一种藏药组合物二十九味能消散及其制剂的质量检测方法

一种藏药组合物二十九味能消散及其制剂的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种藏药组合物及其制剂的质量检测方法，特别涉及一种藏药组合物二十九 味能消散及其制剂的质量检测方法。

背景技术

二十九味能消散记载于《藏医临床札记》中，作者云丹嘉措是十三世纪的著名藏医，他 经多年临床实践总结，在前人方剂的基础上炮制出二十九味能消散。因其对妇女子宫肌瘤和 卵巢囊肿的良好疗效，被历代藏医学家所推崇。二十九味能消散由藏木香、寒水石（煅）、 诃子、小米辣、碱花、肉豆蔻、荜茇、大黄、铁棒锤、红花、木香马兜铃、黄葵子等29味 药组成的，具有祛寒化痞、消食、调肝益肾的作用。主要用于食积不化，胃肠肝区疼痛，肾 病，肠病，中毒，肝病，子宫病，黄水散入脉道，胃肠痞病，胆痞病，风寒引起的痞瘤等。

二十九味能消散收载于国家药品标准，标准编号：WS3‑BC‑0140‑95。方中铁棒锤含有 ，具有较高的药理活性和药用价值，但同时也具有较强的毒性，虽然经过炮制后毒性 成分明显减少，并不能保证药用的安全性；方中木香马兜铃含马兜铃酸，马兜铃酸可引起肾 脏损害等不良反应。原质量标准中没有鉴别及含量测定项，未对铁棒锤含有的、木香 马兜铃含有的马兜铃酸进行限度检查，使该制剂存在安全隐患。同时，该制剂也未对其有效 成分进行鉴别及含量测定，从而不能确保该制剂的有效使用。文献及专利也未见有关二十九 味能消散质量检测方面的报道。因此，为了保证患者用药安全有效，原质量标准亟待需要进 行提高。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种藏药组合物二十九味能消散及其制剂的 质量检测方法。

发明概述

本发明提供了一种藏药组合物二十九味能消散及其制剂中的限度检查方法，马兜 铃酸A的限度检查方法，同时提供了乳香、胡椒碱、肉豆蔻的薄层谱鉴别方法，芦荟大黄 素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、羟基红花黄素A的高效液相谱含量测定方 法，使得该制剂质量检测更加准确、可靠，使该制剂在疾病的同时，保证了用药的安全 有效。

术语说明：

二十九味能消散，是国家中成药标准汇编（中成药地方标准上升国家标准部分）记载的 药品名称。

二十九味能消散及其制剂，包括二十九味能消散藏药组合物及用二十九味能消散原料药 配方制备的制剂。

寒水石（煅）、萝卜（炭）、贝齿（炭）、石灰（制）、鹫粪(炒)：是中药（藏药）的常规 技术用语，括号中的“煅”、“炭”、“制”、“炒”等均按照《青海省藏药炮制规范》（青海省 食品药品监督管理局编，青海人民出版社出版的2010年版）里的方法炮制。

本发明的技术方案如下：

一种原料药组成为藏木香25重量份、寒水石（煅）125重量份、诃子75重量份、小米 辣25重量份、碱花125重量份、肉豆蔻25重量份、荜茇25重量份、决明子25重量份、白 豆蔻25重量份、骨碎补25重量份、胡椒25重量份、萝卜（炭）2重量份，草果25重量份、 光明盐25重量份、阿魏2重量份、硇砂25重量份、25重量份、贝齿（炭）25重量份、 大黄100重量份、宽筋藤13重量份、红花25重量份、铁棒锤15重量份、石灰（制）25重 量份、鹫粪(炒)40重量份、木香马兜铃25重量份、黄葵子25重量份、紫硇砂25重量份、 乳香25重量份、渣驯膏25重量份的藏药组合物二十九味能消散及其制剂的质量检测方法， 该方法包括如下鉴别和/或检查和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

A.乳香的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末2~4g，加乙醚20~30ml，超声处理15min， 滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚 30ml，超声处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照 薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为8:1~2的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取 出，晾干；喷以质量体积份数比1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰；供试 品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点；

B.胡椒碱的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末2~4g，加醋酸乙酯20~30ml，超声处理 30min，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；取胡椒碱适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的对照品溶液；照薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种 溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为3:1~3的环己烷‑醋酸乙酯为展 开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯365nm下检视；供试品谱中，在与对照品谱相 应的位置上，显相同颜的斑点；

C.肉豆蔻的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末4~6g，置250ml圆底烧瓶中，加水100ml， 煎煮1h，用挥发油测定器收集挥发油，挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯， 煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取肉豆蔻1g，置100ml圆底烧瓶中， 加水50ml，煎煮1h，用挥发油测定器收集挥发油，挥发油测定器中开始加入少量水及1ml 醋酸乙酯，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为对照药材溶液；照薄层谱法（《中国药 典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以体积份数比为20:0.1~0.5的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷体积 份数比为1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰；供试品谱中，在与对照药 材谱相应的位置上，显相同颜的斑点；

检查：

A.的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比 65~75:25~35:0.2:5的甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷为流动相；检测波长为235nm，理论板数按乌 头碱峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶 液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末10~15g，精密称定， 置具塞的锥形瓶中，加氨试液10ml，精密加入无水乙醇80～120ml，密塞，称定重量，冷浸 1h后加热回流1h，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量 取续滤液50ml，25℃~40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解，冰浴 中放置30min，滤过；用氨水调pH至10，将滤液转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次， 每次20ml，合并乙酸乙酯液，25℃~40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入甲醇2ml溶解， 滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10~20μl，注入液相谱仪，测定， 即得；

