用于关节病的羟基他汀衍生物

用于关节病的羟基他汀衍生物

本发明涉及式I化合物特别是包含至少一种式I化合物的药物， 其中式I化合物用于和/或预防其中涉及组织蛋白酶D触发的生理 和/或病理生理状态、特别是用于和/或预防关节病、创伤性软骨 损伤、关节炎、疼痛、异常性疼痛或痛觉过敏。

发明背景

关节病是全世界分布最广泛的关节疾病，关节病的放射学体征见于 大多数65岁以上的老人。尽管这对于医疗卫生系统非常重要，但迄今为 止关节病的原因仍然不清楚，此外有效的预防措施仍然是遥远的目标。 关节间隙减小(由关节软骨破坏引起的)伴随软骨下骨的变化和骨刺生 成是该疾病的放射学特征。然而，对于患者而言，主要是疼痛(负荷依 赖性和夜间的静息痛)伴随随后的功能受限。这还促使患者由于相应的 继发性疾病与社会隔离。

根据在德国非官方的定义，术语关节病表示超过年龄通常程度的“关 节磨损”。病因被认为是过度负荷(例如体重增加)、取决于出生的或创 伤的原因，如关节的错位，或也可能是由于骨病如骨质疏松症引起的骨 头变形。关节病同样可能是由于另一种疾病，例如关节炎症(关节炎) 的结果(继发性关节病)、或伴随超负荷引发的瘀血形成(继发性炎症 反应)带来的结果(活动性关节病)。英美专业文献区分骨关节病(英 文：osteoarthritis[OA](骨关节炎))和关节炎(英文：arthritis,rheumatoid  arthritis[RA](关节炎、类风湿性关节炎))，在骨关节炎中关节表面 破坏很可能主要归因于负荷的作用，在关节炎中主要是由于炎症部位的 关节退化。

原则上，关节病也可根据其病因区分。尿黑酸尿关节炎基于尿黑酸 尿症的情况下在关节内增多的尿黑酸沉积。在血友病性关节病的情况下， 由于血友病(血友病性关节)出现规律性关节内出血。尿酸性关节炎起 因于尿酸盐晶体(尿酸)对健康软骨的机械影响(W.Pschyrembel等： Klinischesmit klinischen Syndromen und einem Anhang  Nomina Anatomica.Verlag Walter de Gruyter & Co,253.版,1977)。

关节病的典型病因是关节的发育不良。以髋部为例显然，在生理学 髋部位态的情况下最大机械负荷的区域相比在发育不良的髋部的情况下 具有明显较大的面积。然而，通过作用于关节的力的负荷与关节形状基 本上无关。负荷基本上分布在主要负荷区。经此在较小区域的情况下将 出现相比在较大的区域的情况下更高的压力负荷。由此在发育不良的髋 部的情况下关节软骨上的生物机械压力负荷比在生理学髋部位态的情况 下大。此规律通常被认为是由于异常于理想解剖形状的支撑性关节上频 繁出现的关节炎性变化。

如果过早的磨损是由于外伤的后果，则称为创伤后关节病。作为继 发性关节病的其它原因讨论的有机械、炎症、代谢、化学(喹诺酮类)、 营养、激素、神经学和遗传的原因。然而，在大多数情况下，给出的诊 断结论为特发性关节病，借此医生意指明显缺少病因性疾病(H.I.Roach  und S.Tilley,Bone und Osteoarthritis F.Bronner und M.C. Farach-Carson(Editors),Verlag Springer,Volume 4,2007)。

关节病的医源性病因可能是例如促旋酶抑制剂型的抗生素(氟喹诺 酮类，如环丙沙星，左氧氟沙星)。这种药物导致血管化差的组织(透 明的关节软骨，肌腱组织)中镁离子的络合，其结果是结缔组织发生不 可逆的损害。通常该损害在儿童和青少年的生长期更显著。肌腱病和关 节病是此类药物的已知副作用。根据无关联的药理学家和风湿病学家的 信息，在成人中此类抗生素导致透明关节软骨的生理学降解加速(M. Menschik等，Antimicrob.Agents Chemother.41,1997,2562-2565页；M. Egerbacher等，Arch.Toxicol.73,2000,557-563页；H.Chang等，Scand. J.Infect.Dis.28,1996,641-643页；A.Chaslerie等,Therapie 47,1992,80 页)。用苯丙香豆素的长年会通过在关节内部结构的负荷下骨密度 的降低促成关节病。

除年龄之外，已知的骨关节病风险因素是机械性过负荷、(微)创 伤、由固定机制丧失引起的关节失去稳定性、以及遗传因素。然而，不 能完全解释其产生和干预可能性(H.I.Roach und S.Tilley,Bone und  Osteoarthritis F.Bronner und M.C.Farach-Carson(Editors),Verlag  Springer,Volume 4,2007)。

在患有关节病的关节中，一氧化氮的含量有时增加。通过软骨组织 的高机械性刺激可观察到类似的情形(P.Das等，Journal of  Orthopaedic Research 15,1997,87-93页。A.J.Farrell等，Annals of the  Rheumatic Diseases 51,1992,1219-1222页；B.Fermor等，Journal of  Orthopaedic Research 19,2001,729-737页)，而中度机械性刺激倾向 于具有正效应。因此机械力作用有因果地涉及骨关节病的发展(X.Liu 等，Biorheology 43,2006,183-190页)。

原则上，关节病遵循两个目标：一方面常规负荷下无疼痛，另 一方面防止关节的机械性能受限或关节变化。从长远来看这些目标不能 通过作为一种纯粹的对症疗法的疼痛来实现，因为这种不能阻 止疾病的发展。如果要实现后者，就必须停止软骨破坏。由于成人患者 的关节软骨不能再生，消除致病因素如关节发育不良或错位(这会导致 关节软骨的点压力负荷增加)更加非常重要。

最后，人们尝试在药物的帮助下阻止或停止软骨组织内的退化过程。

对于关节软骨的机能状态重要且因此对于其承受能力重要的是细 胞外基质，其主要由胶原蛋白、蛋白聚糖和水组成。涉及细胞外基质 降解的酶包括，尤其是金属蛋白酶、蛋白聚糖酶和组织蛋白酶。不过， 其它酶理论上也可降解软骨基质，例如纤溶酶、激肽释放酶、中性白 细胞弹性蛋白酶、类胰蛋白酶和糜蛋白酶。

组织蛋白酶属于木瓜蛋白酶超家族的溶酶体蛋白酶。组织蛋白酶参 与正常的蛋白水解并参与靶蛋白和组织的转化，以及参与蛋白水解级联 的启动和酶原活化。此外，它们参与MHC II类的表达(Baldwin(1993) Proc.Natl.Acad.Sci.,90:6796-6800；Mixuochi(1994)Immunol.Lett., 43:189-193)。不过，异常的组织蛋白酶表达可导致严重的疾病。因此， 在癌细胞(例如在乳癌、肺癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤和头颈癌)中 可能检测到增强的组织蛋白酶表达，并且可能显示组织蛋白酶与乳癌、 肺癌、头颈癌以及脑瘤的不足的成果有关(Kos等(1998)Oncol.Rep., 5:1349-1361；Yan等(1998)Biol.Chem.,379:113-123；Mort等；(1997) Int.J.Biochem.Cell Biol.,29:715-720；Friedrick等(1999)Eur.J Cancer, 35:138-144)。此外，异常的组织蛋白酶表达似乎与炎性和非炎性疾病(如 例如类风湿性关节炎和骨关节病)的形成有关(Keyszer(1995)Arthritis  Rheum.,38:976-984)。

组织蛋白酶活性的分子机制还没有得到完全解释。一方面发现例如 经诱导的组织蛋白酶的表达能保护B细胞(其血清被抽取)对抗细胞凋 亡，以及用组织蛋白酶B的反义寡核苷酸处理细胞能诱导细胞凋亡 (Shibata等(1998)Biochem.Biophys.Res.Commun.,251:199-20； Isahara等(1999)Neuroscience,91:233-249)。这些报道暗示组织蛋白酶 的抗细胞凋亡作用。然而，这些报道与早期的报道完全相反，早期的报 道将组织蛋白酶描述为细胞凋亡介质。(Roberts等(1997) Gastroenterology,113:1714-1726；Jones等(1998)Am.J.Physiol.,275: G723-730)。

组织蛋白酶作为非活性的酶原在核糖体上合成并转入溶酶体系统 中。在N端前肽经蛋白水解切割之后，在溶酶体的酸性环境中组织蛋白 酶浓度增加到1mM，且组织蛋白酶从溶酶体释放到细胞外的介质中。

就组织蛋白酶而言，区分为半胱氨酸组织蛋白酶B、C、H、F、K、 L、O、S、V和W，天冬氨酰组织蛋白酶D和E，和丝氨酸组织蛋白酶 G。

在临床开发中组织蛋白酶抑制剂的实例是用于关节病的组织 蛋白酶K抑制剂和用于关节炎、神经性疼痛和银屑病的组织蛋白酶 S抑制剂。

除组织蛋白酶D之外，天冬氨酰蛋白酶还包括HIV天冬氨酰蛋白 酶(HIV-1蛋白酶)、肾素、胃蛋白酶A和C、BACE(Asp2，memapsin)、 疟原虫天冬氨酸蛋白酶(Plasmepsine)和天冬氨酰血红蛋白酶 (Takahashi,T.等，Ed.Aspartic Proteinases  Structure,Function,Biology and Biomedical Implications(Plenum  Press,New York,1995),Adams,J.等，Ann.Rep.Med.Chem.31, 279-288,1996；Edmunds J.等，Ann.Rep.Med.Chem.31,51-60,1996； Miller,D.K.等，Ann.Rep.Med.Chem 31,249-268,1996)。组织蛋白 酶D通常参与细胞内的或被吞噬的蛋白质的降解，并因而在蛋白质代谢 中(Helseth,等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81,3302-3306,1984)、在 蛋白质分解代谢中(Kay,等，Intracellular Protein Catabolism(eds. Katunuma,等，155-162,1989)和在抗原进程中(Guagliardi,等，Nature, 343,133-139,1990；Van Noort,等，J.Biol.Chem.,264,14159-14164, 1989)起重要作用。

升高的组织蛋白酶D水平与一系列疾病有关。因此，升高的组织蛋 白酶D水平与乳癌的预后不良相关，且与增加的细胞侵入和增加的转移 危险性、以及之后较短的无复发存活时间和总体较低的生存率相关 (Westley B.R.等，Eur.J.Cancer 32,15-24,1996；Rochefort,H.,Semin. Cancer Biol.1:153,1990；Tandon,A.K.等，N.Engl.J.Med.322,297, 1990)。乳癌中组织蛋白酶D的分泌率通过基因的过表达和蛋白质的被 改变的加工被促进。在生长的肿瘤的临近区域中产生的组织蛋白酶D及 其它蛋白酶(如例如胶原酶)的增加水平，可能就此降解肿瘤周围的细 胞外基质并经此促进肿瘤细胞脱离并经淋巴和循环系统侵入新的组织 中(Liotta L.A.,Scientific American Feb:54,1992；Liotta L.A.和 Stetler-Stevenson W.G.,Cancer Biol.1:99,1990；Liaudet E.,Cell  Growth Differ.6:1045-1052,1995；Ross J.S.,Am.J.Clin.Pathol. 104:36-41,1995；Dickinson A.J.,J.Urol.154:237-241,1995)。

此外，组织蛋白酶D与脑的退化性变化相关，如例如阿尔茨海默病。 因此，组织蛋白酶D与淀粉样β蛋白前体或增加转染细胞中淀粉样蛋白 质表达的突变体前体的裂解有关(Cataldo,A.M.等，Proc.Natl.Acad. Sci.87:3861,1990；Ladror,U.S.等，J.Biol.Chem.269:18422,1994, Evin G.,Biochemistry 34:14185-14192,1995)。通过淀粉样β蛋白前体 的蛋白水解形成的淀粉样β蛋白，导致大脑内斑块形成且似乎对阿尔茨 海默病的形成负责。升高的组织蛋白酶D水平还被发现在阿尔茨海默病 患者的脑脊液中，并且显示针对突变体淀粉样β蛋白前体的高的组织蛋 白酶D蛋白水解活性(Schwager,A.L.,等J.Neurochem.64:443,1995)。 此外，在亨廷顿病患者的活组织检查中测得组织蛋白酶D活性的显著升 高(Mantle D.,J.Neurol.Sci.131:65-70,1995)。

在关节病的显现中，组织蛋白酶D大概在不同层面上具有实质性作 用。因此，与健康狗相比较在患自发性关节病的狗髋关节头的关节软骨 中测得组织蛋白酶D的mRNA水平升高(Clements D.N.等，Arthritis  Res.Ther..2006；8(6):R158；Ritchlin C.等，Scand.J.Immunnol. 40:292-298,1994)。Devauchelle V.等(Genes Immun.2004,5(8):597-608) 也显示与类风湿性关节炎相比较在关节病的情况下人患者中组织蛋白 酶D的不同表达速率(也参见Keyszer G.M.,Arthritis Rheum. 38:976-984,1995)。在粘脂病中，组织蛋白酶D似乎也具有作用(Kopitz  J.,Biochem.J.295,2:577-580,1993)。

