/kg*d） 扭体次数

阴性对照组（10） 0*7 39.8±4.8

阳性对照药物组（10） 3.9*7 33.6±6.9#

本发明药物Ⅰ（10） 5.3*7 27.8±7.3##*

本发明药物Ⅱ（10） 5.3*7 29.7±6.8##

与阴性对照组比较##P＜0.01，# P＜0.05；与阳物对照组比较*P＜0.05. 

从以上结果可以看出，本发明药物与阳性对照药物均能显著减少小鼠醋酸扭体反应的次数，本发明药物Ⅰ的效果显著好于阳性对照药物。 

2．2     对体外血栓形成和血液粘度的影响： 

2．2．1  对大鼠体外血栓形成的影响：成年大鼠40只，雌雄各半，分组及给药同2.1.1，末次给药后30min取静脉血测体外血栓长度、湿重及干重。结果见表14： 

表14  对大鼠体外血栓形成的影响（X±SD） 

与阴性对照组比较##P＜0.01，# P＜0.05；与阳物对照组比较*P＜0.05. 

本发明药物与阳性对照药物均能显著抑制大鼠体外血栓形成，血栓长度、湿重、干重均有明显降低，本发明药物的抑制作用优于阳性对照药物，尤其对血栓长度有显著抑制作用。 

2．2．2  对小鼠全血粘度的影响：小鼠分组与给药同2.1.1，末次给药30min摘除眼球取血并置于肝素化的小瓶中摇匀，然后测其全血粘度(比)。结果见表15。 

表15  对小鼠全血粘度的影响（X±SD） 

本发明药物与阳性对照药物均能降低小鼠全血粘度，本发明药物的作用优于阳性对照药物。 

以下实施例用于进一步说明本发明。 

实施例1 

羊角1400g     川芎250g       白芷450g      制川乌150g      钩藤200g     

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及100g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。 

实施例 2 

羊角1400g               川芎250g           白芷450g      制川乌150g  

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及116g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。 

实施例 3 

羊角1300g         川芎400g         白芷300g     制川乌300g           钩藤100g 

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.32的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.32的稠膏（50℃），与羊角膏及105g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。 

实施例 4 

羊角1500g         川芎200g         白芷500g     制川乌100g           钩藤300g 

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及135g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。 

实施例 5 

羊角1350g         川芎200g         白芷400g     制川乌100g           钩藤150g 

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及118g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包薄膜衣，即得。 

实施例 6 

羊角1450g         川芎300g         白芷500g     制川乌200g           钩藤250g 

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及100g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包薄膜衣，即得。 

实施例 7  胶囊剂 

珍珠母1400g     川芎250g       白芷450g      制川乌150g      钩藤200g     

珍珠母加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时， 分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及100g糊精混匀，制粒，干燥，整粒，装入1000粒胶囊，即得。 

实施例 8 颗粒剂 

鲜天麻1400g     川芎250g       羌活450g      制川乌150g      钩藤200g     

鲜天麻加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及200g糊精、400g蔗糖混匀，制粒，干燥，整粒，制成颗粒800g，即得。 

实施例 9  口服液 

牡蛎1400g     川芎250g       防风450g      制川乌150g      钩藤200g     

牡蛎加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.15~1.20的清膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.15~1.20的清膏（50℃），与羊角清膏混匀，另取蔗糖650g加水煮沸，溶解后，滤过，浓缩制成糖浆，与上述浓缩清膏混匀，煮沸，放冷，加入防腐剂与香精，并用冷开水稀释至1000ml，即得。 

实施例 10  滴丸 

代赭石1400g     川芎250g      苍耳子450g      制川乌150g      钩藤200g     

代赭石加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角清膏混匀，真空干燥，干膏粉碎至150目，与熔融的聚乙二醇4000按照3：7的比例混合均匀，制成滴丸，即得。 

实施例11   软胶囊 

词蒺藜1400g     川芎250g       白芷450g      制川乌150g      钩藤200g     

刺蒺藜加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与 浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角清膏混匀，真空干燥，干膏粉碎至150目，与大豆油按照1：2的比例混合均匀，压制成软胶囊，即得。 

实施例12  实施例1‑6制备的本发明药物片剂的质量控制方法                     

鉴别： 

（1）取本品20片，研细，加乙醚30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法（《中国药典》2005年版 附录Ⅵ  B）试验，吸取供试品溶液8μl 、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷‑醋酸乙酯（7：3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。 