本发明二十九味能消散或其制剂含铁棒锤以（C₃₄H₄₇NO₁₁）计，不得高于17μg/g。

B.马兜铃酸A的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比60～ 70:30～40的甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm；理论板数按 木香马兜铃酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg 的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末6~10g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40~60ml，密塞，称定重量，超声20~40分钟，放冷，再称定 重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，低温浓缩至干，残渣加体积 份数比为0.5%氢氧化钠溶液20ml使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每 次20ml，萃取后碱液使用质量分数3%盐酸调节pH至2‑3，用乙醚萃取5次，每次20ml， 合并乙醚萃取液，挥干，用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过， 取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10~20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明二十九味能消散或其制剂含木香马兜铃以马兜铃酸A（C₁₇H₁₁NO₇）计，不得高 于30μg/g。

含量测定：

A.芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为 80~90:10~20的甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液为流动相；检测波长为430nm。理论 板数按大黄素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄 酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对 照品、大黄素对照品、大黄酚对照品各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液，分别精密量取上述 对照品溶液各2ml，混匀，即得；即每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg， 含大黄素甲醚8μg；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末1~3g，精密称定，置 具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇20~30ml，密塞，称定重量，超声20~40min，放冷，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百 分比为8%盐酸水溶液10ml，超声2分钟，再加10ml，加热回流1小时，放冷， 置分液漏斗内，分取层，酸液再用提取3次，每次10ml，合并 液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀， 滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl，注入液相谱仪，测定，即 得。

本发明二十九味能消散或其制剂含大黄以芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、 大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）、大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）总含量计，不得少于 1.20mg/g。

B.羟基红花黄素A的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比20～ 30:70～80的甲醇‑体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数 按羟基红花黄素A峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取羟基红花黄素A对照品适量，精密称定，置棕瓶中，加体 积份数比为25%甲醇水溶液制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散或其制剂粉末3~5g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比为25%甲醇水溶液20~30ml，密塞，称定重量，超声30~50 分钟，放冷，用体积份数比为25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即 得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5~10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明二十九味能消散或其制剂中羟基红花黄素A（C₂₇H₃₀O₁₅）含量不得少于 0.20mg/g。

所述的制剂是指取藏药组合物二十九味能消散原料药藏木香25重量份、寒水石（煅） 125重量份、诃子75重量份、小米辣25重量份、碱花125重量份、肉豆蔻25重量份、荜 茇25重量份、决明子25重量份、白豆蔻25重量份、骨碎补25重量份、胡椒25重量份、 萝卜（炭）2重量份，草果25重量份、光明盐25重量份、阿魏2重量份、硇砂25重量份、 25重量份、贝齿（炭）25重量份、大黄100重量份、宽筋藤13重量份、红花25重量 份、铁棒锤15重量份、石灰（制）25重量份、鹫粪(炒)40重量份、木香马兜铃25重量份、 黄葵子25重量份、紫硇砂25重量份、乳香25重量份、渣驯膏25重量份，按常规工艺，加 入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒或分散 片。

优选的一种原料药组成为藏木香25g、寒水石（煅）125g、诃子75g、小米辣25g、碱花 125g、肉豆蔻25g、荜茇25g、决明子25g、白豆蔻25g、骨碎补25g、胡椒25g、萝卜（炭）2g， 草果25g、光明盐25g、阿魏2g、硇砂25g、25g、贝齿（炭）25g、大黄100g、宽筋藤13g、 红花25g、铁棒锤15g、石灰（制）25g、鹫粪(炒)40g、木香马兜铃25g、黄葵子25g、紫硇砂 25g、乳香25g、渣驯膏25g的藏药组合物二十九味能消散及其制剂的质量检测方法，该方法 包括如下鉴别和/或检查和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

A.乳香的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末3g，加乙醚25ml，超声处理15min，滤过，滤液挥 干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚30ml，超声 处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层谱法 （《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积份数比为8:1.5的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；喷 以1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰；供试品谱中，在与对照药材谱 相应的位置上，显相同颜的斑点。

B.胡椒碱的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超声处理30min，滤过，滤 液浓缩至2ml，作为供试品溶液；取胡椒碱适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液； 照薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为3:2的环己烷‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取 出，晾干；置紫外光灯365nm下检视；供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显 相同颜的斑点。

C.肉豆蔻的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末5g，置250ml圆底烧瓶中，加水100ml，煎煮1h， 用挥发油测定器收集挥发油，挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯，煎煮完成后， 收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取肉豆蔻1g，置100ml圆底烧瓶中，加水50ml，煎 煮1h，用挥发油测定器收集挥发油，挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯，煎 煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为对照药材溶液；照薄层谱法（《中国药典》2010年版 一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份 数比为20:0.3的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷体积份数比为1%香草醛 硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置 上，显相同颜的斑点。

检查：

A.的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比 68:32:0.2:5的甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷为流动相；检测波长为235nm，理论板数按峰 计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶 液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末12g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，加氨试液10ml，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，冷浸1h后加热回流1h， 放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液50ml，25~40 ℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min，滤过；用 氨水调pH至10，将滤液转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸 乙酯液，25~40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入甲醇2ml溶解，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得；

