一种小儿食积的中药组合物的质量控制方法

一种小儿食积的中药组合物的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的质量控制方法，具体涉及一种黔曲的质量控制方法。

背景技术

食积是小儿患者常见的一种症状，小儿食积除节制饮食外，可采用消食化积药予以。消食药具有消食化积，健脾开胃，和中的作用。消食药中有一类重要的传统复方制剂曲类药。曲类药的代表为六神曲，六神曲为青蒿、苍耳、辣蓼、赤小豆、杏仁、麦麸再加面粉组合制成，具有消食和胃的作用。

黔曲是由广藿香、莱菔子（炒）、青皮、牵牛子、茯苓、枳实（炒）、甘草、香附（醋炒）、紫苏、山楂（炒）、木香、苍术（麸炒）、香薷、麦芽（炒）、大黄、法半夏（姜汁炒）、陈皮、青蒿、荆芥、白芷、辣蓼、面粉、麦麸、酒曲等药材组合制得。黔曲与六神曲相比，减少苍耳、赤小豆、杏仁等药材；同时增加了木香、香附、青皮、陈皮、枳实等理气药；增加了山楂、麦芽、莱菔子等消食药；紫苏、荆芥、香薷，白芷等发散风寒药；大黄、牵牛子等泻下药；广藿香、苍术等化湿药；茯苓等利水渗湿药；半夏等温化寒痰药。由于增加了发散风寒药、理气药、消食药等多种药物，黔曲用途与六神曲稍有不同，除消食化积外，还能解表化湿、健脾、理气；而增加的解表化湿、健脾、理气等作用同时也会通过影响食积的成因方面进一步增强消食化积的作用。

黔曲的消食化积作用明显，用之疗效较好。但黔曲目前的质量控制方法存在一些不足，难以对该制剂进行更有效的质量控制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小儿食积的中药组合物的质量控制方法，其鉴定效果明显、稳定。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。

本发明所述小儿食积的中药组合物的黔曲是由各药材按以下配比（以重量计）组成：广藿香10～50份、莱菔子（炒）10～50份、青皮10～50份、牵牛子10～50份、茯苓10～50份、枳实（炒）10～50份、甘草10～50份、香附（醋炒）10～50份、紫苏10～50份、山楂（炒）10～50份、木香10～50份、苍术（麸炒）10～50份、香薷10～50份、麦芽（炒）10～50份、大黄10～50份、法半夏（姜汁炒）10～50份、陈皮10～50份、青蒿10～50份、荆芥10～50份、白芷10～50份、辣蓼10～50份、面粉100～150份、麦麸100～150份、酒曲1～5份。

一种小儿食积的中药组合物的质量控制方法，包括以下方法中的一种或几种。

（1）取本发明中药组合物研细，称取5g，加甲醇50-70ml超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加入浓盐酸1ml，水浴8-15分钟，立即冷却，再用乙酸乙酯提取2-3次，每次25-35ml，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法分别吸取上述供试品溶液及对照品溶液3-6ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（15-18:2-5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

（2）取本发明中药组合物研细，称取5g，加乙酸乙酯50-70ml超声处理20-40分钟，滤过，滤液通过中性氧化铝柱，全部收集，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯对照品加乙酸乙酯制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液3-6ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯（6-10:1）为展开剂，在氨试液饱和下展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在70-100℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

（3）取本发明中药组合物研细，称取5g，加甲醇50-70ml超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，通过聚酰胺柱，再用水20-40ml洗脱，全部收集，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液2-4ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水（2-5:1:3-8）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

含量测定。

谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.02%磷酸溶液（19:81）为流动相；检测波长为283nm；柱温，常温。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品，称定，加甲醇制成每1ml含约100mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本发明中药组合物，粉碎，过100目筛，并混合均匀，取约0.5g，称定，置带塞锥形瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30-50分钟，稍放置，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相谱仪，测定，即得。

一种小儿食积的中药组合物的质量控制方法，优选包括以下方法中的一种或几种。

（1）取本发明中药组合物研细，称取5g，加甲醇60ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加入浓盐酸1ml，水浴10分钟，立即冷却，再用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法吸取上述供试品溶液5ml及对照品溶液3ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（16:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