溶酶体的内肽酶组织蛋白酶D是软骨细胞中分布最广泛的蛋白酶 (Ruiz-Romero C.等，Proteomics.2005,5(12):3048-59)。此外，已经 在培养的来自骨关节病患者的滑膜中检测到组织蛋白酶D的蛋白水解 活性(Bo G.P.等，Clin.Rheumatol.2009,28(2):191-9)，并且在类风 湿性关节炎的患者的滑膜切除组织中也发现增强的蛋白水解活性 (Taubert H.等，Autoimmunity.2002,35(3):221-4)。Lorenz等 (Proteomics.2003,3(6):991-1002)如此描述，尽管与组织蛋白酶B和 L对比还没有针对关节炎和关节病详细研究溶酶体的和分泌的天冬氨酰 蛋白酶组织蛋白酶D，然而，Lorenz等发现与类风湿性关节炎的患者相 比较在关节病的患者的滑膜组织内组织蛋白酶D的蛋白水平较高。

Gedikoglu等(Ann.Rheum.Dis.1986,45(4):289-92)同样能在滑膜 组织中、Byliss和Ali(Biochem.J.1978,171(1):149-54)在关节病患者 的软骨中检测到组织蛋白酶D的蛋白水解活性增强。

在关节病的情况下，在软骨的区域出现pH降低。该pH降低对 于理解软骨中的分解代谢过程至关重要。

在关节病的情况下，还发现关节组织中的低pH值与该疾病的严重 程度和进程直接相关。在pH 5.5下，出现软骨的自体消化。在外植体培 养(例如来自小鼠、奶牛或人)中该过程可被胃酶抑素或利托那韦几乎 完全抑制。这暗示了在关节病中组织蛋白酶D的实质性作用、甚至是关 键作用，因为胃酶抑素抑制天冬氨酰蛋白酶(除一个例外—BACE 1)， 并且至今在软骨组织中只鉴定出有这两种天冬氨酰蛋白酶。因此，Bo G. P.等(Clin.Rheumatol.2009,28(2):191-9)也描述了在关节病变中组织 蛋白酶D的重要作用。

公知的天冬氨酰蛋白酶抑制剂是胃酶抑素，一种最初从链霉菌培养 物中分离出来的肽。胃酶抑素能有效抗胃蛋白酶、组织蛋白酶和肾素。 因此许多天冬氨酰蛋白酶抑制剂类似于胃酶抑素结构的样本(美国专利 4,746,648；Umezawa,H,等，J Antibiot(Tokyo)23:259-62,1970； Morishima,H.,等，J.Antibiot.(Tokyo)23:263-5,1970；Lin,Ty和 Williams,H R.,J.Biol.Chem.254:11875-83,1979；Jupp,R A,等， Biochem.J.265:871-8,1990；Agarwal,N S和Rich,D H,J.Med.Chem. 29:2519-24,1986；Baldwin,E T,等，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 90: 6796-800,1993；Francis,S E等，EMBO J 13:306-17,1994)。

天冬氨酰蛋白酶或组织蛋白酶D通常被描述为用于神经变性 疾病、认知障碍、痴呆、阿尔茨海默病、癌症、疟疾、HIV感染和心血 管系统疾病的活性化合物的靶蛋白，并且公开了用于这些疾病的天 冬氨酰蛋白酶或组织蛋白酶D的抑制剂，如，例如在WO 2009013293， EP 1987834，EP 1872780，EP 1867329，EP 1745778，EP 1745777，EP  1745776，WO 1999002153，WO 1999055687，US 6150416，WO  2003106405，WO 2005087751，WO 2005087215，WO 2005016876，US  2006281729，WO 2008119772，WO 2006074950，WO 2007077004， WO 2005049585，US 6251928和US 6150416中。

肽类天冬氨酰蛋白酶抑制剂，特别是肾素抑制药或肾素-血管紧张素 系统调节剂，例如已知于EP 77028、EP 161588、EP 337334和EP  198271。

用于炎性疾病、关节炎特别是类风湿性关节炎的肽类组织蛋白 酶D抑制剂已知于US 3971736。用于疟疾和阿尔茨海默病和预防 癌细胞侵入和转移的肽类组织蛋白酶D和疟原虫天冬氨酸蛋白酶抑制 剂，例如已知于US 5849691。

尽管已知的组织蛋白酶D抑制剂和两个模型化合物胃酶抑素和利 托那韦能有效地抑制组织蛋白酶D的活性，然而，它们对其它天冬氨酰 蛋白酶具有相当低的选择性。肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节血压 和体液和电解质平衡中的作用(Oparil,S.等，N.Engl.J.Med.1974； 291:381-401/446-57)以及肾素和胃蛋白酶抑制剂在心血管系统疾病中 的功效已经充分已知，因此特别是在这些低选择性组织蛋白酶D抑制剂 口服或系统给药时可以预计许多副作用，并且在局部施用时由于化合物 的扩散也可以预计全身性并发症。此外，肽类化合物特别具有低稳定性， 因此不作口服或全身性给药考虑。

本发明的任务基于发现具有有价值的性能的新化合物，特别是可用 于制备药物的新化合物。

本发明的任务尤其是发现能用于预防和关节病且与肾素和胃蛋 白酶相比较对组织蛋白酶D具有尤其高选择性的新活性化合物和特别优 选新的组织蛋白酶D抑制剂。此外，应发现至少在局部或关节内施用时 足够稳定的新组织蛋白酶D抑制剂。

发明概述

令人惊奇地，已经发现本发明的羟基他汀衍生物高效地抑制组织 蛋白酶D且同时相对于肾素和胃蛋白酶对组织蛋白酶D具有高选择 性，因此可预见在其用于关节病的应用中具有很少的副作用。此 外，本发明的化合物在滑膜液中具有足够良好的稳定性，从而它们适 于关节内施用因而适于关节病。同样令人惊奇地发现本发明的羟 基他汀衍生物能降低炎症诱发的依赖于剂量的热痛觉过敏。

本发明涉及通式I的羟基他汀衍生物，

其中

I₁,I₂,I₃,I₄,I₅,彼此独立地为N或CR'，

T为未被取代或被R单取代、二取代、三取代或四取代的苯基、 联苯基或萘基，或者为可被R、＝S、＝NR'和/或＝O单取代、二取代或 三取代的含1至4个N、O和/或S原子的单环或二环饱和、不饱和的 或芳族杂环，

R¹为乙基，正丙基，异丙基，环丙基，丁基，异丁基，仲丁基， 环丁基，叔丁基，苯基，苄基，2-氧杂环丁基，3-氧杂环丁基，四氢 呋喃-3-基，四氢呋喃-2-基，环戊基，戊基，甲基硫烷基甲基，乙基硫 烷基甲基，2-甲基硫烷基乙基，或1-甲基硫烷基乙基，

R²为乙基，正丙基，异丙基，环丙基，丁基，异丁基，仲丁基， 环丁基，叔丁基，苯基，苄基，2-氧杂环丁基，3-氧杂环丁基，四氢 呋喃-3-基，四氢呋喃-2-基，环戊基，戊基，甲基硫烷基甲基，乙基硫 烷基甲基，2-甲基硫烷基乙基，或1-甲基硫烷基乙基，

A₁为单键或1至3个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，或 -CO-、-OCO-、-NRCO-、-SO₂-或-NRSO₂-，

A₂为单键或1至3个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，

L₁为单键，含1-10个C原子的直链或分支烷基接头，其中1-5 个CH₂基团可彼此独立地被O、S、SO、SO₂、NR、-(C＝O)-、 -CRR'-、-OCO-、-NRCONR'-、-NRCO-、-NRSO₂R'-、-COO-、 -CONR-、-C≡C-基团置换和/或被-CH＝CH-基团置换，和/或另外 1-20个H原子可被F和/或Cl置换，或者为-CRR'-，

L₂为单键、-CRR'-、-NR-、-NRCR'R-或-NRCRR'CRR'、

X,Y为H，T，未被取代或被＝S、＝NR、＝O、R、T、OR、 NRR'、SOR、SO₂R、SO₂NRR'、CN、COOR、CONRR'、 NRCOR'、NRCONR'R″、NRSO₂R'和/或NRCOR'单取代、二取代 或三取代的含1-10个C原子的直链或分支烷基，其中一个、两个或三 个CH₂基团可彼此独立地被O、S、SO、SO₂、NR、-OCO-、 -NRCONR'-、-NRCO-、-NRSO₂R'-、-COO-、-CONR-、-C≡C-基团 置换和/或被-CH＝CH-基团置换和/或另外1-20个H原子可被F和/或 Cl置换，或者为未被取代或被＝S、＝NR、＝O、R、T、OR、NRR'、 SOR、SO₂R、SO₂NRR'、CN、COOR、CONRR'、NRCOR'、 NRCONR'R″、NRSO₂R'和/或NRCOR'单-、二-或三取代的含3-7个 C原子的环烷基，其中一个、两个或三个CH₂基团可彼此独立地被 O、S、SO、SO₂、NR、-OCO-、-NRCONR'-、-NRCO-、 -NRSO₂R'-、-COO-、-CONR-、-C≡C-基团置换和/或被-CH＝CH-基 团置换和/或另外1-11个H原子可被F和/或Cl置换，

R，R'彼此独立地为H、未被取代或被＝S、＝NR、＝O、Hal、 OH、NH₂、SO₂CH₃、SO₂NH₂、CN、CONH₂、NHCOCH₃、和/或 NHCONH₂单取代、二取代或三取代的含1-10个C原子的直链或分支 烷基，其中一个、两个或三个CH₂基团可彼此独立地被O、S、SO、 SO₂、NH、NCH₃、-OCO-、-NHCONH-、-NHCO-、-NRSO₂A-、 -COO-、-CONH-、-NCH₃CO-、-CONCH₃-、-C≡C-基团置换和/或被 -CH＝CH-基团置换和/或另外1-20个H原子可被F和/或Cl置换，

或者为未被取代或被＝S、＝NR、＝O、OH、NH₂、SO₂CH₃、 SO₂NH₂、CN、CONH₂、NHCOCH₃、和/或NHCONH₂单取代、二 取代或三取代的含3-7个C原子的环烷基，其中一个、两个或三个 CH₂基团可彼此独立地被O、S、SO、SO₂、NH、NCH₃、-OCO-、 -NHCONH-、-NHCO-、-NRSO₂A-、-COO-、-CONH-、 -NCH₃CO-、-CONCH₃-置换和/或被-CH＝CH-基团置换和/或另外1-11 个H原子可被F和/或Cl置换，

m为0-4，

n为0-2，且

Hal为F、Cl、Br或I，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基、2-丁基或异丁基，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明进一步优选地涉及所有上述的式I化合物，其中

R²为正丙基、异丙基、2-丁基或异丁基，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基、2-丁基或异丁基，且

R²为正丙基、异丙基、2-丁基或异丁基，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基，且

R²为正丙基、异丙基或2-丁基，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为具有S构型手性中心的异丙基，其中异丙基与手性中心键 合，且

R²为具有S构型手性中心的正丙基、异丙基或2-丁基，其中正 丙基、异丙基或2-丁基基团与手性中心键合，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明优选涉及所有上述的式I化合物，其中

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明进一步优选涉及所有上述的式I化合物，其中

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

A₁为亮氨酸或单键，且

A₂为缬氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

A₁为S-亮氨酸或单键，且

A₂为S-缬氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基、2-丁基或异丁基，

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，且

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基，

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，且

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R²为正丙基、异丙基、2-丁基或异丁基，

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，且

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R²为正丙基、异丙基或2-丁基，

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，且

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基，

R²为正丙基、异丙基或2-丁基，

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，且

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为具有S构型手性中心的异丙基，其中异丙基与手性中心键 合，

R²为具有S构型手性中心的正丙基、异丙基或2-丁基，其中正 丙基、异丙基或2-丁基基团与手性中心键合，

A₁为单键或以肽样的方式连接的氨基酸基团，其中氨基酸基团 选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基甘氨酸， 环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，四氢呋 喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸，2-甲 基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬氨酸，正缬氨酸， 氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，甲硫 氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基丝氨酸，-CO-， -OCO-，-NRCO-，-SO₂-和-NRSO₂-，且

A₂为单键或1至2个以肽样的方式相互连接的氨基酸基团，其 中氨基酸基团选自丙氨酸，甘氨酸，环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸， 环戊基甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基 甘氨酸，四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲 基甘氨酸，2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，缬 氨酸，正缬氨酸，氨基丁酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，叔亮氨酸， 正亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸和O- 乙基丝氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基、2-丁基或异丁基，

A₁为亮氨酸，特别是S-亮氨酸或单键，且

A₂为缬氨酸，特别是S-缬氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R²为正丙基、异丙基、2-丁基或异丁基，

A₁为亮氨酸，特别是S-亮氨酸或单键，且

A₂为缬氨酸，特别是S-缬氨酸，及其生理学可接受的盐、衍生 物、溶剂合物、前药和立体异构体，包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为异丙基，