本发明二十九味能消散或其制剂含铁棒锤以（C₃₄H₄₇NO₁₁）计，不得高于17μg/g。

B.马兜铃酸A的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比66:34 的甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm；理论板数按木香马兜铃 酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg 的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末8g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，低温浓缩至干，残渣加体积份数比为0.5%氢氧 化钠溶液20ml使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次20ml，萃取后碱 液使用质量分数3%盐酸调节pH至2‑3，用乙醚萃取5次，每次20ml合并乙醚萃取液，挥 干，用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得；

本发明二十九味能消散或其制剂含木香马兜铃以马兜铃酸A（C₁₇H₁₁NO₇）计，不得高 于30μg/g。

含量测定：

A.芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为86:14 的甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液为流动相；检测波长为430nm。理论板数按大黄素 峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄 酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对 照品、大黄素对照品、大黄酚对照品各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液，分别精密量取上述 对照品溶液各2ml，混匀，即得，每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg， 含大黄素甲醚8μg；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末2g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶 液10ml，超声2分钟，再加10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取 层，酸液再用提取3次，每次10ml，合并液，减压回收溶液至 干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明二十九味能消散或其制剂中芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄 素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）、大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）总含量不得少于1.20mg/g。

B.羟基红花黄素A的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比24:76 的甲醇‑体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花 黄素A峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取羟基红花黄素A对照品适量，精密称定，置棕瓶中，加体 积份数比为25%甲醇水溶液制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入体积份数比为25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷， 用体积份数比为25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本发明二十九味能消散或其制剂中羟基红花黄素A（C₂₇H₃₀O₁₅）含量不得少于 0.20mg/g。

本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。

本发明公开了一种藏药组合物二十九味能消散及其制剂的质量检测方法，使用薄层谱 法对二十九味能消散中乳香、胡椒碱、肉豆蔻进行了定性鉴别，使用高效液相谱法（HPLC 法）对二十九味能消散中、木香马兜铃酸进行了限度检查，同时采用高效液相谱法 （HPLC法）对二十九味能消散中芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、羟 基红花黄素A进行了定量检测。本发明方法建立了乳香、胡椒碱、肉豆蔻的薄层鉴别方 法，、木香马兜铃酸的限度检查方法，芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄 素甲醚、羟基红花黄素A的含量测定方法，提高了产品质量标准，使该制剂在疾病 的同时，保证了用药的安全有效。同时本法还可用于藏药组合物二十九味能消散的其他制剂， 如二十九味能消颗粒、二十九味能消丸、二十九味能消片等。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1：薄层鉴别实验

藏药组合物二十九味能消散由青海金诃藏药药业股份有限公司提供。

A.乳香的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末3g，加乙醚25ml，超声处理15min，滤过，滤液挥 干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚30ml，超声 处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；取按处方比例 配制缺乳香的阴性对照样品，照供试品溶液制备方法同法制备阴性对照样品溶液；照薄层 谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同 一硅胶G薄层板上，分别以体积份数比为（8:1）、（8:1.5）、（8:2）的二甲苯‑醋酸乙酯为展开 剂，展开，取出，晾干。喷以1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰。

结果：供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点，阴性对照 无干扰。在体积份数比为8:1~2的二甲苯‑醋酸乙酯展开剂条件下，均有较好的展开效果。其 中，体积份数比为8:1.5的二甲苯‑醋酸乙酯展开剂展开效果最好。结果表明，该鉴别方法专 属性强，可作为二十九味能消散中乳香的薄层鉴别方法。

B.胡椒碱的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超声处理30min，滤过，滤 液浓缩至2ml，作为供试品溶液；取胡椒碱适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液； 照薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分 别点于同一硅胶G薄层板上，分别以体积份数比为（3:1）、（3:2）、（1:1）的环己烷‑醋酸 乙酯为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视。

结果：供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。在体积份数 比为3:1~3的环己烷‑醋酸乙酯展开剂条件下，均有较好的展开效果。其中，体积份数比为 3:2的环己烷‑醋酸乙酯展开剂展开效果最好。结果表明，该鉴别方法谱斑点显清晰，分 离度好，可作为二十九味能消散中胡椒碱的薄层鉴别方法。

C.肉豆蔻的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末5g，置250ml圆底烧瓶中，加水100ml，煎煮1h， 用挥发油测定器收集挥发油（挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯），煎煮完成 后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取肉豆蔻1g，置100ml圆底烧瓶中，加水50ml， 煎煮1h，用挥发油测定器收集挥发油（挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯）， 煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为对照药材溶液；取按处方比例配制缺肉豆蔻的阴性对 照样品，照供试品溶液制备方法同法制备阴性对照样品溶液；照薄层谱法（《中国药典》 2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 分别以体积份数比为（20:0.1）、（20:0.3）、（20:0.5）的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取 出，晾干，喷体积份数比为1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰。供试品 谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

结果：供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点，阴性对照 无干扰。在体积份数比为20:0.1~0.5的二甲苯‑醋酸乙酯展开剂条件下，均有较好的展开效果。 其中，体积份数比为20:0.3的二甲苯‑醋酸乙酯展开剂展开效果最好。结果表明，该鉴别方 法专属性强，可作为二十九味能消散中肉豆蔻的薄层鉴别方法。

实验例2：的限度检查实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：L‑2100型日立高效液相谱仪；AuW220D岛津电子分析天平。

对照品：对照品（中国药品生物制品检定所）批号：MUST‑11031101。

样品：二十九味能消散（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20110815、 20110816、20110817。

