一种含柚皮苷的组合物及其在制备含柚皮苷的饮料中的应用的制作方法

1.本发明涉及天然产物以及食品技术领域，具体涉及一种含柚皮苷的组合物及其在制备含柚皮苷的饮料中的应用。

背景技术：

2.柚皮苷即柚皮甙，是一种黄酮类化合物；具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、镇痛、降血压等活性，能降血胆固醇、减少血栓的形成，改善局部微循环和营养供给，可用于生产防治心脑血管疾病。
3.虽然柚皮苷具有多方面的药理活性；但是将其作为单一的活性成分使用时，各方面的作用还有待提高；比如其在降血糖以及抗病毒方面的作用还有待加强。
4.中国发明专利cn113133512 a公开了一种含柚皮苷的饮料及其制备方法，其是以柚皮苷为活性添加成分制备而成。但是其仅仅是以含柚皮苷作为活性成分，虽然可以使得制备得到的含柚皮苷的饮料具有一定的保健作用；但是其在辅助降血糖以及抗病毒方面的作用还有待加强。

技术实现要素：

5.为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种含柚皮苷的组合物。所述的含柚皮苷的组合物由柚皮苷和黄精酸枣仁提取物组合而成，其具有较好的降血糖作用。
6.本发明所要解决上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
7.一种含柚皮苷的组合物，其包含柚皮苷以及黄精酸枣仁提取物；
8.其中，柚皮苷和黄精酸枣仁提取物的重量比为1～2:1；
9.所述的黄精酸枣仁取物是以黄精和酸枣仁为原料提取得到。
10.发明人在研究中发现，将柚皮苷和黄精酸枣仁提取物组合后得到的组合物，其具有较好的降血糖作用。
11.此外，发明人在实验筛选中还惊奇的发现，将柚皮苷和黄精酸枣仁提取物组合后得到的组合物，其还具备抗呼吸道合胞病毒作用。
12.优选地，所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
13.取黄精和酸枣仁，用有机溶剂进行提取，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液去除有机溶剂并干燥后即得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，所述的黄精酸枣仁提取物。
14.优选地，所述的有机溶剂是由体积比为3～5:1的异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂。
15.优选地，黄精和酸枣仁的重量比为1～3:1～3。
16.发明人在此需要强调的是，黄精和酸枣仁的提取溶剂的选择对于提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后是否具有较好的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用起着重
要的影响。发明人在大量的实验中惊奇的发现，采用由异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用显著高于采用其它有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物。
17.优选地，所述的提取是指在50～55℃下进行加热回流1～2h。
18.优选地，有机溶剂的重量用量为黄精和酸枣仁总重量的5～10倍；
19.最优选地，有机溶剂的重量用量为黄精和酸枣仁总重量的8倍。
20.优选地，所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
21.取黄精和酸枣仁，用有机溶剂进行提取，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液去除有机溶剂并干燥后即得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
22.进一步将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上硅胶柱，先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
23.上述丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂指的是在由正庚烷和丙酮组成的正庚烷丙酮混合溶剂中丙酮的体积分数为5～8％。
24.上述丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂指的是在由正庚烷和丙酮组成的正庚烷丙酮混合溶剂中丙酮的体积分数为17～20％。
25.为了进一步提高所述的含柚皮苷的组合物的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用；发明人采用硅胶柱层析从黄精酸枣仁有机溶剂提取物进一步精制有效部位；发明人在大量的实验中惊奇的发现，在硅胶柱洗脱过程中，采用本发明所述的洗脱条件(先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱)制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，与采用由异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物相比，其降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用得到了进一步的大幅提高；具有十分优异的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用。
26.发明人在此需要强调的是，硅胶柱的洗脱条件至关重要，硅胶柱的洗脱条件选择不同，制备得到的黄精酸枣仁提取物中的有效成分的组成和含量均不相同；若硅胶柱的洗脱条件选择不当，有可能会导致制备得到的黄精酸枣仁提取物中的具有降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用的有效成分的含量降低；这样不但不能进一步提高降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用，甚至还有可能降低。
27.由于所述的含柚皮苷的组合物具有更加显著的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用；因此，在需要获得同等效果的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用时，可以加入更少量的组合物即可实现。若加入同等用量的组合物，其具有更强的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用。
28.优选地，所述的含柚皮苷的组合物中还包含甘草提取物；
29.其中，柚皮苷和黄精酸枣仁提取物以及甘草提取物的重量比为1～2:1:2～3。
30.所述的甘草提取物通过如下方法制备得到：
31.取甘草，然后用水进行加热回流提取，提取结束后得提取液，将提取液浓缩干燥后
得甘草水提物；
32.将甘草水提物上大孔树脂柱，先用水洗脱除杂，再用体积分数为4～6％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为4～6％的乙醇水溶液洗脱下来的馏分，浓缩干燥后即得所述的甘草提取物。
33.优选地，所述的提取是指在90～100℃下进行加热回流1～2h。
34.优选地，有机溶剂的重量用量为黄精和酸枣仁总重量的8～15倍；
35.最优选地，有机溶剂的重量用量为黄精和酸枣仁总重量的12倍。
36.发明人在研究中惊奇的发现，将通过上述方法制备得到的甘草提取物与柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合后，其可以促进柚皮苷和黄精酸枣仁提取物在水中的溶解，提高所述的述的含柚皮苷的组合物在水中的溶解能力。
37.本发明还提供了一种上述含柚皮苷的组合物在制备具有降血糖和/或抗病毒作用的产品中的应用。
38.优选地，所述的病毒为呼吸道合包病毒。
39.所述的产品包括药物、保健品或食品。
40.本发明还提供了一种上述含柚皮苷的组合物在制备含柚皮苷的饮料中的应用。
41.优选地，在1000ml含柚皮苷的饮料中含柚皮苷的组合物的含量为0.5～1g。
42.优选地，所述的含柚皮苷的饮料中还含有矫味剂。
43.优选地，所述的含柚皮苷的饮料中还含有防腐剂。
44.有益效果：本发明提供了一种全新的含柚皮苷的组合物。所述的含柚皮苷的组合物由柚皮苷和黄精酸枣仁提取物组合而成；因此，将本发明所述的含柚皮苷的组合物作为有效成分制备得到的产品(如饮料、食品、药物或保健品)，不仅具有柚皮苷本身的抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、镇痛、降血压等作用；同时还具有降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用；在需要获得同等效果的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用的产品时，可以加入更少量的组合物即可实现；若加入同等用量的组合物，则具有更强的降血糖以及抗呼吸道合胞病毒作用。
具体实施方式
45.以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明并不做任何形式的限定。
46.实施例1含柚皮苷的组合物
47.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
48.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
49.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，即所述的黄精酸枣仁提取物；
50.所述的有机溶剂是由体积比为4:1的异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂。
51.实施例2含柚皮苷的组合物
52.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而
成；
53.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
54.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
55.将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上样于填充有相当于黄精酸枣仁有机溶剂提取物30倍重量的200-300目的硅胶的硅胶柱，以5bv/h的流速，先用3bv的丙酮体积分数占7％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用5bv的丙酮体积分数占19％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占19％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，浓缩去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