（2）取本发明中药组合物研细，称取5g，加乙酸乙酯60ml超声处理30分钟，滤过，滤液通过中性氧化铝柱，全部收集，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯对照品加乙酸乙酯制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯（8:1）为展开剂，在氨试液饱和下展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在80℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

（3）取本发明中药组合物研细，称取5g，加甲醇60ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，通过聚酰胺柱，再用水30ml洗脱，全部收集，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法吸取上述供试品溶液和对照品溶液各3ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水（4:1:5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

含量测定。

谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.02%磷酸溶液（19:81）为流动相；检测波长为283nm；柱温，常温。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品，称定，加甲醇制成每1ml含约100mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本发明中药组合物，粉碎，过100目筛，并混合均匀，取约0.5g，称定，置带塞锥形瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，超声处理45分钟，稍放置，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相谱仪，测定，即得。

所述中性氧化铝柱的规格为：100~200目，3.0g，内径1.5cm。

所述聚酰胺柱的规格为：60~90目，2.0g，内径1.5cm，干法装柱。

本发明质量控制方法通过对各药材的筛选，选择出的鉴别药材及作为含量测定的成分，可以达到对产品质量的有效控制，并通过对各方法筛选，使得方法精密度、灵敏度、稳定性都较高。

具体实施方式

为了更好的解释本发明的实施，提供下述测定方法的实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。下面通过实例对本发明做进一步的说明。

实施例1：大黄的薄层鉴别方法考察。

大黄中主要含有蒽醌类化合物，包括大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等。经实验，阴性无干扰，方法如下。

薄层板：0.5%羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶G板，厚度为500mm。

供试品溶液制备：大黄素为蒽醌类成分，在药材中以苷元和糖苷形式存在，因此选用先用甲醇进行提取，再以盐酸水解后乙酸乙酯提取，结果较好，故选用该方法。

吸附剂的选择：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板进行分离，结果显示分离良好，故选用以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板。

显剂的选择：选用浓氨水熏至斑点显清晰，结果较好。

展开剂的选择：分别以正已烷-乙酸乙酯（8:1）、正已烷-乙酸乙酯-冰乙酸（8:1:1）、正已烷-乙酸乙酯-甲酸（16:3:1）为展开剂展开，结果以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（16:3:1）Rf值较适中，分离较好，故选用正已烷-乙酸乙酯-甲酸（16:3:1）为展开剂。

实施例2：木香的薄层鉴别方法考察 。

木香主要化学成分为去氢木香内酯类和氨基酸类等。经实验，阴性无干扰，方法如下。

薄层板：0.5%羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶G板，厚度为500mm。

供试品溶液制备：去氢木香内酯属倍半萜类成分，为脂溶性成分，因此，为减少杂质干扰，采用石油醚（30~60℃）提取和乙酸乙酯提取后过中性氧化铝柱制备供试品溶液进行实验，结果以后者结果较好，无干扰，故选用乙酸乙酯提取。

吸附剂的选择：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板进行分离，结果显示分离良好，故选用以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板。

显剂的选择：选用10%硫酸乙醇溶液为显剂，80℃加热至斑点显清晰，结果较好。

展开剂的选择：分别以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（8:2:0.5）、正已烷-乙酸乙酯-甲酸（8:1:0.5）、正已烷-乙酸乙酯-冰乙酸（8:1:0.5）、正已烷-乙酸乙酯（8:1）为展开剂，出现杂质干扰，再加以氨水饱和，结果以正已烷-乙酸乙酯（8:1）加以氨试液展开，Rf值较适中，分离较好，杂质无干扰，故选用正已已烷-乙酸乙酯（8:1）加以氨试液为展开剂。

实施例3：枳实药材中辛弗林的薄层鉴别。

枳实主要成分为黄酮类、生物碱类及挥发油类等。经实验，阴性无干扰，方法如下。

供试品溶液制备：因辛弗林为生物碱类成分，易溶于水，因此，参考中国药典枳实药材含量测定项下的供试品溶液制备方法，采用甲醇提取，蒸干后残渣水溶解液通过聚酰胺柱，再加水洗脱，全部收集蒸干，残渣加甲醇溶解作为供试品溶液进行实验，结果较好，故选用该方法。