2.检测波长的选择

取对照品溶液，于190~400nm波长范围内进行扫描，在235nm波长处有 最大吸收，故根据紫外吸收图谱选定235nm为检测波长。

3.流动相选择

研究发现，以体积份数比65~75:25~35:0.2:5的甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷体系为流动相， 均能达到很好的谱分离效果。其中，以甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷的体积份数比为 68:32:0.2:5为流动相最优。

4.系统适用性试验

在上述谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μl，注入液相谱仪， 记录谱图。结果表明，供试品谱中与其相邻谱峰的分离度均大于1.5，分离效 果好。

5.对照品溶液制备

取对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

6.供试品溶液制备

6.1提取时间的考察

按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分 别加热回流0.5小时、1小时、1.5小时。以每克药品中的含量为指标确定提取时间。 结果见表1。

表1提取时间考察试验结果

结果表明，回流1小时和1.5小时所得每克药品中的含量基本相同，故选用回流 提取时间为1小时。

6.2提取溶剂的考察

按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分 别用甲醇、体积份数比80%乙醇水溶液、无水乙醇提取。以每克药品中的含量为指标 确定提取溶剂。结果见表2。

表2提取溶剂考察试验结果

结果表明，甲醇、体积份数比80%乙醇水溶液、无水乙醇三种溶剂所测定含量基本相当， 但用无水乙醇提取的供试品溶剂，杂质峰最少，故采用无水乙醇为提取溶剂。

6.3提取方法的考察

按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分 别振揺、超声、回流提取1小时。以每克药品中的含量为指标确定提取方法。结果见 表3。

表3提取方法考察试验结果

结果表明，回流提取所测得的含量最高，故采用回流为提取方法。

7.标准曲线的制备和线性关系的考察

精密量取对照品贮备液溶液（20.1μg/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置 10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样20μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C） 进行线性回归，得的回归方程：A=12953C+249.14，相关系数：R=0.9996。结果表明， 在2.01μg/ml~20.10μg/ml范围内，的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系 良好。结果见表4。

表4线性关系考察结果

8.精密度试验

精密吸取对照品溶液20μl，注入液相谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计 算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表5。

表5精密度试验结果

9.定量限

精密吸取对照溶液（10.06μg/ml）1ml至25ml容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻 度，摇匀，精密吸取20μl，注入液相谱仪。结果谱峰的信噪比约为10。结果表 明：浓度为0.4024μg/ml时，信噪比约为10，即定量限为8.05ng。

10.重复性试验

取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）12g，精密称定，共6份，按供 试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取20μl，注入液相谱仪，计算样 品中的含量。结果表明，该分析方法重复性良好。结果见表6。

表6重复性试验结果

11.回收率试验

精密称取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）6份，各精密加入 碱对照品，测定其含量，计算回收率。结果表明，该测定方法测定结果准确。结果见表7。

表7回收率试验结果

12.样品测定

取藏药组合物二十九味能消散三批，测定并计算样品中的含量。结果见表8。

表8样品含量测定结果

实验例3：马兜铃酸的限度检查实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：L‑2100型日立高效液相谱仪；AuW220D岛津电子分析天平。

对照品：马兜铃酸A对照品（中国药品生物制品检定所）批号：110746‑200806。

样品：二十九味能消散（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20110815、 20110816、20110817。

2.检测波长的选择

取马兜铃酸A对照品溶液，于190~400nm波长范围内进行扫描，马兜铃酸A在315nm 波长处有最大吸收，故根据紫外吸收图谱选定315nm为检测波长。

3.流动相选择

研究发现，以体积份数比60～70:30～40的甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相， 马兜铃酸A均能达到很好的谱分离效果。其中，以甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液的体 积份数比为66:34为流动相最优。

4.系统适用性试验

在上述谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μl，注入液相谱仪， 记录谱图。结果表明，供试品谱中马兜铃酸A与其相邻谱峰的分离度均大于1.5，分 离效果好。

5.对照品溶液制备

取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

6.供试品溶液制备

6.1提取时间的考察

按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分 别超声提取20分钟、30分钟、40分钟。以每克药品中马兜铃酸A的含量为指标确定提取 时间。结果见表9。

表9提取时间考察试验结果

结果表明，超声30分钟和40分钟时所得每克药品中马兜铃酸A的含量基本相同，故 选用超声提取时间为30分钟。

6.2提取溶剂的考察

按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分 别用甲醇、无水乙醇提取。以每克药品中马兜铃酸A的含量为指标确定提取溶剂。结果见 表10。

表10提取溶剂考察试验结果

结果表明，甲醇所测得马兜铃酸A含量明显高于无水乙醇，故选用甲醇为提取溶剂。

6.3提取方法的考察

按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分 别振揺、超声、回流提取30分钟。以每克药品中马兜铃酸A的含量为指标确定提取方法。 结果见表11。

表11提取方法考察试验结果

结果表明，超声与回流提取所测得的含量基本一致，考虑超声提取操作简便，故 选用超声为提取方法。

7.标准曲线的制备和线性关系的考察

精密量取马兜铃酸A对照品贮备液溶液（40.6μg/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分 别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样20μl，以峰面积（A）对对照品 浓度（C）进行线性回归，得马兜铃酸A的回归方程：A=17077C+5543.3，相关系数：R=0.9998。 结果表明，马兜铃酸A在4.06μg/ml~40.60μg/ml范围内，马兜铃酸A的峰面积（A）与对照 品浓度（C）线性关系良好。结果见表12。