R²为正丙基、异丙基或2-丁基，

A₁为亮氨酸，特别是S-亮氨酸或单键，且

A₂为缬氨酸，特别是S-缬氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为具有S构型手性中心的异丙基，其中异丙基与手性中心键 合，

R²为具有S构型手性中心的正丙基、异丙基或2-丁基，其中正 丙基、异丙基或2-丁基基团与手性中心键合，

A₁为亮氨酸或单键，且

A₂为缬氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还非常特别优选涉及所有上述的式I化合物，其中

R¹为具有S构型手性中心的异丙基，其中异丙基与手性中心键 合，

R²为具有S构型手性中心的正丙基、异丙基或2-丁基，其中正 丙基、异丙基或2-丁基基团与手性中心键合，

A₁为S-亮氨酸或单键，且

A₂为S-缬氨酸，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

还非常特别优选式I化合物，其中

n为0，

Y为OH，O-苄基，未被取代或被OR、NRR'、SOR、SO₂R、 SO₂NRR'、CN、COOR、CONRR'、NRCOR'、NRCONR'R″、 NRSO₂R'和/或NRCOR'单取代、二取代或三取代的含1-10个C原子 的直链或分支烷基或含3-10个C原子的环烷基，其中一个、两个或三 个CH₂基团可彼此独立地被O、S、SO、SO₂、NR、-OCO-、 -NRCONR'-、-NRCO-、-NRSO₂R'-、-COO-、-CONR-、-C≡C-基 团置换和/或被-CH＝CH-基团置换和/或另外1-20个H原子可被F和/ 或Cl置换，

m为1，

L₁为-(C＝O)-，

X为未被取代或被T、OR、NRR'、SOR、SO₂R、 SO₂NRR'、CN、COOR、CONRR'、NRCOR'、NRCONR'R″、 NRSO₂R'单取代、二取代或三取代的含1-10个C原子的直链或分支 烷基或含3-10个C原子的环烷基，其中一个、两个或三个CH₂基团 可彼此独立地被O、S、SO、SO₂、NR、-OCO-、-NRCONR'-、 -NRCO-、-NRSO₂R'-、-COO-、-CONR-、-C≡C-基团置换和/或被 -CH＝CH-基团置换和/或另外1-20个H原子可被F和/或Cl置换，和/ 或

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

本发明还进一步非常特别优选地涉及式I化合物，其中

n为0，

Y为OH、O-苄基、未取代或被COOH、COOR或OH单取 代的含1-10个C原子的直链或分支烷基或含3-10个C原子的环烷基，

m为1，

L₁为-(C＝O)-，

X为未被取代或被T单取代或二取代的含1-10个C原子的 直链或分支烷基或含3-10个C原子的环烷基，其中一个、两个或三个 CH₂基团可彼此独立地被O置换，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

还非常特别优选所有上述式I化合物，其中L₂和Y一起为3-甲 基丁酸或苄基3-甲基丁酸酯。

式I化合物的上述基团的所有上述的优选的、特别优选的和非常 特别优选的含义应当以这样的方式来理解，这些优选的、特别优选的 和非常特别优选的含义或实施方案可以任意可能的组合方式相互组合 得到式I化合物且此类型的优选的式I化合物同样在此明确地公开。

因此还非常特别优选例如式1化合物，其中

R¹为具有S构型手性中心的异丙基，其中异丙基与手性中心键 合，

R²为具有S构型手性中心的正丙基、异丙基或2-丁基，其中正 丙基、异丙基或2-丁基基团与手性中心键合，

A₁为S-亮氨酸或单键

A₂为S-缬氨酸，

n为0，

Y为OH，O-苄基，未被取代或被COOH、COOR或OH单 取代的含1-10个C原子的直链或分支烷基或含3-10个C原子的环烷 基，

m为1，

L₁为-(C＝O)-，

X为未被取代或被T单取代或二取代的含1-10个C原子的 直链或分支烷基或含3-10个C原子的环烷基，其中一个、两个或三个 CH2基团可彼此独立地被O置换，

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

非常特别优选下列式I化合物：

a)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(3-苯基丙 酰基氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁 酸苄基酯

b)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(4-苯基丁 酰氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁酸 苄基酯

c)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[2-甲基 -2-(萘-2-基氧基)丙酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊 酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯

d)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(3-苯基丙 酰基氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁 酸

e)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(4-苯基丁 酰氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁酸

f)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[2-甲基 -2-(萘-2-基氧基)丙酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊 酰基氨基]-3-甲基丁酸

g)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[2-(萘-2- 基氧基)乙酰氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

h)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲 基-2-(3-甲基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3- 甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸

i)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(R)-3-甲基-2-[(S)-4-甲 基-2-(3-甲基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3- 甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸

j)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙 酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸苄基酯

k)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(4-甲氧苯基) 乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸苄基酯

l)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[2-(3-乙氧苯基)乙酰氨 基]-3-甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸苄基酯

m)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(3-甲氧苯基) 乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸苄基酯

n)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙 酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

o)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(4-甲氧苯基) 乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

p)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(2-萘-2-基 乙酰氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁 酸苄基酯

q)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[2-(3-乙氧苯基)乙酰氨 基]-3-甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

r)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(2-甲氧基-5-三 氟甲氧基苯基)乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基 戊酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯

s)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[2-(3-苯氧 苯基)乙酰氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3- 甲基丁酸苄基酯

t)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(3-甲氧苯基) 乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

u)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(2-萘-1-基 乙酰氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁 酸苄基酯

v)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(2-甲氧苯基) 乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸苄基酯

w)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[(联苯基-3-羰基)氨基]-3- 甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基 丁酸苄基酯

x)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(2-甲氧基-5-三 氟甲氧基苯基)乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基 戊酰基氨基]-3-甲基丁酸

y)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(2-萘-2-基 乙酰氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁 酸

z)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-4-[(S)-2-(3-叔丁氧苯甲酰基氨 基)-3-甲基丁酰氨基]-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨 基)-3-甲基丁酸

aa)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[2-(3-苯氧 苯基)乙酰氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3- 甲基丁酸

bb)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-2-[2-(2-甲氧苯基) 乙酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

cc)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[2-(3,4-二甲基苯氧基)乙 酰氨基]-3-甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸

dd)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-(2-萘-1-基 乙酰氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁 酸

ee)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[(联苯基-3-羰基)氨基]-3- 甲基丁酰氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基 丁酸

ff)(S)-2-{(2S,3S)-2-[(3S,4S)-4-((S)-2-联苯基乙酰氨基-3-甲基 丁酰氨基)-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基]-3-甲基戊酰基氨基}-3-甲基丁酸 苄基酯

gg)(S)-2-{(2S,3S)-2-[(3S,4S)-4-((S)-2-联苯基乙酰氨基-3-甲基 丁酰氨基)-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基]-3-甲基戊酰基氨基}-3-甲基丁酸

hh)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-{(S)-2-[2-(3-乙氧苯基)乙酰氨 基]-3-甲基-1-(S)-氧代戊基氨基}-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊 酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯

ii)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-2-((S)-2-羟基-2-苯 基乙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨 基)-3-甲基丁酸苄基酯

jj)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-甲基-1-(S)-2-[2-(3- 乙氧苯基)乙酰氨基]-3-氧代戊基氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰 基氨基]-3-甲基丁酸

kk)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-2-((S)-2-羟基-2-苯 基乙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨 基)-3-甲基丁酸

ll)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-4-[(S)-2-(2,2-二乙基丁酰氨基)-3- 甲基丁酰氨基]-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基 丁酸

mm)(S)-2-{(2S,3S)-2-[(3S,4S)-4-((S)-2-{2-[3-(2-叔丁氧羰基氨基 乙氧基)苯基]乙酰氨基}-3-甲基-1-(S)-氧代戊基氨基)-3-羟基-5-苯基戊 酰基氨基]-3-甲基戊酰基氨基}-3-甲基丁酸

nn)(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(2S,3S)-3-甲基-2-[2-(3- 丙氧基苯基)乙酰氨基]戊酰基氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基 氨基]-3-甲基丁酸

oo)(S)-2-{(2S,3S)-2-[(3S,4S)-4-((S)-2-{2-[3-(2-氨基乙氧基)苯 基]乙酰氨基}-3-甲基-1-(S)-氧代戊基氨基)-3-羟基-5-苯基戊酰基氨 基]-3-甲基戊酰基氨基}-3-甲基丁酸

pp)(2S、5S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁 酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酸-[(1S,2S)-1-(1-乙基丙基氨 甲酰基)-2-甲基丁基]-酰胺

qq)(2S,5S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-((S)-4-甲基-2-苯基乙酰基 氨基戊酰基氨基)-1-氧代丁基氨基]-5-苯基戊酸-[(1S,2S)-1-(1-乙基丙 基氨甲酰基)-2-甲基丁基]-酰胺

rr)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-((S)-4-甲 基-2-苯基乙酰基氨基戊酰基氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲 基戊酰基氨基)-3-甲基丁酸苄基酯

ss)(S)-2-((2S,3S)-2-{(3S,4S)-3-羟基-4-[(S)-3-甲基-2-((S)-4-甲 基-2-苯基乙酰基氨基戊酰基氨基)丁酰氨基]-5-苯基戊酰基氨基}-3-甲 基戊酰基氨基)-3-甲基丁酸

tt)(2S,5S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰 氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酸-((1S,2S)-1-环戊基氨甲酰基 -2-甲基丁基)-酰胺

uu)(3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰 氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酸-[(S)-1-(1-乙基丙基氨甲酰 基)-2-甲基丙基]-酰胺

vv)(3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰 氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酸-[(S)-1-(1-乙基丙基氨甲酰基) 丁基]-酰胺

ww)(3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰 氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酸-[(1S,2S)-1-(3-羟基-1,1-二甲 基丙基氨甲酰基)-2-甲基丁基]-酰胺

及其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体， 包括它们以所有比例的混合物。

上文和下文中所述的氨基酸基团具有以下共同的基本结构并且仅 在基团R³上不同。

在上文和下文中所述的氨基酸基团的情况下，R³代表以下氨基酸 基团：

-天然氨基酸：丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱 氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖 氨酸，甲硫氨酸，鸟氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸， 氨酸，酪氨酸和缬氨酸

-非天然氨基酸，例如环丙基甘氨酸，环丁基甘氨酸，环戊基 甘氨酸，环己基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸，3-氧杂环丁基甘氨酸， 四氢呋喃-3-基甘氨酸，四氢呋喃-2-基甘氨酸，乙基硫烷基甲基甘氨酸， 2-甲基硫烷基乙基甘氨酸，1-甲基硫烷基乙基甘氨酸，正缬氨酸，氨 基丁酸，叔亮氨酸，正亮氨酸，萘基丙氨酸，O-甲基丝氨酸，O-乙基 丝氨酸等。

如果上述氨基酸可以多种对映体形式存在，则在上文和下文中包 括所有这些形式以及它们的混合物(例如DL形式)。

此外，缩写具有下述含义：

Boc      叔丁氧羰基

CBZ      苄氧羰基

DNP      2,4-二硝基苯基

FMOC     9-芴基甲氧羰基

imi-DNP  在咪唑环1-位上的2,4-二硝基苯基

OMe      甲基酯

POA      苯氧乙酰基

DCCI     二环己基碳二亚胺

HOBt     1-羟基苯并三唑

Hal表示氟、氯、溴或碘，尤其是氟或氯。

-(C＝O)-表示羰基氧或者代表

烷基或A为无分支的(直链)或分支的烃链且含1、2、3、4、5、 6、7、8、9或10个C原子。优选地表示甲基，此外还有乙基，丙基， 异丙基，丁基，异丁基，仲丁基或叔丁基，此外也可以是戊基，1-、 2-或3-甲基丁基，1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基，1-乙基丙基，己基， 1-、2-、3-或4-甲基戊基，1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁 基，1-或2-乙基丁基，1-乙基-1-甲基丙基，1-乙基-2-甲基丙基，1,1,2- 或1,2,2-三甲基丙基，直链或支链庚基、辛基、壬基或癸基，进一步 优选例如三氟甲基。

环烷基为环状烃链且具有3-10个、优选3-7个C原子且优选表示 环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。

单环或二环饱和、不饱和或芳香杂环优选地表示未取代的或单取 代、二取代或三取代的2-或3-呋喃基，2-或3-噻吩基，1-、2-或3-吡 咯基，1-、2，4-或5-咪唑基，1-、3-、4-或5-吡唑基，2-、4-或5-噁 唑基，3-、4-或5-异噁唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-异噻唑基， 2-、3-或4-吡啶基，2-、4-、5-或6-嘧啶基，此外优选地表示1,2,3-三 唑-1-、-4-或-5-基，1,2,4-三唑-1-、-3-或5-基，1-或5-四唑基，1,2,3- 噁二唑-4-或-5-基，1,2,4-噁二唑-3-或-5-基，1,3,4-噻二唑-2-或-5-基， 1,2,4-噻二唑-3-或-5-基，1,2,3-噻二唑-4-或-5-基，3-或4-哒嗪基，吡嗪 基，1-、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，4-或5-异吲哚基，1-、2-、 4-或5-苯并咪唑基，1-、3-、4-、5-、6-或7-苯并吡唑基，2-、4-、5-、 6-或7-苯并噁唑基，3-、4-、5-、6-或7-苯并异噁唑基，2-、4-、5-、 6-或7-苯并噻唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并异噻唑基，4-、5-、6-或 7-苯并-2,1,3-噁二唑基，2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、 4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基，2-、4-、 5-、6-、7-或8-喹唑啉基，5-或6-喹喔啉基，2-、3-、5-、6-、7-或8-2H- 苯并-1,4-噁嗪基，进一步优选地表示1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基， 1,4-苯并二噁烷-6-基，2,1,3-苯并噻二唑-4-或-5-基或2,1,3-苯并噁二唑 -5-基。