吸附剂的选择：选用以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板进行试验，结果较好。

显剂的选择：选用0.5%茚三酮乙醇溶液为显剂，105℃加热至斑点显清晰，结果较好。

展开剂的选择：采用以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）的上层溶液为展开剂展开，结果显示分离效果较好，且Rf值适中，同时阴性无干扰，故选用正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）的上层溶液为展开。

实施例4：橙片苷含量测定方法的考察。

本方中共有共有二十一味中药材，且药量相对都较平均，考虑陈皮、青皮和枳实都含有橙皮苷，样品中相对含量会高点，因此选择测定方中橙皮苷的含量，并进行了方法学研究。

1.仪器与试药：HP-1100高效液相谱仪（美国：包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315B二极管阵列检测器、HP化学工作站）；CQ-250超声波清洗器；橙皮苷对照品（含量测定用，批号：0721-200010，；中国药品生物制品检定所）；乙腈：谱纯；水：超纯水；其它试剂：分析纯。

2.谱条件的选择：谱柱：Agilent HC-C₁₈柱（4.6mm×250mm 5μm），流动相：乙腈-0.02%磷酸溶液（19 : 81），流速：1ml/min，检测波长283nm，柱温：室温。

3.阴性对照试验：按处方取不含陈皮、青皮、枳实的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照样品，再按含量测定供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，取阴性对照溶液10ml，按样品测定方法注入液相谱仪，结果在对照品橙皮苷谱峰相应的位置上，无其它谱峰出现，阴性对照对样品测定无干扰。

4．提取溶剂的选择：橙皮苷为苷类化合物，含量测定多采用甲醇作为提取溶剂，考虑本方中药味较多，且全部打粉入药，因此选取甲醇、95%乙醇、70%乙醇为提取溶剂超声处理45分钟对提取效果及分离情况进行考虑。结果见表1。

表1 不同提取溶剂橙皮苷含量。

提取溶剂 甲醇 95%乙醇 70%乙醇

含量（mg/g） 11.21 0.48 5.39

结果显示，甲醇提取效果最好且供试品溶液中橙皮苷峰分离良好，因此确定以甲醇作为提取溶剂。

5．提取方法的考察：橙皮苷的含量测定一般采用索氏提取、超声处理进行提取，因此，考虑本制剂为药材打粗粉发酵制成，我们选择超声处理、索氏提取、回流提取三种方法进行考察。取本发明中药组合物，粉碎，过100目筛，并混合均匀，共取3份，称定，一份加入甲醇25ml超声处理45分钟，放冷，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另一份加入甲醇索氏提取至无，放冷，定容至100ml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；一份加入甲醇25ml回流提取60分钟，放冷，补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入液相谱仪中，测定，结果见表2。

表2 不同提取方法橙皮苷含量。

提取方法 超声处理 索氏提取 回流提取

含量（mg/g） 11.26 11.30 11.24

结果显示三种提取方法的提取效果没有明显差别，故确定用超声处理方法提取。

6.提取溶剂用量的考察：取本发明中药组合物，粉碎，过100目筛，并混合均匀，称取约0.5g，共三份，置具塞三角瓶中，分别加入甲醇15ml、25ml、50ml，称定重量，超声处理45分钟，放冷，加甲醇补足减少的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，结果见表3。

表3 不同提取溶剂量对测定结果的影响。

提取溶剂量（ml） 15 25 50

含量（mg/g） 10.98 11.37 11.34

结果显示，不同提取溶剂用量对提取效果没有明显差别，考虑25ml提取的样品中峰面积比较适中，故确定用甲醇25ml进行提取。

7.提取时间的考察：取本发明中药组合物，粉碎，过100目筛，并混合均匀，称取约0.5g，共三份，置具塞三角瓶中，分别加入甲醇25ml，称定重量，分别超声处理15分钟、30分钟、45分钟、60分钟，放冷，加甲醇补足减少的重量，滤过，吸取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液，作为供试品溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，结果见表4。