表12马兜铃酸A线性关系考察结果

8.精密度试验

精密吸取马兜铃酸A对照品溶液20μl，注入液相谱仪，各连续测定6次，记录峰面 积并计算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表13。

表13马兜铃酸A精密度试验结果

9.定量限

精密吸取马兜铃酸A对照溶液（17.68μg/ml）1ml至50ml容量瓶中，用甲醇稀释并定 容至刻度，摇匀，精密吸取20μl，注入液相谱仪。结果马兜铃酸A谱峰的信噪比约为 10。结果表明：马兜铃酸A浓度为0.3536μg/ml时，信噪比约为10，即马兜铃酸A定量限 为7.07ng。

10.重复性试验

取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）8g，精密称定，共6份，按供试 品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取20μl，注入液相谱仪，计算样品 中马兜铃酸A的含量。结果表明，该分析方法重复性良好。结果见表14。

表14马兜铃酸A重复性试验结果

11.回收率试验

精密称取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）6份，各精密加入马兜铃 酸A对照品，测定其含量，计算回收率。结果表明，该测定方法测定结果准确。结果见表 15。

表15马兜铃酸A回收率试验结果

12.样品测定

取藏药组合物二十九味能消散三批,测定并计算样品中马兜铃酸A的含量。结果见表16。

表16样品含量测定结果

实验例4：芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的含量测定实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：L‑2100型日立高效液相谱仪；岛津AuW220D电子天平。

对照品：芦荟大黄素对照品（批号：110795‑201007）、大黄酸对照品（批号： 110757‑200206）、大黄素对照品（110756‑200100）、大黄酚对照品（110796‑201017）、大黄 素甲醚对照品（110758‑201013）。

样品：二十九味能消散（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20110815、 20110816、20110817。

2.检测波长的选择

取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的混合对照品溶液，于190~500nm 波长范围内进行扫描，混合对照在430nm波长处有最大吸收，故根据吸收图谱选定430nm 为检测波长。

3.流动相选择

研究发现，以体积份数比80~90:10~20的甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液为流动 相时，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均能达到很好的谱分离效果。 其中以甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液的体积份数比为86:14为流动相最优。

4.系统适用性试验

在上述谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相谱仪， 记录谱图。结果表明，供试品谱中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚 与其相邻谱峰的分离度均大于1.5。

5.混合对照品溶液制备

精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲 醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、 大黄酚对照品各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混 匀，即得，即每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg，含大黄素甲醚8μg。

6.供试品溶液制备

6.1提取方法的考察

按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3 份，分别超声、回流、振揺处理30分钟。以每克药品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大 黄酚、大黄素甲醚五种蒽醌成分总含量为指标确定提取方法。结果见表17。

表17提取方法考察试验结果

结果表明，超声与回流提取所得每克药品中蒽醌成分的总含量基本一致，考虑到超声提 取简便、易操作，故选用提取方法为超声提取。

6.2提取溶剂的考察

按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备2 份，分别精密加入甲醇、乙醇各25ml。以每克药品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄 酚、大黄素甲醚五种蒽醌成分总含量为指标确定提取溶剂。结果见表18。

表18提取溶剂考察试验结果

结果表明，甲醇所测定蒽醌成分总含量明显高于乙醇，故选用提取溶剂为甲醇。

6.3提取时间的考察

按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3 份，分别超声处理20分钟、30分钟、40分钟。以每克药品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、 大黄酚、大黄素甲醚五种蒽醌成分总含量为指标确定提取时间。结果见表19。

表19提取时间考察试验结果化药

结果表明，超声提取30分钟和40分钟所得每克药品中蒽醌成分的总含量基本一致，故 选用提取时间为30分钟。

7.标准曲线的制备和线性关系的考察

精密量取混合对照品贮备液溶液（芦荟大黄素32.6μg/ml、大黄酸33.8mg/ml、大黄素 33.2mg/ml、大黄酚各32.5μg/ml，含大黄素甲醚17.2/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分 别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品 浓度（C）进行线性回归，得芦荟大黄素的回归方程为：A=8966.4C+364.89，相关系数： R=0.9995；大黄酸的回归方程为：A=10015C+120.03，相关系数：R=0.9996；大黄素的回归 方程为：A=9087.1C+326.52，相关系数：R=0.9995；大黄酚的回归方程为：A=13338C+534.91， 相关系数：R=0.9998；大黄素甲醚的回归方程为：A=5033.8C+68.985，相关系数：R=0.9997。 结果表明，芦荟大黄素在3.26μg/ml~32.60μg/ml范围内，芦荟大黄素的峰面积（A）与对照 品浓度（C）线性关系良好；大黄酸在3.38μg/ml~33.80μg/ml范围内，大黄酸的峰面积（A） 与对照品浓度（C）线性关系良好；大黄素在3.32μg/ml~33.20μg/ml范围内，大黄素的峰面 积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好；大黄酚在3.25μg/ml~32.50μg/ml范围内，大黄酚 的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好；大黄素甲醚在1.72μg/ml~17.20μg/ml范围 内，大黄素甲醚的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好。结果见表20、表21、表 22、表23、表24。

表20芦荟大黄素线性关系考察结果

表21大黄酸线性关系考察结果

表22大黄素线性关系考察结果

表23大黄酚线性关系考察结果

表24大黄素甲醚线性关系考察结果

8.精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10μl，注入液相谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算 相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表25。

表25混合对照精密度试验结果

9.稳定性试验

供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相谱仪，记录峰面积，以后每隔2 小时测定一次，考察8小时，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，供试品溶液中芦 荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚在8小时内测定结果稳定。结果见表26。