杂环基还可部分或完全氢化以及表示，例如，2,3-二氢-2-、-3-、 -4-或-5-呋喃基，2,5-二氢-2-、-3-、-4-或5-呋喃基，四氢-2-或-3-呋喃 基，1,3-二氧戊环-4-基，四氢-2-或-3-噻吩基，2,3-二氢-1-、-2-、-3-、 -4-或-5-吡咯基，2,5-二氢-1-、-2-、-3-、-4-或-5-吡咯基，1-、2-或3- 吡咯烷基，四氢-1-、-2-或-4-咪唑基，2,3-二氢-1-、-2-、-3-、-4-或-5- 吡唑基，四氢-1-、-3-或-4-吡唑基，1,4-二氢-1-、-2-、-3-或-4-吡啶基， 1,2,3,4-四氢-1-、-2-、-3-、-4-、-5-或-6-吡啶基，1-、2-、3-或4- 基，2-、3-或4-吗啉基，四氢-2-、-3-或-4-吡喃基，1,4-二噁烷基，1,3- 二恶烷-2-、-4-或-5-基，六氢-1-、-3-或-4-哒嗪基，六氢-1-、-2-、-4- 或-5-嘧啶基，1-、2-或3-哌嗪基，1,2,3,4-四氢-1-、-2-、-3-、-4-、-5-、 -6-、-7-或-8-喹啉基，1,2,3,4-四氢-1-、-2-、-3-、-4-、-5-、-6-、-7-或 -8-异喹啉基，2-、3-、5-、6-、7-或8-3,4-二氢-2H-苯并-1,4-噁嗪基， 进一步优选地表示2,3-亚甲二氧基苯基，3,4-亚甲二氧基苯基，2,3-亚 乙二氧基苯基，3,4-亚乙二氧基苯基，3,4-(二氟亚甲二氧基)苯基，2,3- 二氢苯并呋喃-5-或6-基，2,3-(2-氧代亚甲二氧基)苯基或还有3,4-二氢 -2H-1,5-苯并二氧杂环庚-6-或-7-基，进一步优选地表示2,3-二氢苯并 呋喃基或2,3-二氢-2-氧代呋喃基。

杂环进一步表示例如2-氧代-1-基，2-氧代吡咯烷-1-基，2-氧 代-1H-吡啶-1-基，3-氧代吗啉-4-基，4-氧代-1H-吡啶-1-基，2,6-二氧 代1-基，2-氧代哌嗪-1-基，2,6-二氧代哌嗪-1-基，2,5-二氧代吡咯 烷-1-基，2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基，3-氧代-2H-哒嗪-2-基，2-己内酰胺 -1-基(＝2-氧代氮杂环庚烷-1-基)，2-羟基-6-氧代哌嗪-1-基，2-甲氧基-6- 氧代哌嗪-1-基或2-氮杂二环[2.2.2]辛-3-酮-2-基。

根据本发明还有所有这些化合物的生理学可接受的盐、衍生物、 溶剂合物和立体异构体，包括它们以所有比例的混合物。

本发明还涉及这些化合物的旋光活性形式(立体异构体)、对映异 构体、外消旋体、非对映异构体以及水合物和溶剂合物。

本发明的式I化合物由于它们的分子结构可能是手性，因而可能 以各种对映体形式存在。因此它们可能是外消旋或旋光活性形式。由 于本发明化合物的外消旋体或立体异构体的药物效力可能不同，因而 使用对映异构体可能是期望的。在这些情况下，最终产品、而且甚至 是中间产品，可通过本领域技术人员已知的或本身已在合成中使用的 化学或物理措施而分离成对映体化合物。

药学或生理学上可接受的衍生物指例如本发明化合物的盐以及所 谓的前药化合物。前药化合物指式I化合物,其已经用例如烷基或酰基 基团(也参见下文的氨基保护基和羟基保护基)、糖或寡肽修饰并且 在有机体内迅速地裂解或释放生成本发明的有效化合物。这些还包括 本发明化合物的可生物降解的聚合物衍生物，如描述于例如Int.J. Pharm.115(1995),61-67中的可生物降解的聚合物衍生物。

适宜的酸加成盐为所有生理学或药理学上可接受的酸的无机或有 机盐，例如卤化物，尤其盐酸盐或氢溴酸盐、乳酸盐、硫酸盐、枸橼 酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、草酸盐、乙酸盐、磷酸盐、 甲基磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

式I化合物的溶剂合物指惰性溶剂分子在式I化合物上的加合物， 由于它们之间的相互吸引力形成。溶剂合物为例如水合物，如一水合 物或二水合物，或醇化物，即与醇(例如用甲醇或乙醇)的加成化合 物。

进一步的意图是式I化合物包括其同位素标记的形式。式I化合 物的同位素标记的形式除以下事实外与该化合物该化合物相同：化合 物的一个或多个原子被具有与通常天然存在的原子的原子量或质量数 不同的原子置换。同位素容易商购获得并且可通过熟知的方法引入式 I化合物中，其实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例 如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和 ³⁶Cl。含有一种或多种上述的同位素和/或其它原子的其它同位素的式 I化合物、其前药或药学上可接受的盐意图是本发明的一部分。同位 素标记的式I化合物可以许多有益的方式应用。例如，同位素标记的 式I化合物，例如已将放射性同位素如³H或¹⁴C引入其中，适于药物 和/或底物组织分配试验。这些放射性同位素，即氚(³H)和碳-14(¹⁴C)， 由于它们的制备简单和优良的可检测性因而是特别优选的。将较重的 同位素例如氘(²H)引入到式I化合物中由于此同位素标记的化合物 较高的代谢稳定性因而具有优点。较高的代谢稳定性直接转化为 升高的体内半衰期或较低的剂量，这在大多数情况下将代表本发明优 选的实施方案。同位素标记的式I化合物通常可通过实施合成流程图 及相关描述中、在实施例部分中和在本申请文本的制备部分中公开的 方法，以容易获得的同位素标记的反应物置换非同位素标记的反应物 来制备。

为了通过第一动力学同位素效应操纵化合物的氧化代谢，也可将 氘(²H)引入式I化合物中。第一动力学同位素效应为由同位素核的 交换产生的化学反应的速率的变化，其依次由对该同位素交换后共价 键形成是必要的基态能的变化引起。较重的同位素的交换通常导致用 于化学键的基态能的降低并从而导致限速的链断裂的速率降低。如果 链断裂发生在沿多产物反应的坐标的鞍点(saddle-point)区域或该区 域的附近，则产物分配比可被基本上改变。为了解释：如果氘与不能 交换的位置中的碳原子键合，则k_M/k_D＝2-7的速率差是典型的。如果 此速率差成功地应用于对氧化敏感的式I化合物，则此化合物的体内 特性可因此剧烈改变并导致改善的药代动力学性质。

当发现和开发剂时，本领域技术人员试图优化药代动力学参 数同时保留期望的体外性质。合理的是假设许多具有差的药代动力学 特性的化合物对氧化代谢敏感。目前可用的体外肝脏微粒体试验提供 了关于此类型的氧化代谢过程的有价值信息，这从而允许通过对这种 氧化代谢的抗性合理设计具有改善的稳定性的氘化式I化合物。式I 化合物的药代动力学特性的显著改善由此获得并可根据体内半衰期 (T/2)的增加、最大效果时的浓度(C_max)、剂量响应曲线下面 积(AUC)、和F和根据降低的清除率、剂量和原料成本定量表示。

下面意图举例说明以上所述：具有多个潜在的氧化代谢的攻击位 置(例如苄基的氢原子与氮原子键合的氢原子)的式I化合物，以其 中氢原子的组合被氘原子置换的一系列类似物制备，使得这些氢原子 中的一些、大多数或所有氢原子已被氘原子置换。半衰期测定使得能 够有利和准确地测定对氧化代谢的抗性的改善已经改善的程度。以这 种方式，母体化合物的半衰期由于此类型的氘-氢交换的结果可延长最 高100％是确定的。

式I化合物中氢被氘置换也可用于实现起始化合物的代谢产物谱 的有利的改变以减少或消除不期望的毒性代谢产物。例如，如果毒性 代谢产物通过氧化性碳-氢(C-H)键裂而发生，则可合理设想氘化的 类似物将极大地减少或消除不期望的代谢产物的产生，即使特定的氧 化不是速率控制步骤。关于氘-氢交换的技术现状的其它信息，例如在 Hanzlik等，J.Org.Chem.55,3992-3997,1990,Reider等，J.Org. Chem.52,3326-3334,1987,Foster,Adv.Drug Res.14,1-40,1985, Gillette等，Biochemistry 33(10),2927-2937,1994,和Jarman等， Carcinogenesis 16(4),683-688,1993中给出。

本发明还涉及本发明的式I化合物的混合物，例如两种非对映异 构体例如以1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000比例的 混合物。这些特别优选为两种立体异构化合物的混合物。不过，还优 选两种或多种式I化合物的混合物。

另外本发明还涉及制备式I化合物的方法，特征在于

a)使式II化合物，其中I₁、I₂、I₃、I₄和I₅具有上文中指定的 含义且Q表示氨基保护基团，与式III化合物，其中Y、L₂、n、A₂和R²具有上文中指定的含义，反应，在式II化合物的羧基基团和式 III化合物的氨基基团之间形成肽键得到式IV化合物，并且，在第二 步中，通过脱除保护基团Q将式IV化合物转变为式V化合物，

b)和使式VI化合物，其中X、L₁、m、A₁和R¹具有上文中指 定的含义且基团X任选地被保护基团保护，与式V化合物，其中基团 Y任选地被保护基团保护，反应，在式VI化合物的羧基基团和式V 化合物的氨基基团之间形成肽键，并通过脱除基团X和Y上任选存在 的保护基团得到式I化合物，其中I₁、I₂、I₃、I₄、I₅、X、Y、L₁、L₂、 R¹、R²、A₁、A₂、m和n具有上文中指定的含义，或者

c)通过用酸处理将式I化合物的碱转变为其盐中的一种，或

d)通过用碱处理将式I化合物的酸转变为其盐中的一种。

也是可能的是在各种情况下逐步进行反应和改变结构单元的连接 反应的顺序以适应保护基团概念。

起始原料或起始化合物是公知的。如果它们是新的，则它们可通 过本身已知的方法来制备。

如有需要，起始原料也可原位生成，就此不从反应混合物中分离 出来，而是立即将它们进一步转化为式I化合物。

式I化合物优选地通过经溶剂分解(尤其是经水解、或经氢解) 从它们的官能团衍生物上将它们释放来获得。溶剂分解或氢解优选的 起始原料是含相应地带保护基的氨基、羧基和/或羟基的那些，而不是 含一个或多个自由的氨基、羧基和/或羟基的那些，优选载有氨基保护 基团的那些，而不是载有与N原子连接的H原子的那些。进一步地优 选载有羟基保护基的起始原料，而不是载有羟基的H原子的起始原料。 还优选载有带保护基的羧基而不是自由羧基的起始原料。多个相同或 不同的带保护基的氨基、羧基和/或羟基存在于起始原料的分子之中也 是可能的。如果存在的保护基相互不同，则它们可在许多情况下选择 性地裂解。

术语“氨基保护基团”是公知的，指适于保护(阻断)氨基不发生 化学反应、但可在期望的化学反应已经在分子的其它位置上进行之后 容易除去的基团。此类基团的代表是，尤其是，未取代或取代的酰基， 此外还有未取代或取代的芳基(例如2,4-dinitophenyl)或芳烷基(例 如苄基，4-硝基苄基，三苯基甲基)。由于氨基保护基团在期望的反应 或反应结果之后被除去，另外它们的类型和大小不重要，但优选含1-20 个、尤其是1-8个C原子的那些。术语“酰基”应以与本发明的方法有 关的最宽泛的含义理解。它包括由脂肪羧酸、芳脂羧酸、芳香羧酸或 杂环羧酸或磺酸衍生来的酰基且，特别包括烷氧羰基、芳氧基羰基且 尤其包括芳烷氧羰基基团。此类酰基的实例为烷酰基如乙酰基 (acteyl)、丙酰基、buturyl，芳烷酰基如苯乙酰，芳酰基如苯甲酰 基或甲苯甲酰基，芳氧基烷酰基(aryoxyaklkanoyl)如苯氧乙酰基， 烷氧羰基(alkyoxycarbonyyl)如甲氧羰基、乙氧羰基、2,2,2-三氯乙 氧羰基、BOC、2-碘乙氧羰基，芳烷氧羰基如CBZ、4-甲氧基苄氧羰 基或FMOC。优选的酰基为CBZ、FMOC、苄基和乙酰基。