（2）取本品6片，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml分散，取上清液作为供试品溶液。另取白芷对照药材1g，同法制备成对照药材溶液。照薄层谱法（《中国药典》2005年版 附录Ⅵ  B）试验，吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以‑甲醇‑甲酸（9：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。 

限量检查 ： 

取本品去糖衣，粉碎成细粉，精密称取5g，加氨试液5ml，放置2小时，加乙醚100ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液，另取对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含2mg的对照品溶液。照薄层谱法试验（《中国药典》2005年版 附录VIB），吸取上述两种溶液各2μl点于同一硅胶G板上，以环己烷‑醋酸乙酯‑二乙胺（7：2：0.5）为展开剂，展开，凉干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品斑点或不出现斑点。 

浸出物含量测定： 

照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用甲醇作溶剂，不得少于18.0％。 

氮含量测定： 

取本品适量，除去糖衣，粉碎成细粉，精密称取0.4g，照氮测定法测定（中国药典2005年版一部附录Ⅸ L第一法），本品含氮量不得少于4.0％。 

阿魏酸含量测定 

照高效液相谱法（《中国药典》2005年版附录Ⅵ  D）测定。 

谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑水‑冰醋酸（20:80:1)为流动相；检测波长为322nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1500。 

对照品溶液的制备  精密称取阿魏酸对照品3mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含阿魏酸30µg）。 

供试品溶液的制备  取本品适量，除去糖衣，研细，取2.5 g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1h，放冷.滤过，残渣用5ml的甲醇洗2次，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水‑氨水(20:2)20ml分次溶解，置分液漏斗中，用20ml的乙醚洗2次，弃去乙醚液，水液用稀盐酸调pH至2，用乙醚萃取4次，每次20ml，合并乙醚液，用30ml的水洗，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。 

本品每片含川芎以阿魏酸（C₁₀H₁₀O₄）计，不得少于0.08mg。 

实施例13 

羊角1400g          川芎250g           白芷450g      制川乌150g  

羊角镑片，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮3小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成1.35的稠膏（50℃）；其余川芎等粉碎至24目，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以30％乙醇为溶剂，以150ml/min*kg的速度进行渗漉，至漉液无或无生物碱反应为止，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1.35的稠膏（50℃），与羊角膏及116g糊精混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。 

【性状】  本品为糖衣片，除去糖衣后显棕褐；味微涩。                     

【鉴别】（1）取本品20片，除去糖衣，研细，加乙醚30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇30ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法（《中国药典》2005年版 附录Ⅵ  B）试验，吸取供试品溶液8μl 、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷‑醋酸乙酯（7：3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。 

（2）取本品6片，除去糖衣，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml分散，取上清液作为供试品溶液。另取白芷对照药材1g，同法制备成对照药材溶液。照薄层谱法（《中国药典》2005年版 附录Ⅵ  B）试验，吸取上述二种溶液 各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以‑甲醇‑甲酸（9：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。 

【检查】  应符合片剂项下有关的各项规定（《中国药典》2005年版 附录I D页）。                     

限量检查  取本品去糖衣，粉碎成细粉，精密称取5g，加氨试液5ml，放置2小时，加乙醚100ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液，另取对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含2mg的对照品溶液。照薄层谱法试验（《中国药典》2005年版 附录VIB），吸取上述两种溶液各2μl点于同一硅胶G板上，以环己烷‑醋酸乙酯‑二乙胺（7：2：0.5）为展开剂，展开，凉干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品斑点或不出现斑点。 

【浸出物】 照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（中国药典2005年版附录X A）测定，用甲醇作溶剂，不得少于18.0％。 

【含量测定】  照高效液相谱法（《中国药典》2005年版附录Ⅵ  D）测定。 

谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈‑水‑冰醋酸（20:80:1)为流动相；检测波长为322nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1500。 

对照品溶液的制备  精密称取阿魏酸对照品3mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含阿魏酸30µg）。 

供试品溶液的制备  取本品适量，除去糖衣，研细，取2.5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1h，放冷.滤过，残渣用5ml的甲醇洗2次，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水‑氨水(20:2)20ml分次溶解，置分液漏斗中，用20ml的乙醚洗2次，弃去乙醚液，水液用稀盐酸调pH至2，用乙醚萃取4次，每次20ml，合并乙醚液，用30ml的水洗，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。   

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。 

本品每片含川芎以阿魏酸（C₁₀H₁₀O₄）计，不得少于0.08mg。 

【功能与主治】  平肝，镇痛。用于偏头痛，血管性头痛，紧张性头痛及神经性头痛。