表26混合对照稳定性试验结果

10.重复性试验

取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）2g，精密称定，共6份，按供试 品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取10μl，注入液相谱仪，计算样品 中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚五种蒽醌成分总含量。结果表明，该 分析方法重复性良好。结果见表27。

表27蒽醌成分总含量重复性试验结果

11.回收率试验

精密称取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）6份，各精密加入芦荟大 黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚五种蒽醌成分对照品，测定其含量，计算回收 率。结果表明，该测定方法测定结果准确。结果见表28。

表28蒽醌成分回收率试验结果

12.样品测定

取藏药组合物二十九味能消散三批，测定并计算芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、 大黄素甲醚五种蒽醌成分的总含量。结果见表29。

表29样品含量测定结果

实验例5：羟基红花黄素A的含量测定实验

1.仪器、试药和供试样品

仪器：L‑2100型日立高效液相谱仪；岛津AuW220D电子天平。

对照品：羟基红花黄素A对照品（中国药品生物制品鉴定所），批号：111637‑200905。

样品：二十九味能消散（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20110815、 20110816、20110817。

2.检测波长的选择

取羟基红花黄素A对照品溶液，于190~500nm波长范围内进行扫描，羟基红花黄 素A在403nm波长处有最大吸收，故根据紫外吸收图谱选定403nm为检测波长。

3.流动相选择

研究发现，以体积份数比20～30:70～80的甲醇‑体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动 相时，羟基红花黄素A均能达到很好的谱分离效果。其中以甲醇‑体积份数比为1%冰醋 酸水溶液的体积份数比为24:76为流动相最优。

4.系统适用性试验

在上述谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相谱仪， 记录谱图。结果表明，对照品、供试品谱中羟基红花黄素A与其相邻谱峰的分离 度均大于1.5。

5.对照品制备

取羟基红花花素A对照品适量，精密称定，置棕瓶中，加体积份数比25%甲醇水 溶液制成每1ml含50μg的溶液，即得。

6.供试品制备

6.1提取方法的考察

按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3 份，分别超声、回流、振揺处理40分钟。以每克药品中羟基红花黄素A的含量为指标确 定提取方法。结果见表30。

表30提取方法考察试验结果

结果表明，超声提取所得每克药品中羟基红花黄素A的含量最高，故选用提取方法 为超声提取。

6.2提取溶剂的考察

按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3 份，分别精密加入水、体积份数比25%甲醇水溶液、甲醇各25ml。以每克药品中羟基红花 黄素A的含量为指标确定提取溶剂。结果见表31。

表31提取溶剂考察试验结果

结果表明，水、体积份数比25%甲醇水溶液与甲醇所测的羟基红花黄素A含量基本 一致，由于用水作提取溶剂过滤困难，纯甲醇毒性大，故选用提取溶剂为体积份数比25%甲 醇水溶液。

6.3提取时间的考察

按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3 份，分别超声处理30分钟、40分钟、50分钟。以每克药品中羟基红花黄素A的含量为 指标确定提取时间。结果见表32。

表32提取时间考察试验结果

结果表明，超声提取40分钟和50分钟所得每克药品中羟基红花黄素A的含量基本 一致，故选用提取时间为40分钟。

7.标准曲线的制备和线性关系的考察

精密量取羟基红花黄素A对照品贮备液溶液（羟基红花黄素A含量为107.8μg/ml） 1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，体积份数比25%甲醇水溶液稀释至刻 度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得羟基红 花黄素A回归方程：A=6605.5C+454.39，相关系数：R=0.9998。结果表明，羟基红花黄 素A在10.78μg/ml~107.80μg/ml范围内，羟基红花黄素A的峰面积（A）与对照品浓度 （C）线性关系良好。结果见表33。

表33羟基红花黄素A线性关系考察结果

8.精密度试验

精密吸取羟基红花黄素A对照品溶液10μl，注入液相谱仪，各连续测定6次，记 录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表34。

表34羟基红花黄素A精密度试验结果

9.稳定性试验

供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相谱仪，记录峰面积，以后每隔2 小时测定一次，考察8小时，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，供试品溶液中羟 基红花黄素A在8小时内测定结果稳定。结果见表35。

表35羟基红花黄素A稳定性试验结果

10.重复性试验

取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）4g，精密称定，共6份，按供试 品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取10μl，注入液相谱仪，计算样品 中羟基红花黄素A的含量。结果表明，该分析方法重复性良好。结果见表36。

表36羟基红花黄素A重复性试验结果

11.回收率试验

精密称取同一批二十九味能消散样品（生产批号：20110815）6份，各精密加入羟基红 花黄素A对照品，测定其含量，计算回收率。结果表明，该测定方法测定结果准确。结 果见表37。

表37羟基红花黄素A回收率试验结果

12.样品测定

取藏药组合物二十九味能消散三批，测定并计算羟基红花黄素A含量。结果见表38。

表38样品含量测定结果

下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作详细的阐述，但不限于这些具体记载的实施例。实施例1所 检测的藏药组合物二十九味能消散为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。

实施例1：二十九味能消散的质量检测方法

鉴别：

A.乳香的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末3g，加乙醚25ml，超声处理15min，滤过，滤液挥 干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚30ml，超声 处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层谱法 （《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积份数比为8:1.5的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；喷 以1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰；供试品谱中，在与对照药材谱 相应的位置上，显相同颜的斑点。