术语“酸保护基团”或“羧基保护基团”同样是公知的，指适于保护 -COOH基团不发生化学反应、但可在期望的化学反应已经在分子的 其它位置上进行之后容易除去的基团。典型的是使用酯代替游离酸， 例如使用取代和未取代的烷基酯(甲基、乙基、叔丁基及其取代的衍 生物)，使用取代和未取代的苄基酯或甲硅烷基酯。酸-保护基团的类 型和大小不重要，但优选含1-20个、尤其是1-10个C原子的那些。

术语“羟基保护基团”是同样公知的，指适于保护羟基不发生化学 反应、但可在期望的化学反应已经在分子的其它位置上进行之后容易 除去的基团。此类基团的代表是上述未取代或取代的芳基、芳烷基或 酰基基团，此外还有烷基基团。羟基保护基团它们的类型和大小不重 要，但优选含1-20个、尤其是1-10个C原子的那些。羟基保护基团 的实例，尤其，是对硝基苯甲酰基、对甲苯磺酰基和乙酰基，其中苄 基和乙酰基为优选。

氨基保护基团、酸保护基团和羟基保护基团的其它典型的实例见 于，例如“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”，第四 版，Wiley-Interscience，2007。

作为起始原料使用的式I化合物的官能团衍生物可通过氨基酸和 肽合成的已知方法来制备，例如在所述标准著作和专利申请中描述的 方法。

式I化合物从其官能团衍生物释放，依赖于所用的保护基，例如 在强酸的帮助下，有利地使用三氟乙酸或高氯酸，但也可使用其它无 机强酸，如盐酸或硫酸，有机强酸，如三，或磺酸，如苯甲酰 基-或对甲苯磺酸。另外的惰性溶剂和/或催化剂的存在是可能的，但 并不总是必要的。

取决于各自的合成路线，起始原料可任选地在惰性溶剂的存在下 反应。

适宜的惰性溶剂为例如庚烷，如己烷，石油醚，DMSO、苯，甲 苯，二甲苯，三氯乙烯，1,2-二氯乙烷，四氯化物，氯仿或二氯甲烷； 醇类，如甲醇，乙醇，异丙醇，正丙醇，正丁醇或叔丁醇；醚类，如 乙醚，二异丙醚(优选在吲哚氮上取代)，四氢呋喃(THF)或二噁烷；乙 二醇醚，如乙二醇单甲醚或单乙醚，乙二醇-l醚(二甘醇二甲醚)；酮类， 如丙酮或丁酮；酰胺类，如乙酰胺，二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮 (NMP)或二甲基甲酰胺(DMF)；腈类，如乙腈；酯类，如乙酸乙酯， 羧酸类或酸酐类，例如如乙酸或乙酸酐；硝基化合物，如硝基甲烷或 硝基苯，任选地还可以是所述溶剂相互的混合物或与水的混合物。

溶剂的量不重要；优选地每g待反应的式I化合物可加入10g至 500g的溶剂。

添加缚酸剂可能是有利的，例如碱金属或碱土金属氢氧化物、碳 酸盐或碳酸氢盐或其它弱酸的碱金属或碱土金属盐，优选钾盐、钠盐 或钙盐，或者添加有机碱，例如，三乙胺、二甲胺、吡啶或喹啉，或 过量的胺组分。

可将所得的本发明化合物与制备它们的相应溶液分离(例如通过 离心和洗涤)，并可在分离后贮存在另一组合物中，或者它们可直接 保留在制备溶液中。所获得的本发明化合物也可在用于特定用途所期 望的溶剂中收纳。

适宜的反应温度为0至40℃的温度，优选5至25℃。

反应持续时间依赖于所选择的反应条件。通常，反应持续时间为 0.5小时至10天，优选1至24小时。使用微波炉时，反应时间可缩短 到1至60分钟。

另外，式I化合物以及制备它们的起始原料通过已知的方法来制 备，如描述于文献中的方法(例如在标准著作中，如Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie[有机化学的方法], Georg-Thieme-Verlag,Stuttgart)，例如在已知的并且适合于所述反 应的反应条件下制备。本发明中还可运用本身已知的变化形式，这在 本文中没有更详细地描述。

常规的精制步骤，例如加水至反应混合物中并萃取，使得能够在 除去溶剂之后得到化合物。这之后将产物经蒸馏或结晶或进行谱纯 化进一步纯化可能是有利的。

式I的酸可用碱，例如通过等量的酸和碱在惰性溶剂(如乙醇) 中反应、和包括蒸发转变为相关的加成盐。用于此反应的适宜的碱尤 其为可提供生理学可接受的盐的那些。因此，式I的酸可用碱(例如 氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾)转变为相应的金属盐，尤其 是碱金属盐或碱土金属盐，或转变为相应的铵盐。可提供生理学可接 受的盐的有机碱例如乙醇胺也适于此反应。

另一方面，式I的碱可使用酸转变为相关的酸加成盐，例如通过 将等量的碱和酸在惰性溶剂(如乙醇)中反应并随后蒸发。用于此反 应的适宜的酸尤其为可提供生理学可接受的盐的那些。因此，可以使 用无机酸，例如硫酸，硝酸，氢卤酸如盐酸或氢溴酸，磷酸如正磷酸， 氨基磺酸，此外还有有机酸，尤其脂肪羧酸，脂环羧酸，芳脂羧酸， 芳香羧酸或杂环羧酸，单羧酸或多元羧酸，磺酸或硫酸，例如甲酸， 乙酸，丙酸，特戊酸，二乙基乙酸，丙二酸，琥珀酸，庚二酸，富马 酸，马来酸，乳酸，酒石酸，苹果酸，枸橼酸，葡糖酸，抗坏血酸， 烟酸，异烟酸，甲磺酸或乙磺酸，乙二碘酸，2-羟基磺酸，苯磺酸， 对甲苯磺酸，萘单磺酸和萘二磺酸或月桂基硫酸。与生理学不能接受 的酸形成的盐，例如盐，可用于分离和/或提纯式I化合物。

已经发现式I化合物耐受良好且具有有价值的药理特性，因为它 们能选择性抑制天冬氨酰蛋白酶尤其是组织蛋白酶D。

因此本发明还涉及本发明化合物用于制备和/或预防由组织 蛋白酶D和/或由组织蛋白酶D-媒介的信号转导引起、介导和/或传播 的疾病的药物的用途。

因此本发明还涉及，尤其是，用于和/或预防生理和/或病理 生理状态的、包含至少一种本发明化合物和/或其生理学可接受的盐、 衍生物、溶剂合物和立体异构体(包括它们以所有比例的混合物)之 一的药物。

特别优选，尤其是，与组织蛋白酶D有关联的生理和/或病理生理 状态。

生理和/或病理生理状态指医学上相关的生理和/或病理生理状 态，例如疾病或生病和医学紊乱、难受(complaints)、病征(symptoms) 或并发症等，尤其是疾病。

本发明还涉及包含至少一种本发明的化合物和/或其生理学可接 受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体(包括它们以所有比 例的混合物)之一的药物，用于和/或预防选自关节病、创伤性软 骨损伤和关节炎，尤其是类风湿性关节炎的生理和/或病理生理状态。

本发明还涉及包含至少一种本发明的化合物和/或其生理学可接 受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体(包括它们以所有比 例的混合物)之一的药物,用于和/或预防选自阿尔茨海默病、亨 廷顿病、粘脂病、癌症尤其是乳癌、接触性皮炎、迟发型过敏性反应、 炎症、子宫内膜异位症、瘢痕、良性前列腺增生、骨肉瘤、佝偻病、 皮肤病(例如银屑病)、免疫性疾病、自身免疫性疾病和免疫缺陷病 的生理和/或病理生理状态。

在这方面，脑癌、肺癌、鳞状上皮细胞癌症、膀胱癌、胃癌、胰 腺癌、肝癌、肾癌、结直肠癌、乳癌、头部癌症、颈癌、食管癌、妇 科癌症、甲状腺癌、淋巴瘤、慢性白血病和急性白血病被认为是癌性 疾病，所有这些通常统计在过度增殖性疾病组之中。

疼痛是一种复杂的感官知觉，其作为急性事件，具有警告和控制 信号的特征，但作为慢性疼痛已经失去这种作用，在这种情况下(作 为慢性疼痛综合征)现在应当被视为是一种独立的综合征和作为一种 独立的病征进行。痛觉过敏是在医学中用于对疼痛过度敏感和对 通常的疼痛刺激过度反应而使用的术语。可触发疼痛的刺激是例如压 力、热、冷或炎症。痛觉过敏是一种感觉过敏的形式，用于对刺激过 度敏感的通用术语。异常性疼痛是在医学中使用的被通常不引起疼痛 的刺激触发的疼痛感觉的术语。

因此本发明还涉及包含至少一种本发明的化合物和/或其生理学 可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体(包括它们以所 有比例的混合物)之一的药物，用于和/或预防选自疼痛、异常性 疼痛和痛觉过敏的生理和/或病理生理病症。

因此本发明特别优选涉及包含至少一种本发明的化合物和/或其 生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物、前药和立体异构体(包括它 们以所有比例的混合物)之一的药物，用于和/或预防选自关节病、 创伤性软骨损伤、关节炎、疼痛、异常性疼痛和痛觉过敏的生理和/ 或病理生理病症。

意图是上文公开的药物包括本发明的化合物用于制备和/或 预防上述生理和/或病理生理状态的药物的相应应用。

另外的意图是上文公开的药物包括和/或预防上述生理和/或 病理生理状态的相应方法，其中将至少一种本发明的化合物施用于需 要此种的患者。

本发明的化合物优选显示出有利的生物学活性，这种生物学活性 可在实施例描述的酶活性测定和动物实验中容易证实。在此种酶类试 验中，本发明的抗体优选显示出和产生抑制作用，这通常通过适宜范 围内、优选在微摩尔的范围内、更优选在纳摩尔的范围内的IC₅₀值记 载。

本发明的化合物可施用于人或动物，尤其是哺乳动物，如猿，狗， 猫，大鼠或小鼠，可用于人或动物体和用于对抗以上提到的疾病。 它们还可用作诊断试剂或试剂。

进一步地，本发明的化合物可用于组织蛋白酶D的分离和用于组 织蛋白酶D的活性或表达的研究。此外，它们特别适用于对与被扰乱 的组织蛋白酶D活性有关的疾病的诊断方法。因此本发明还涉及本发 明的化合物用于组织蛋白酶D的分离和用于组织蛋白酶D的活性或表 达的研究或作为组织蛋白酶D的结合剂和抑制剂的用途。

为了诊断目的，可将本发明的化合物例如进行放射活性标记。放 射性标记的实例为³H、¹⁴C、²³¹I和¹²⁵I。优选的标记方法为碘化法 (iodogen method)(Fraker等，1978)。此外，本发明的化合物可 用酶、荧光团和发团(chemophores)标记。酶的实例是碱性磷酸 酶、β-半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶，荧光团的实例是荧光素，发团 (chemophore)的实例是鲁米诺，自动化检测系统例如用于荧光呈 的自动化检测系统，例如在US4,125,828和US4,207,554中有描述。

式I化合物可用于制备药物制剂，特别是通过非化学方法制备。 在此使它们与至少一种固体、液体和/或半液体的赋形剂或助剂一起以 及任选地与一种或多种其它活性化合物组合形成适宜的剂型。

因此本发明还涉及药物制剂，其包含至少一种式I的化合物和/或 其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物和立体异构体，包括它们以 所有比例的混合物。尤其，本发明还涉及包含其它赋形剂和/或助剂的 药物制剂、以及包含至少一种其它药物活性化合物的药物制剂。

尤其，本发明还涉及制备药物制剂的方法，特征在于使式I化合 物化合物和/或其生理学可接受的盐、衍生物、溶剂合物和立体异构体 (包括它们各种比例为混合物)之一，与固体、液体或半液体的赋形 剂或助剂一起，以及任选地与其它药物活性化合物一起，形成适宜的 剂型。

本发明的药物制剂可用作人药或兽药的药物。患者或宿主可属于 任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别是人；啮齿类，包括小鼠、 大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。动物模型对于实验研究是有价 值的，其中它们提供人疾病的模型。

适宜的载体物质为适于经肠(例如口服)、肠胃外或局部施用的 并且不与新化合物起反应的有机或无机物，例如水，植物油(如向日葵 油或鱼肝油)，苯甲醇，聚乙二醇，明胶，碳水化合物如乳糖或淀粉， 硬脂酸镁，滑石粉，羊毛脂或凡士林。由于其专业知识，本领域技术 人员熟悉适于期望的药物制剂的助剂。除溶剂(例如水，生理盐溶液 或醇例如乙醇、丙醇或甘油，糖溶液如葡萄糖或甘露醇溶液，或所述 溶剂的混合物，凝胶形成剂，片剂辅助剂及其它活性成分载体)之外， 还可以例如使用润滑剂、稳定剂和/或湿润剂、乳化剂、影响渗透压的 盐、抗氧化剂、分散剂、消泡剂、缓冲剂、调味剂和/或芳香剂或矫味 剂、防腐剂、增溶剂或染料。如有需要，本发明的制剂或药物可包含 一种或多种其它活性化合物，例如一种或多种维生素。