结果显示，提取30分钟以上基本可以提取完全，考虑制剂为药材全粉末入药，为保证提取效果，故拟超声提取45分钟。

表4 不同提取时间对测定结果的影响。

提取时间（分钟） 15 30 45 60

含量（mg/g） 10.19 11.21 11.39 11.32

8.线性关系的考察：称取橙皮苷对照品13.21mg，置25m量瓶中，加甲醇近刻度，超声处理使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含橙皮苷0.5284mg）。取此对照品加甲醇稀释成以下浓度：10.568、21.136、42.272、105.68、211.36、528.4mg/ml，分别吸取10ml，注入液相谱仪中，按确定谱条件测定，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=3.512276+11.41531836X, r=0.99998(n=6)，橙皮苷对照品在10.568～528.4mg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系， 结果见表5。

表5 橙皮苷线性关系。

9. 精密度试验：吸取供试品溶液10ml，按上述谱条件，重复进样6次，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，计算供试品峰面积值的相对标准差为0.37%。结果见表6。

表6 精密度试验结果。

样号 1 2 3 4 5 6 平均 RSD(%)

峰面积 2524.8 2550.8 2548.8 2545.5 2541.2 2543.7 2542.5 0.37

10.稳定性试验：吸取供试品溶液10ml，按上述谱条件，每隔1~4小时，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，计算供试品橙皮苷峰面积值的相对标准差为0.70%，结果见表7。

表7 稳定性试验结果。

时间 0 1h 2h 4h 8h 13h 平均 RSD(%)

峰面积 2524.8 2545.5 2566.5 2568.6 2566.6 2541.3 2552.2 0.70

11.重现性试验：取本发明中药组合物，研细，称取约0.5g，共6份，照含量测定项下方法进行测定，测定结果经数据处理，RSD为0.88%，结果见表8。

表8 重现性试验结果。

样号 1 2 3 4 5 6 平均 RSD(%)

含量(mg/g) 11.44 11.35 11.20 11.36 11.43 11.23 11.33 0.88

12.加样回收率试验：取本发明中药组合物，研细，取约0.25g，共6份，称定，置具塞三角瓶中，各加入橙皮苷对照品（0.1931mg/ml）15ml及甲醇10ml，余照含量测定项下实验，吸取10ml注入液相谱仪中进行含量测定，计算回收率，结果见表9。

表9 回收率测定结果。

平均回收率100.18% RSD=2.73%。

13.样品测定：取本发明中药组合物，研细，取0.5g，称定，置具塞三角瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，超声处理（功率250±70w，频率33±2kHz）45分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪，测定，即得。

表13 黔曲中橙皮苷含量（%）。

本制剂以中药材全粉末发酵制成，根据制备工艺研究结果显示，发酵前后橙皮苷含量没有明显变化，根据2010年版中国药典陈皮药材中含橙皮苷不得低于3.5%和青皮药材中含橙皮苷不得低于5.0%，而一个处方中含陈皮30g、青皮20g，共制成黔曲约830g，因此，规定本发明中药组合物含橙皮苷（C28H34O15）不得少于0.25%。

实施例5：小儿食积的中药组合物的质量控制方法。

鉴别：（1）取本发明中药组合物研细，称取5g，加甲醇60ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加入浓盐酸1ml，水浴10分钟，立即冷却，再用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液5ml及对照品溶液3ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（16:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

（2）取本发明中药组合物研细，称取5g，加乙酸乙酯60ml超声处理30分钟，滤过，滤液通过中性氧化铝柱（100~200目，3.0g，内径1.5cm），全部收集，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯对照品加乙酸乙酯制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯（8:1）为展开剂，在氨试液饱和下展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在80℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

（3）取本发明中药组合物研细，称取5g，加甲醇60ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，通过聚酰胺柱（60~90目，2.0g，内径1.5cm，干法装柱），再用水30ml洗脱，全部收集，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各3ml，分别点于同一以含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水（4:1:5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显清晰。供试品谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。

含量测定：照高效液相谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D）测定。

谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.02%磷酸溶液（19:81）为流动相；检测波长为283nm；柱温，常温。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含约100mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明中药组合物，粉碎，过100目筛，并混合均匀，取约0.5g，精密称定，置带塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理45分钟，稍放置，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相谱仪，测定，即得。

测得本发明中药组合物含橙皮苷（C₂₈H₃₄O₁₅），0.54%。