B.胡椒碱的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超声处理30min，滤过，滤 液浓缩至2ml，作为供试品溶液；取胡椒碱适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液； 照薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为3:2的环己烷‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取 出，晾干；置紫外光灯365nm下检视；供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显 相同颜的斑点。

C.肉豆蔻的鉴别

取藏药组合物二十九味能消散粉末5g，置250ml圆底烧瓶中，加水100ml，煎煮1h， 用挥发油测定器收集挥发油，挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯，煎煮完成后， 收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取肉豆蔻1g，置100ml圆底烧瓶中，加水50ml，煎 煮1h，用挥发油测定器收集挥发油，挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯，煎 煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为对照药材溶液；照薄层谱法（《中国药典》2010年版 一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份 数比为20:0.3的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷体积份数比为1%香草醛 硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰；供试品谱中，在与对照药材谱相应的位置 上，显相同颜的斑点。

检查：

A.的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比 68:32:0.2:5的甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷为流动相；检测波长为235nm，理论板数按峰 计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶 液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末12g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，加氨试液10ml，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，冷浸1h后加热回流1h， 放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液50ml，25~40 ℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min，滤过；用 氨水调pH至10，将滤液转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸 乙酯液，25~40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入甲醇2ml溶解，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得；

本品含铁棒锤以（C₃₄H₄₇NO₁₁）计，不得高于17μg/g。

B.马兜铃酸A的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比66:34 的甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm；理论板数按木香马兜铃 酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg 的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末8g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，低温浓缩至干，残渣加体积份数比为0.5%氢氧 化钠溶液20ml使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次20ml，萃取后碱 液使用质量分数3%盐酸调节pH至2‑3，用乙醚萃取5次，每次20ml合并乙醚萃取液，挥 干，用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得；

本品含木香马兜铃以马兜铃酸A（C₁₇H₁₁NO₇）计，不得高于30μg/g。

含量测定：

A.芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为86:14 的甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液为流动相；检测波长为430nm。理论板数按大黄素 峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄 酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对 照品、大黄素对照品、大黄酚对照品各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液，分别精密量取上述 对照品溶液各2ml，混匀，即得，每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg， 含大黄素甲醚8μg；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末2g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶 液10ml，超声2分钟，再加10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取 层，酸液再用提取3次，每次10ml，合并液，减压回收溶液至 干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即 得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚 （C₁₅H₁₀O₄）、大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）总含量不得少于1.20mg/g。

B.羟基红花黄素A的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比24:76 的甲醇‑体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花 黄素A峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取羟基红花黄素A对照品适量，精密称定，置棕瓶中，加体 积份数比为25%甲醇水溶液制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消散粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入体积份数比为25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷， 用体积份数比为25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品羟基红花黄素A（C₂₇H₃₀O₁₅）含量不得少于0.20mg/g。

实施例2：二十九味能消丸质量检测方法

鉴别：

A.乳香的鉴别

取藏药组合物二十九味能消丸粉末3g，加乙醚25ml，超声处理15min，滤过，滤液挥 干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚30ml，超声 处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层谱法 （《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积份数比为8:1.5的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干。喷 以1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱 相应的位置上，显相同颜的斑点。

B.胡椒碱的鉴别

取藏药组合物二十九味能消丸粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超声处理30min，滤过，滤 液浓缩至2ml，作为供试品溶液；取胡椒碱适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液； 照薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为3:2的环己烷‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取 出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上， 显相同颜的斑点。

C.肉豆蔻的鉴别

取藏药组合物二十九味能消丸粉末5g，置250ml圆底烧瓶中，加水100ml，煎煮1h， 用挥发油测定器收集挥发油（挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯），煎煮完成 后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取肉豆蔻1g，置100ml圆底烧瓶中，加水50ml， 煎煮1h，用挥发油测定器收集挥发油（挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯）， 煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为对照药材溶液；照薄层谱法（《中国药典》2010年 版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积 份数比为20:0.3的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷体积份数比为1%香草 醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位 置上，显相同颜的斑点。

检查：

A.的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比 68:32:0.2:5的甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷为流动相；检测波长为235nm，理论板数按峰 计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶 液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消丸粉末12g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，加氨试液10ml，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，冷浸1h后加热回流1h， 放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液50ml，25~40 ℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min，滤过；用 氨水调pH至10，将滤液转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸 乙酯液，25~40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入甲醇2ml溶解，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品含铁棒锤以（C₃₄H₄₇NO₁₁）计，不得高于17μg/g。

B.马兜铃酸A的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比66:34 的甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm；理论板数按木香马兜铃 酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg 的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消丸粉末8g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，低温浓缩至干，残渣加体积份数比为0.5%氢氧 化钠溶液20ml使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次20ml，萃取后碱 液使用质量分数3%盐酸调节pH至2‑3，用乙醚萃取5次，每次20ml合并乙醚萃取液，挥 干，用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品含木香马兜铃以马兜铃酸A（C₁₇H₁₁NO₇）计，不得高于30μg/g。

含量测定：

A.芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为86:14 的甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液为流动相；检测波长为430nm。理论板数按大黄素 峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄 酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对 照品、大黄素对照品、大黄酚对照品各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液，分别精密量取上述 对照品溶液各2ml，混匀，即得（即每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg， 含大黄素甲醚8μg）；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消丸粉末2g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶 液10ml，超声2分钟，再加10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取 层，酸液再用提取3次，每次10ml，合并液，减压回收溶液至 干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即 得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚 （C₁₅H₁₀O₄）、大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）总含量不得少于1.20mg/g。