如有需要，本发明的制剂或药物可包含一种或多种其它活性化合 物和/或一种或多种作用增强剂(佐剂)。

术语“药物配方”和“药物制剂”对于本发明而言作为同义词使用。

如本文中使用的“药物耐受的”涉及药物、沉淀剂、赋形剂、助剂、 稳定剂、溶剂及其它试剂，它们使得由它们获得的药物制剂施用于哺 乳动物而没有不期望的生理副作用例如恶心、头晕、消化问题等。

在肠胃外给药的药物制剂中，要求制剂(低毒)、所用的助剂和 最初的包装等渗性、水合正常和耐受性和安全性。令人惊奇地，本发 明的化合物优选地具有以下优点：直接使用是可能的，因而在本发明 的化合物以药物制剂形式应用之前无需进一步的纯化步骤以除去毒理 学不能接受的试剂，例如高浓度的有机溶剂或其它毒理学不能接受的 助剂。

本发明特别优选地还涉及药物制剂，其包含以沉淀的非晶体、沉 淀的晶体形式或以溶解的或混悬的形式的至少一种本发明的化合物、 和任选的赋形剂和/或助剂和/或其它药物活性化合物。

本发明的化合物优选地使得能够制备高浓度制剂，而不出现不利 的、不期望的本发明的化合物聚集。因此，可借助本发明的化合物与 水性溶剂或在水性介质中制备具有高活性成分含量的即用溶液。

还可将该化合物和/或其生理学可接受的盐和溶剂合物冻干，且所 得冻干物可例如用于制备注射制剂。

水性制剂可通过将本发明的化合物溶解或混悬于水溶液中和任选 地加入助剂来制备。为此目的，有利地将所定义体积的储备溶液加入 到含所定义浓度的本发明化合物的溶液或悬浮液中，其中储备溶液包 含所定义浓度的所述其它助剂，并任选地将混合物用水稀释至预先计 算的浓度。可替代的是，助剂可以固体形式加入。得到的水溶液或悬 浮液中可随即加入每种情况下所需量的储备溶液和/或水。还可将本发 明的化合物有利地直接溶解或混悬于包含所有其它助剂的溶液中。

可有利地制备包含本发明化合物的、pH为4至10、优选pH为5 至9、和渗透压度为250至350mOsmol/kg的溶液或悬浮液。因此该 药物制剂可基本上无疼痛地直接静脉内、动脉内、关节内、皮下或经 皮施用。此外，该制剂也可加入到输注溶液，例如葡萄糖溶液、等张 盐溶液或林格氏液中，这些输注溶液还可含其它活性化合物，从而也 能够施用相对大量的活性化合物。

本发明的药物制剂也可包含多个本发明化合物的混合物。

本发明的制剂为生理学上耐受良好，易于制备，可精确计量并且 优选地整个存贮和运输过程中和在多重冻融过程中就试验、分解产物 和聚集而言是稳定的。它们优选地在冰箱温度(2-8℃)下和在室温 (23-27℃)下和60％相对大气湿度(R.H.)稳定贮存至少3个月至两 年的时间。

例如，本发明的化合物可通过干燥以稳定的方式贮存且必要时通 过溶解或混悬转变为即用药物制剂。可能的干燥方法是例如，不局限 于这些实例，氮气干燥、真空烘干、冷冻干燥、用有机溶剂洗涤并随 后风干、液体床干燥、流化床干燥、喷雾干燥、滚筒干燥、层干燥、 在室温下风干和其它方法。

术语“有效量”表示在组织、系统、动物或人中引起生物学或医学 响应的药物或药物活性化合物的量，其是例如研究人员或医生所研究 或期望的。

此外，术语“有效量”表示与没有接受此量的相应受试者相比 较有下述结果的量：改善的，痊愈，疾病、病征、疾病状态、难 受、紊乱的预防或消除或副作用的预防或疾病、难受或病症的发展减 轻。术语“有效量”还包括对增强正常的生理机能有效的量。

应用本发明的制剂或药物时，本发明的化合物和/或其生理学可接 受的盐和溶剂合物通常以类似于已知的、商购可得的制剂使用，优选 以每使用单位0.1至500mg、尤其是5至300mg的剂量使用。日剂量 优选为0.001至250mg/kg体重，尤其是0.01至100mg/kg体重。制剂 可每天施用一次或多次，例如每天两次、三次或四次。然而，患者的 个体剂量依赖于很多个体因素，例如依赖于所用的具体化合物的效力， 依赖于年龄、体重、总的健康状态、性别、营养，依赖于给药时间和 方法，依赖于排泄率，依赖于与其它药物的组合以及依赖于具体疾病 的严重程度和持续时间。

在有机体内药物活性化合物的摄取的测量是其生物利用度。如果 将药物活性化合物以注射溶液剂的形式静脉内递送至有机体内，其绝 对生物利用度即以无变化的形式到达系统血液即主要循环的药物的比 例为100％。在活性化合物口服给药的情况下，活性化合物通常 在制剂中为固体形式，因此必须首先溶解以便它能克服进入屏障，例 如胃肠道、口腔粘膜、鼻粘膜或皮肤尤其是角质层，或者能被身体吸 收。关于药代动力学即关于生物利用度的数据，可按类似于J.Shaffer 等，J.Pharm.Sciences,88(1999),313-318的方法获得。

进一步，此类型的药物可按药物领域中公知的方法之一来制备。

药物可适于经任何期望的适宜途径施用，例如通过口腔(包括颊 内或舌下)、直肠、肺、鼻、局部(包括颊内、舌下或透皮)、阴道 或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内以及特别是关节内)途径 施用。此类型的药物可通过药物领域中所有已知的方法来制备，例如 通过将活性化合物与赋形剂或助剂组合来制备。

肠胃外给药优选适合于本发明药物的施用。在肠胃外给药的情况 下，关节内施用为特别优选。

因此本发明还涉及用于关节内施用的本发明的药物制剂在和 /或预防选自关节病、创伤性软骨损伤、关节炎、疼痛、异常性疼痛或 痛觉过敏的生理和/或病理生理状态中的用途。

关节内施用有如下的优点：本发明的化合物可直接施用到关节软 骨附近的滑膜液中，而且还能从那里扩散到软骨组织中。因此本发明 的药物制剂也可直接注入关节间隙中，并因此可直接在预定的作用部 位发挥其作用。本发明的化合物还适于制备活性化合物缓释、持续释 放、和/或控释的肠胃外施用的药物。因此它们还适于制备长效制剂， 这对患者是有利的，因为只需要在相对大的时间间隔施用。

适于肠胃外给药的药物，包括含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶 质(通过这些试剂使得制剂与受的接受者的血液或滑膜液等张) 的水性和非水性无菌注射溶液剂；以及可包含混悬介质和增稠剂的水 性和非水性灭菌混悬剂。所述制剂可在单剂量或多剂量容器(例如密 封的安瓿和小瓶)中递送，和以冷冻干燥(冻干)状态贮存，使得只 需要在临用前立即加入无菌载体液体，例如注射用水。按照配方制备 的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。

本发明的化合物也可以脂质体递送系统的形式(例如，小单层囊 泡、大单层囊泡和多层囊泡)施用。脂质体可由各种磷脂，例如胆固 醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。

本发明的化合物还可与作为靶向药物赋形剂的可溶性聚合物偶 联。此类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基 丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基门冬酰胺苯酚或被棕榈酰基基团取代的聚氧 乙烯聚赖氨酸。本发明的化合物可进一步与适于实现药物缓释的可生 物降解的聚合物偶联，其中可生物降解的聚合物为例如聚乳酸，聚ε- 己内酯，聚，聚原酸酯，聚缩醛，聚二羟基吡喃，聚氰基丙 烯酸酯，聚乳酸-乙醇酸共聚物，聚合物如右旋糖酐和甲基丙烯酸酯之 间的轭合物，聚磷酸酯，各种多糖和聚胺和聚-ε-己内酯，白蛋白，壳 聚糖，胶原蛋白或改性明胶和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。

适合于经肠施用(口腔或直肠)的尤其是片剂、糖衣片、胶囊、糖 浆剂、汁液、滴剂或栓剂，适合于局部应用的是软膏、霜剂、糊剂、 洗剂、凝胶剂、喷雾剂、泡沫剂、气雾剂、溶液(例如在醇如乙醇或 异丙醇、乙腈、DMF、二甲基乙酰胺、1,2-丙二醇或它们相互和/或与 水的混合物中的溶液)或粉末。脂质体制剂也特别适合于局部应用。

在配制得到软膏的情况下，活性化合物可与石蜡霜基或与水混溶 的霜基一起使用。作为替代，活性化合物可与水包油霜基或与油包水 基质一起配制成霜剂。

适应于透皮施用的药物可作为独立的贴剂用于与接受者的表皮长 时间、密切接触给药。因此例如贴剂中的活性化合物可借助离子电渗 递送，如Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中一般性描述。

不言而喻，除上面特别提及的组分之外，根据药物制剂的特定类 型本发明的药物还可包含现有技术中其它常用试剂。

本发明还涉及由下列分开的包装构成的试剂盒

a)有效量的式I化合物和/或其生理学可接受的盐、衍生物、溶 剂合物、前药和立体异构体，包括它们以所有比例的混合物，和

b)有效量的其它药物活性化合物。

所述试剂盒包括适宜的容器，如盒子或纸盒，单独的瓶子、袋或 安瓿。所述试剂盒例如可包含分开的安瓿，每个安瓿装有溶解或冻干 形式的有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、衍生物、溶剂 合物、前药和立体异构体(包括它们以所有比例的混合物)、和有效 量的其它药物活性化合物。

此外，本发明的药物可在某些已知的中使用以提供累加或协 同作用和/或可使用以恢复某些当前的效力。

除本发明的化合物之外，本发明的药物制剂还可包含其它药物活 性化合物，例如用于关节病的其它药物活性化合物，其它组织蛋 白酶D抑制剂，NSAIDS，Cox-2抑制剂，糖皮质激素，透明质酸， 硫唑嘌呤，甲氨蝶呤，抗CAM抗体，例如抗ICAM-1抗体，FGF-18。 为所提及的其它疾病，除本发明的化合物之外，本发明的药物制 剂还可包含在其中本领域技术人员已知的其它药物活性化合物。

本文中公开的癌症可以用本发明的化合物或与手术、辐 射或化疗联合的形式进行。此类型的化疗可包括使用以下类别的抗肿 瘤活性化合物中的一种或多种活性化合物：

(i)抗增殖/抗肿瘤/破坏DNA的活性化合物及其组合，其用于内 科肿瘤学，如烷基化活性化合物(例如顺铂，parboplatin，环磷酰胺， 氮芥，美法仑，苯丁酸氮芥，白消安和亚类)；抗代谢药(例 如抗叶酸剂如氟嘧啶类如5-氟尿嘧啶和替加氟，雷替曲塞，甲氨喋呤， 阿糖胞苷，羟基脲和吉西他滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类抗生素， 如阿霉素，博来霉素，多柔比星，道诺霉素，表柔比星，伊达比星， 丝裂霉素-C，更生霉素和普卡霉素)；抗有丝分裂的活性化合物(例 如长春花生物碱类，如长春新碱，长春碱，长春地辛和长春瑞滨,和紫 杉烷类，如紫杉酚和泰索帝)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素 类，如依托泊苷和替尼泊苷，安吖啶，托泊替康，伊立替康和喜树碱) 和细胞分化活性化合物(例如全-反式-视黄酸，13-顺式-视黄酸和芬维 A胺)；

(ii)抑制细胞的活性化合物，如抗雌激素药(例如他莫昔芬，托 瑞米芬，雷洛昔芬，屈洛昔芬和iodoxyfene)，雌激素受体调节剂(例 如氟维司)，抗雄激素药(例如比卡鲁胺，氟他胺，尼鲁米特和醋 酸环丙孕酮)，LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林，亮丙 瑞林和布舍瑞林)，孕酮类(例如醋酸甲地孕酮)，芳香酶抑制剂(例 如阿那曲唑，来曲唑，vorazole和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂， 如finasteride；

(iii)抑制癌症侵入的活性化合物(例如金属蛋白酶抑制剂，如 marimastat，和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能的抑制剂)；

(iv)生长因子功能的抑制剂，例如生长因子抗体，生长因子受体 抗体，例如抗erbb2抗体曲妥珠单抗[Herceptin^TM]和抗erbbl抗体西 妥昔单抗[C225])，法尼基转移酶抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸 /苏氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子族的抑制剂(例如EGFR族酪 氨酸激酶抑制剂，如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基) 喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲 氧乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰胺基-N-(3- 氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033)，例如血小 板源性生长因子族的抑制剂和，例如，肝细胞生长因子族的抑制剂；

(v)抗血管生成的活性化合物，如抑制血管内皮生长因子作用的 那些(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐珠单抗[Avastin^TM]，已 经在国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO  98/13354中公布的化合物)和通过另一种机制起作用的化合物(例如利 诺胺，整联蛋白αvβ3功能的抑制剂和血管抑制素类)；

(vi)血管破坏剂，如combretastatin A4和已经在国际专利申请 WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO  02/04434和WO 02/08213中公布的化合物；

(vii)反义，例如针对上面提及的靶标的那些，如ISIS 2503， 抗Ras反义引物；

(viii)基因方法，包括，例如，异常的、修饰的基因如异常的 p53或异常的BRCA1或BRCA2的替换的方法，GDEPT方法(基因导 向酶前药)，如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的 那些，和提高患者对化疗或放疗的耐受性的方法，如耐多药；和

(ix)免疫方法，包括，例如，用于增加患者肿瘤细胞免疫原 性的体外和体内方法，如用细胞因子如白细胞介素2、白细胞介素4 或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T细胞无反应性的方法， 使用转染的免疫细胞如细胞因子-转染的树突细胞的方法，应用细胞因 子-转染的肿瘤细胞的方法和应用抗遗传型抗体的方法。

表1中的药物可优选但不排他地与式1化合物联用。

即使没有其它实施方案，也可以设想本领域技术人员能在最宽的 范围内应用上面的描述。因此优选的实施方案应当仅仅被认为是描述 公开的内容，无论如何绝不是起限制作用。

因此下列实施例旨在解释本发明而不是限制本发明。除非另有所 指，百分比数据表示重量百分比。所有温度以摄氏温度表示。“常规的 精制”：如有必要加入水，如有必要根据最终产品的组成将pH值调至 2至10之间，混合物用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，相分离，有机相经 硫酸钠干燥，过滤并蒸干，并将产物在硅胶上通过谱纯化和/或通过 结晶纯化。

硅胶上的Rf值；质谱法：EI(电子碰撞电离)：M⁺，FAB(快 原子轰击)：(M+H)⁺，THF(四氢呋喃)，NMP(N-甲基吡咯烷酮)， DMSO(二甲亚砜)，EA(乙酸乙酯)，MeOH(甲醇)，TLC(薄 层谱法)

下列物质已经被合成和表征。然而，这些物质的制备和表征也可 由本领域技术人员按其它方法进行。

实施例1：示例性的式I化合物

为避免任何疑问，在所有本发明化合物的化学名称与本发明化合 物的化学结构的描述错误地不相符的情况下，本发明的化合物由化学 结构的描述清楚地定义。

物质信号在Agilent 1200仪器上测定：

Chromolith Speed Rod RP 18e 50-4.6mm LCMS；极性方法， 2.4ml/min，220nm，缓冲液A 0.05％的HCOOH/H2O，缓冲液B 0.04％的HCOOH/ACN，0.0-2.8min 4％-100％的缓冲液B； 2.8-3.3min 100％的缓冲液B 3.3-3.4min 100％-4％的缓冲液B

保留时间在Merck-Hitachi LaChrom仪器上测定：

Chromolith Speed Rod RP18e-100-4.6HPLC；5min 4ml 215nm； 4ml/min,215nm,缓冲液A 0.05％的TFA/H2O，缓冲液B 0.04％的 TFA/ACN，0.0-0.2min 5％的缓冲液B；0.2-5.0min 5％-100％的缓冲 液B；5.0-5.5min 99％-5％的缓冲液B

NMR数据

实施例2：本发明化合物的制备

本发明的化合物可例如通过本领域技术人员已知的方法按下述合 成顺序来制备。所述实施例是描述合成，但不是将后者限制到实施例。

合成顺序∶

以带保护基的羟基他汀结构单元A为起始原料，通过本领域技术 人员已知的酰胺偶联方法(例如，DAPECI偶联)，以相应的胺、氨 基酸衍生物、二肽、三肽或四肽(典型地在C末端上带保护基)构建 新肽键。

在第二步中，BOC保护基在适宜的条件下(例如通过HCl/二噁 烷或TFA/DCM)裂解，并将所得到的结构单元与相应的酸、氨基酸 衍生物、二肽、三肽或四肽(典型地各自在N末端上带保护基)偶联。 在此步骤中特别优选适于抑制外消旋化的偶联试剂，例如HATU或类 似的试剂。在进一步的步骤中，其它保护基团可随即脱除，例如Z- 保护基团或苄基酯可在Pd/C的存在下被水解为游离酸。

类似于上面描述的制备方法，可例如在不将适用范围限制于这些 结构单元的情况下制备以下化合物。

实施例3：(A8)：(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基 -2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰 基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸的制备

步骤1：

将5.000g的(3S,4S)-4-叔丁氧羰基氨基-3-羟基-5-苯基戊酸、6.364 g的(S)-2-((2S,3S)-2-氨基-3-甲基戊酰基氨基)-3-甲基丁酸苄基酯(以盐 酸盐的形式)、1.092g的1-羟基苯并三唑水合物、3.664ml的4-甲基 吗啉和3.099g的N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐 (DAPECI)在烧瓶中在冰水冷却下溶解于约50ml的DMF中并搅拌过 夜。将反应混合物倒入饱和的碳酸氢钠溶液中并搅拌15min。将生成 的沉淀通过抽吸滤出、溶解于DCM中并重复洗涤，首先用碳酸氢盐 溶液、然后用稀甲酸溶液和水洗涤。除去溶剂，将残留物收纳在DMF 中，将溶液倒入柠檬酸缓冲液中，并将生成的沉淀通过抽吸滤出。再 沉淀并干燥两次得到7.380g的白固体状的 (S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-叔丁氧羰基氨基-3-羟基-5-苯基戊酰基氨 基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯。(产率74.6％、含量＞99％)。 MS-FAB(M+H⁺-BOC)＝512.7R_f(极性方法)：2.66min。

步骤2：

将7.380g的(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-叔丁氧羰基氨基-3-羟基 -5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯在烧瓶中 在冰水冷却下溶解于15ml的HCl在二噁烷中的溶液(4M)中并于室温 搅拌5h。将过量的HCl在室内真空中除去，在真空中除去溶剂，并 将残留物冻干过夜。

为了除去二噁烷残留物，将残留物反复地与庚烷一同研磨，通过 抽吸滤出并干燥，得到6.420g的白固体状的 (S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊 酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯。(产率97％，含量＞99％)。MS-FAB (M+H⁺)＝512.3R_f(极性方法)：1.76min。

步骤3：

将3.500g的(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酰 基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯(以盐酸盐的形式)、 2.199g的(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁 酸和2.162ml的乙基二异丙基胺在烧瓶中在冰冷却下溶解于约30ml 的DMF中，加入2.659g的HATU(C10H15N6O*PF6)，并将混合物 在室温下搅拌过夜。将黄反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液中并搅 拌15min。将生成的沉淀通过抽吸滤出，与水和与稀甲酸一同研磨， 再次通过抽吸滤出，用水洗涤并干燥。将残留物在超声浴中用甲醇处 理并通过抽吸滤出。将此操作再重复两次，得到3.400g的白固体状 的(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲 基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基 氨基]-3-甲基丁酸苄基酯。(产率65％)。MS-FAB(M+H⁺)＝809.0 R_f(极性方法)：2.71min。

表2中的化合物1-3、7、10-13、16、18、19、21-23、32、34、 35例如可类似于此步骤来制备(该方法不限于这些化合物)。

步骤4：

将3.400g的(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基 -2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰 基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸苄基酯在容器中在1.300g的 Pd/C(5％的Pd，潮湿)的存在下在70ml的THF中于室温在大气压 下氢化，直至该起始原料完全反应(过夜)。将反应混合物用水和THF 稀释并通过抽吸滤出以除去催化剂。将滤液在真空中蒸发并冻干以完 全除去水。将残留物在超声浴中用庚烷处理，通过抽吸滤出并干燥。 用二噁烷然后用MTBE进行类似的处理，得到2.45g的白粉末形式 的(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲 基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基 氨基]-3-甲基丁酸(产率82％)。MS-FAB(M+H⁺)＝718.9 R_f(极性方 法)：2.27min。

表2中的化合物4-6、8、9、14、15、17、20、24-31、33、36-40 可类似于此步骤来制备。

实施例4：(A41)：(S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-羟基-4-{(S)-3-甲基 -2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰 基氨基)-3-甲基戊酰基氨基]-3-甲基丁酸的制备

将300mg的(S)-2-{(2S,3S)-2-[(3S,4S)-4-((S)-2-{2-[3-(2-叔丁氧基羰 基氨基乙氧基)苯基]乙酰氨基}-3-甲基-1-(S)-氧代戊基氨基)-3-羟基-5- 苯基戊酰基氨基]-3-甲基戊酰基氨基}-3-甲基丁酸在烧瓶中在冰冷却 下用5ml的HCl在二噁烷中的溶液(4M)中并在室温下搅拌5h。将过 量的HCl在室内真空中除去，在真空中除去溶剂，并将残留物冻干过 夜。盐酸盐的产量：定量的。为了制备游离碱，将一小部分的残留物 溶解于DMF中，并将此溶液加入到10％碳酸氢钠溶液中。将生成的 沉淀通过抽吸滤出，用水洗涤并干燥，得到白固体状的 (S)-2-{(2S,3S)-2-[(3S,4S)-4-((S)-2-{2-[3-(2-氨基乙氧基)苯基]乙酰氨 基}-3-甲基-1-(S)-氧代戊基氨基)-3-羟基-5-苯基戊酰基氨基]-3-甲基戊 酰基氨基}-3-甲基丁酸。

MS-FAB(M+H⁺)＝712.9 R_f(极性方法)：1.70min。

如果存在多个垂直的保护基团，保护基团裂解的顺序也可颠倒。

方法(HPLC-MS)：

Chromolith Speed Rod RP 18e 50-4.6mm LCMS；极性方法 2.4ml/min,220nm,缓冲液A 0.05％的HCOOH/H2O，缓冲B 0.04％ 的HCOOH/ACN，0.0-2.8 min 4％-100％的缓冲液B；2.8-3.3min 100％的缓冲液B 3.3-3.4min 100％-4％的缓冲液B

缩写：

DCM＝二氯甲烷

DMA＝二甲基乙酰胺

DMF＝二甲基甲酰胺

EA＝乙酸乙酯

MTBE＝甲基叔丁基醚

PE＝石油醚

RT＝室温

TFA＝三氟乙酸

实施例4：鉴定组织蛋白酶D抑制剂的体外荧光试验

为了鉴定组织蛋白酶D调节剂的活性，用载有荧光基团(MCA＝(7- 甲氧基香豆素-4-基)乙酰基)的合成肽在Greiner 384-孔nb微量滴定 板中进行连续的酶试验，该试验可通过从在相同分子上的Dpn(2,4 二硝基苯基)基团的能量转移而中止。肽类底物被组织蛋白酶D裂解 导致荧光强度增强。为了测定物质的效能，将在该物质的存在下荧光 强度的时间-依赖性增强与在缺少物质下时间-依赖性的荧光增强比 较。所用的参比物是胃酶抑素A(Sigma-Aldrich)。所用的底物是 MCA-GKPILFFRLK(Dnp)d-R-NH₂(Enzo Life Sciences,)。 使用的酶是从人肝脏中分离出来的终浓度为1.4nM的组织蛋白酶D (Sigma-Aldrich)。在100mM醋酸钠缓冲液，1.25％(v/v)的DMSO， 0.25％(w/v)的Chaps，pH5.5中进行试验。将2μl的具有连续稀释的物 质浓度的每种物质溶液各自加入到4μl的组织蛋白酶D溶液中并在室 温下温育10min。通过添加2μl的底物溶液(终浓度5μM)开始反应。 在采用Envision多标签读数器(multilabel reader)(Perkin Elmer) 进行起点荧光测量(激发波长340nm/发射波长450nm)之后，将反 应在室温下温育60min。随后通过测定在450nm(激发波长340nm) 下荧光强度的增强来测量在反应时间期间裂解的肽片段的量。

实施例1的表2中所有化合物具有低于100nM的IC₅₀值(参见 表2，实施例1，倒数第二栏)。

实施例5：软骨外植试验

为了研究潜在的组织蛋白酶D抑制剂对软骨降解的影响，使用pH 诱导的基于牛外植体的模型。在此将培养外植体的培养基的pH与关 节病膝盖的病理生理pH匹配。此pH为pH5.5。在该体外模型中，随 后对潜在的组织蛋白酶D抑制剂关于其停止软骨降解过程的作用进行 研究。如果软骨破坏，氨基葡聚糖(GAGs)释放到细胞培养物上清 液中。可借助于DMMB(二甲基亚甲蓝盐酸盐)定量测定释放的GAGs 的量。如果采用二甲基亚甲蓝盐酸盐检测硫酸化的GAGs时利用在 633nm下的吸收降低。由于在非常低的GAG浓度下也可进行工作， 因而即使用GAG长时间温育DMMB之后染料/GAG复合物也不沉淀 析出，这在其它测量方法中有时只在短时间之后就发生了。为了测定 浓度，同时记录硫酸软骨素的校准线。GAG值可用于计算IC₅₀值， 即物质显示出其50％的作用时的浓度。