B.羟基红花黄素A的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比24:76 的甲醇‑体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花 黄素A峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取羟基红花黄素A对照品适量，精密称定，置棕瓶中，加体 积份数比为25%甲醇水溶液制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消丸粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入体积份数比为25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷， 用体积份数比为25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品羟基红花黄素A（C₂₇H₃₀O₁₅）含量不得少于0.20mg/g。

所述的藏药组合物二十九味能消丸是指用二十九味能消散原料药配方藏木香25g、寒水 石（煅）125g、诃子75g、小米辣25g、碱花125g、肉豆蔻25g、荜茇25g、决明子25g、白豆 蔻25g、骨碎补25g、胡椒25g、萝卜（炭）2g，草果25g、光明盐25g、阿魏2g、硇砂25g、山 奈25g、贝齿（炭）25g、大黄100g、宽筋藤13g、红花25g、铁棒锤15g、石灰（制）25g、鹫 粪(炒)40g、木香马兜铃25g、黄葵子25g、紫硇砂25g、乳香25g、渣驯膏25g，加入常规辅料， 按照常规工艺制备的丸剂。

实施例3：二十九味能消片质量检测方法

鉴别：

A.乳香的鉴别

取藏药组合物二十九味能消片粉末3g，加乙醚25ml，超声处理15min，滤过，滤液挥 干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚30ml，超声 处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层谱法 （《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积份数比为8:1.5的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干。喷 以质量体积比1%香草醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对 照药材谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

B.胡椒碱的鉴别

取藏药组合物二十九味能消片粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超声处理30min，滤过，滤 液浓缩至2ml，作为供试品溶液；取胡椒碱适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液； 照薄层谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以体积份数比为3:2的环己烷‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取 出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上， 显相同颜的斑点。

C.肉豆蔻的鉴别

取藏药组合物二十九味能消片粉末5g，置250ml圆底烧瓶中，加水100ml，煎煮1h， 用挥发油测定器收集挥发油（挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯），煎煮完成 后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取肉豆蔻1g，置100ml圆底烧瓶中，加水50ml， 煎煮1h，用挥发油测定器收集挥发油（挥发油测定器中开始加入少量水及1ml醋酸乙酯）， 煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为对照药材溶液；照薄层谱法（《中国药典》2010年 版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积 份数比为20:0.3的二甲苯‑醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷体积份数比为1%香草 醛硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照药材谱相应的位 置上，显相同颜的斑点。

检查：

A.的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比 68:32:0.2:5的甲醇‑水‑三乙胺‑二氯甲烷为流动相；检测波长为235nm，理论板数按峰 计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶 液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消片粉末12g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，加氨试液10ml，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，冷浸1h后加热回流1h， 放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液50ml，25~40 ℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min，滤过；用 氨水调pH至10，将滤液转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸 乙酯液，25~40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入甲醇2ml溶解，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品含铁棒锤以（C₃₄H₄₇NO₁₁）计，不得高于17μg/g。

B.马兜铃酸A的限度检查

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比66:34 的甲醇‑体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm；理论板数按木香马兜铃 酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg 的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消片粉末8g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，低温浓缩至干，残渣加体积份数比为0.5%氢氧 化钠溶液20ml使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次20ml，萃取后碱 液使用质量分数3%盐酸调节pH至2‑3，用乙醚萃取5次，每次20ml合并乙醚萃取液，挥 干，用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品含木香马兜铃以马兜铃酸A（C₁₇H₁₁NO₇）计，不得高于30μg/g。

含量测定：

A.芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为86:14 的甲醇‑体积份数比为0.1%的磷酸水溶液为流动相；检测波长为430nm。理论板数按大黄素 峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄 酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对 照品、大黄素对照品、大黄酚对照品各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液，分别精密量取上述 对照品溶液各2ml，混匀，即得（即每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg， 含大黄素甲醚8μg）；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消片粉末2g，精密称定，置具塞的锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶 液10ml，超声2分钟，再加10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取 层，酸液再用提取3次，每次10ml，合并液，减压回收溶液至 干，残渣加甲醇使溶解,转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈O₆）、大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酚 （C₁₅H₁₀O₄）、大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）总含量不得少于1.20mg/g。

B.羟基红花黄素A的含量测定

照高效液相谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定；

谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比24:76 的甲醇‑体积份数比为1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花 黄素A峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取羟基红花黄素A对照品适量，精密称定，置棕瓶中，加体 积份数比为25%甲醇水溶液制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取藏药组合物二十九味能消片粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入体积份数比为25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷， 用体积份数比为25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

本品羟基红花黄素A（C₂₇H₃₀O₁₅）含量不得少于0.20mg/g。

所述的藏药组合物二十九味能消片是指用二十九味能消散原料药配方藏木香25g、寒水 石（煅）125g、诃子75g、小米辣25g、碱花125g、肉豆蔻25g、荜茇25g、决明子25g、白豆 蔻25g、骨碎补25g、胡椒25g、萝卜（炭）2g，草果25g、光明盐25g、阿魏2g、硇砂25g、山 奈25g、贝齿（炭）25g、大黄100g、宽筋藤13g、红花25g、铁棒锤15g、石灰（制）25g、鹫 粪(炒)40g、木香马兜铃25g、黄葵子25g、紫硇砂25g、乳香25g、渣驯膏25g，加入常规辅料， 按照常规工艺制备的片剂。