溶液：

温育介质，pH7.4：不含FBS的DMEM，添加1％的Pen/Strep 和30μg/ml的抗坏血酸，该培养基不贮存。

温育介质，pH5.5：

不含FBS的DMEM，通过添加MES调节pH并利用pH计监测， 添加1％的Pen/Strep和30μg/ml的抗坏血酸。

用于GAG测量的溶液：

DMMB染溶液(V＝500ml)：

将8mg的DMMB(二甲基亚甲蓝)溶解于2.5ml的乙醇+1g的 甲酸钠+1ml的甲酸中，用重蒸馏水补足至500ml。

温育介质：FBS(不含FBS的培养基)

硫酸软骨素溶液(标准曲线)

制备下述浓度的标准溶液：50μg/ml；25μg/ml；12.5μg/ml； 6.25μg/ml；3.125μg/ml；1.56μg/ml；0.78μg/ml和空白对照培养基。 在还进行实验的介质中制备标准溶液。

1.)步骤：pH-诱导的牛外植体的软骨降解

首先制备牛外植体。在96多孔板中进行软骨降解的诱导。每个孔 培养一个外植体。各自加入200μl的不含FBS的DMEM(温育介质 pH5.5)+30μg/ml的抗坏血酸。因此将阴性对照的外植体(n＝4)在pH7.4 下(不含FBS)温育。该对照不包括在数据的计算中，而是确保pH值 变化对GAG的释放具有期望的作用。在此点下，加入待测的物质。 不进行外植体的预温育。将外植体于培养箱中在37℃和7.5％CO₂下 用相应的物质培养3天。

2.)温育步骤

为了研究组织蛋白酶D抑制剂对GAG(葡糖胺聚糖)释放的影 响，使用期望浓度的物质并培养3天。在第一实验中将待测化合物在 1μM的浓度下和在1％的DMSO中进行试验。在下一个实验中将对 GAG释放产生>50％影响(这相当于在Assay Explorer中<50％的对 照)的物质在100nM下和在1％的DMSO中进行试验。将在这些条 件下对GAG释放产生>50％影响(这相当于在Assay Explorer中<50％ 的对照)的物质进行浓度/效果关系试验。在此在下列浓度下对化合物 进行研究：30μm，10μm，3μm，1μm，0.3μm，0.1μm，0.03μm，0.01μm。

所用的阳性对照为0.01μM浓度的胃酶抑素A。试验窗口(assay  window)定义如下：对照(pH5.5)，定义为0％效果，而对照 pH5.5+0.01μM胃酶抑素A，定义为100％效果。温育3天后，收集细 胞培养物上清液并在-20℃下贮存或直接测量。通过光度计测量释放的 GAG的量。

报告1μM和100nM下各物质基于阳性对照(pH5.5+0.01μM胃 酶抑素A)和阴性对照(pH5.5)的％的效果(1个数值)。该数值代 表4次重复试验的平均值。在浓度/效果关系的测定中，将IC₅₀值报告 到数据库中(Assay Explorer)。

4.)测量

细胞培养物上清液(200μl)要么直接测量要么在-20℃下贮存。 为确保GAG浓度(上清液中GAG的μg/ml)的精确测定，测定值必 须位于标准曲线的线性区域内。为确保这样，例行引入不同的稀释(1/5, 1/10,1/20,1/40)。以培养基制备稀释液并自动引入(Hamilton)到 384-孔的多孔板(15μl)中。同样自动加入60μl的DMMB溶液(或 使用多通道吸量管)。发生快速的显反应，随后使用读板仪(例如 Envision)在633nm下测量。根据存在的样品的量，进行至少一次双 重测定。

由MTP读数器以csv或xls文件的形式提供数据并以基于该格式 (xls)的原始数据形式贮存或用于计算特定化合物的百分比效果。

5.)质量控制

作为诱导pH诱导的软骨降解的对照，将4个外植体在pH7.4下 温育。这相当于软骨的生理学pH，因此这里可预见到对GAG的释放 没有影响。因此这些GAG值(上清液的μg/ml)总是显著低于在pH5.5 下温育的GAG值。

其它对照为胃酶抑素对照(pH5.5+0.01μM胃酶抑素A)，既起 实验校验的作用，但对于试验窗口的定义也同样重要。该物质非特异 性地阻断大多数蛋白酶的活性，因而可测定化合物可能的效果的极限 值。

(1)Klompmakers,A.& Hendriks,T.(1986)Anal.Biochem.153, 80-84,Spektrophotometrischer Nachweis für sulfatierte  Glycosaminoglycane(硫酸化葡糖胺聚糖的分光光度测定)。

(2)Groves,P.J.等(1997)Anal.Biochem.245,247-248 Polyvinylalkohol-stabilisierte Bindung von sulfatierten GAGs an  Dimethylmethylenblau(以聚乙烯醇稳定的硫酸化GAGs与二甲基亚 甲蓝的结合)。

6.)结果

采用该试验测定实施例1表2中的一些化合物的IC₅₀值并显示在 实施例1表2的最后一栏中。

实施例6：动物体内抗痛觉过敏作用的研究

为了诱发炎症反应，将角叉菜胶溶液(CAR，1％，50μl)在一侧 关节内注入大鼠膝关节内。未注射的一侧用于对照的目的。每组用六 只动物。利用螺旋测微器(膝关节上的中间侧面)测定阈值，并通过 Hargreaves方法(Hargreaves等，1988)利用定向的红外线光源在脚 掌上测量热痛觉过敏。由于炎症的位置(膝关节)与测量的位置(脚 掌)不同，本文中使用术语继发性热痛觉过敏，其机制对于发现有效 的镇痛药有重大意义。

热痛觉过敏的实验描述(Hargreaves试验)：将实验动物置入在 石英片上的塑料室中。试验前，首先给实验动物约5-15分钟的时间使 其自身熟悉环境。一旦实验动物在熟悉阶段之后(探究阶段结束)不 再那么频繁移动，就将红外线光源(其焦点在玻璃钮扣平面上)直接 置于后爪下面使其受刺激。然后通过按电钮开始实验操作：红外光导 致后爪的皮肤温度升高。当已经达到预先设定的最高温度时通过实验 动物抬起后爪(作为达到痛觉阈的表达)或通过自动切断红外线光源 终止实验。只要实验动物坐着不动就记录爪子反射的光。爪子的撤退 会中断该反射，之后切断红外线光源并记录从接通到切断的时间。校 准仪器使得红外线光源在10s内升高皮肤温度至约45摄氏温度 (Hargreaves等，1988)。由Ugo Basile制造的用于此目的的仪器用 于该试验。

CAR购自Sigma-Aldrich。在CAR前30分钟进行关节内施用特 异性的组织蛋白酶D抑制剂，化合物23(实施例1，表2， (S)-2-[(2S,3S)-2-((3S,4S)-3-氨基-4-{(S)-3-甲基-2-[(S)-4-甲基-2-(3-甲基 丁酰氨基)戊酰基氨基]丁酰氨基}-5-苯基戊酰基氨基)-3-甲基戊酰基氨 基]-3-甲基丁酸)。10μg/关节的量的曲安西龙(TAC)用作阳性对照， 且溶剂(载体)用作阴性对照。痛觉过敏以发炎和未发炎的爪子撤退 次数的差别提供。

结果：TAC能降低CAR诱导的肿胀，但特异性组织蛋白酶D抑 制剂不降低CAR诱导的肿胀。相反，特异性组织蛋白酶D抑制剂能 以剂量的函数降低热痛觉过敏的程度(参见附图2)。

评价：已经显示化合物23起抗痛觉过敏的作用。可以假定该结论， 因为化合物23显示出对炎性肿胀没有影响因而对痛觉过敏触发没有 影响。因此可以设想化合物23在人体内产生疼痛减轻作用。

实施例7：本发明的化合物在牛滑膜液中的稳定性

1.)牛滑膜液的提取

在牛外植体(用于扩散小室或其它试验)的制备中，使用奶牛蹄 (掌骨关节)或奶牛膝。滑膜液可由两种关节获得。为此目的，采用 10ml注射器和导管将滑膜液小心地从开放性关节中取出并转入预备 的2ml Eppendorf容器中。根据动物(奶牛许可证可获得)标记 Eppendorf容器。本发明中必须确保在关节的制备过程中血液不进入 关节间隙。如果是这种情况，滑膜液将变成微红，因而必须弃去。 滑膜液基本上非常粘且透明，颜为淡黄。切除以及滑膜液的目测 分析(macroscopic analysis)都记录在案。

2.)在SF中的物质稳定性试验的批

为了检查个别化合物的稳定性，将四种不同的牛滑膜液混于一池。 为此目的，使用每SF约1ml。在5ml玻璃容器中直接调配该混合物。 将SF充分地、但小心地混合。不应当有气泡或泡沫生成。为此目的， 在最低的速度下利用涡流仪。在1μM的初浓度下(除非另有要求)试 验待测化合物。在加入物质后，再次将该批充分地且小心地混合。为 了目视监测，将所有SF批次拍照，并将相应实验的图片编入eLabBio 文档内。附图1作为例子显示此类型的照片文档。将这些批次在保温 箱中在37℃下和在7.5％CO₂中温育48h。

3.)取样

取样在预先确定的时间进行(除非另有要求，参见下面)。将200μl 的SF从每个时间的混合物中取出并直接转入到0.5ml“低结合的 (low-binding)”Eppendorf容器中。为了使物质与容器塑料的相互作 用最小化使用“低结合的”Eppendorf容器。已将200μl的乙腈引入 Eppendorf容器中，使此后形成SF的1+1混合物。这简化了随后的 分析，但蛋白质沉淀可能在加入SF之后立即发生。对该方案应该注 意这一点。在加入物质之后立即采取0h样品。这对应于稳定性计算中 的100％值。理想地，这里所采用的浓度应当恢复。样品可在-20℃下 冷冻。

· 0h

· 6h

· 24h

· 48h

所用的阴性对照为不含物质的SF。所用的阳性对照为含1μM物 质的SF。这对应于0h值因而为100％稳定性。

将样品于-20℃下贮存在“低结合的”Eppendorf容器内。随后定量 测量样品。

4.)数据处理

在图中画出所测得的浓度(ng/ml)对时间的曲线(GraphPad )。在此测定物质的百分比稳定性。所使用的100％值为在时 间0h时SF中的初值。数据以各自的实验编号存放在eLabBio中并 报告在MSR数据库中(在相应的温育时间之后以百分比稳定性报告)。

5.)结果

所有测量的化合物保持稳定(参见实施例1中的表2)。

实施例8：鉴定肾素抑制活性的体外荧光试验

为了鉴定肾素调节剂的活性，用载有荧光基团Edans(＝5-(氨基 乙基)氨基萘磺酸盐)的合成肽在Greiner 384-孔微量滴定板中进行连 续的酶试验，该试验可通过从在相同分子上的Dabcyl(4’-二甲基氨基 偶氮苯-4-甲酸酯)基团的能量转移而中止。肽类底物被肾素裂解导致荧 光强度增强。为了测定物质的效能，将在该物质的存在下荧光强度的 时间依赖性增强与在缺少物质下时间依赖性的荧光增强比较。所用的 参比物为肾素抑制剂2(Z-Arg-Arg-Pro-Phe-His-Sta-Ile-His  N-Boc-Lys甲基酯Z)(Sigma-Aldrich)。所用的底物为肾素FRET 底物I(DABCYL-g-Abu-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Val-Ile -His-Thr-EDANS)(Anaspec,Fremont CA)。所用的酶是终浓度 为10nM的重组人肾素(Proteos,Kalamazoo,MI)。试验在50mM  Mops缓冲液，1.5％(v/v)的DMSO，0.1％(w/v)的pH 7.2， 0.5％(w/v)的BSA中进行。将2μl的具有连续稀释的物质浓度的每种 物质溶液各自加入到4μl的肾素溶液中并在室温下温育15min。通过 添加4μl的底物溶液(终浓度5μM)开始反应。在采用Envision多标 签读数器(Perkin Elmer)进行起点荧光测量(激发波长340nm/发射 波长450nm)之后，将反应于37℃温育60min。随后通过测定在495nm (激发波长340nm)下荧光强度的增强来测量在反应时间期间裂解的 肽片段的量。

结果：所有测得的化合物具有肾素选择性>30μM的IC₅₀(参见实 施例1中的表2)。

实施例9：注射小瓶

用2N盐酸将100g的式I化合物和5g磷酸氢二钠在3l重蒸馏水 中的溶液调至pH6.5，在无菌条件下过滤，转移到注射小瓶中，在无 菌条件下冻干并在无菌条件下密封。每个注射小瓶含5mg的式I化合 物。

实施例10：溶液

溶液由1g的式I化合物、9.38g的NaH₂PO₄ 2H₂O、28.48g的 Na₂HPO₄·12H₂O和0.1g的苯扎氯铵在940ml的重蒸馏水中制备。将 pH调至6.8，将溶液补足至1l并通过辐射杀菌。此溶液可以以滴眼剂 的形式使用。

实施例11：软膏

将500mg的式I化合物与99.5g的凡士林在无菌条件下混合。

实施例12：安瓿

将1kg的式I化合物在60l重蒸馏水中的溶液在无菌条件下过滤， 转入安瓿中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。每个安瓿含10 mg的式I化合物。