56.实施例3含柚皮苷的组合物
57.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为1:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
58.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
59.取重量比为3:1的黄精和酸枣仁，用5倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
60.将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上样于填充有相当于黄精酸枣仁有机溶剂提取物30倍重量的200-300目的硅胶的硅胶柱；以5bv/h的流速，先用3bv的丙酮体积分数占5％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用5bv的丙酮体积分数占17％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占17％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，浓缩去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
61.实施例4含柚皮苷的组合物
62.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为1:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
63.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
64.取重量比为1:3的黄精和酸枣仁，用10倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在50℃下进行加热回流2h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
65.将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上样于填充有相当于黄精酸枣仁有机溶剂提取物30倍重量的200-300目的硅胶的硅胶柱；以5bv/h的流速，先用3bv的丙酮体积分数占8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用5bv的丙酮体积分数占20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占20％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，浓缩去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
66.实施例5含柚皮苷的组合物
67.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1:3的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物以及甘草提取物混合而成；
68.所述的黄精酸枣仁提取物的制备方法同实施例1；
69.所述的甘草提取物通过如下方法制备得到：
70.取甘草，然后用12倍重量的水在100℃下进行加热回流提取1h，提取结束后得提取液，将提取液浓缩干燥后得甘草水提物；
71.将甘草水提物上样于填充有相当于甘草水提物30倍重量的d101型大孔树脂的大孔树脂柱，以2bv/h的流速，先用1bv的水洗脱除杂，再用3bv的体积分数为5％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为5％的乙醇水溶液洗脱下来的馏分，浓缩干燥后即得所述的甘草提取物。
72.实施例6含柚皮苷的组合物
73.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1:3的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物以及甘草提取物混合而成；
74.所述的黄精酸枣仁提取物的制备方法同实施例2；
75.所述的甘草提取物的制备方法同实施例5。
76.对比例1含柚皮苷的组合物
77.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
78.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
79.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，即所述的黄精酸枣仁提取物；
80.所述的有机溶剂为体积分数为95％的乙醇。
81.对比例2含柚皮苷的组合物
82.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
83.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
84.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的水在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁水提取液，将黄精酸枣仁水提取液浓缩去除溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，即所述的黄精酸枣仁提取物。
85.对比例3含柚皮苷的组合物
86.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
87.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
88.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，即所述的黄精酸枣仁提取物；
89.所述的有机溶剂为异丙醇。
90.对比例4含柚皮苷的组合物
91.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
92.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
93.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下
进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，即所述的黄精酸枣仁提取物；
94.所述的有机溶剂为丙酮。
95.对比例5含柚皮苷的组合物
96.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
97.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
98.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
99.将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上样于填充有相当于黄精酸枣仁有机溶剂提取物30倍重量的200-300目的硅胶的硅胶柱，以5bv/h的流速，先用3bv的丙酮体积分数占7％的石油醚丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用5bv的丙酮体积分数占19％的石油醚丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占19％的石油醚丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，浓缩去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
100.对比例6含柚皮苷的组合物
101.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
102.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
103.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
104.将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上样于填充有相当于黄精酸枣仁有机溶剂提取物30倍重量的200-300目的硅胶的硅胶柱，以5bv/h的流速，先用3bv的正庚烷进行洗脱除杂；再用5bv的丙酮体积分数占10％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占10％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，浓缩去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
105.对比例7含柚皮苷的组合物
106.所述的含柚皮苷的组合物由重量比为2:1的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合而成；
107.所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：
108.取重量比为1:1的黄精和酸枣仁，用8倍黄精和酸枣仁总重量的有机溶剂在55℃下进行加热回流1h，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液浓缩去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；
109.将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上样于填充有相当于黄精酸枣仁有机溶剂提取物30倍重量的200-300目的硅胶的硅胶柱，以5bv/h的流速，先用3bv的丙酮体积分数占20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用5bv的丙酮体积分数占30％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占30％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，浓缩去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。
110.实验例1含柚皮苷的组合物的降血糖实验
111.取将血糖值在10mmol/l以上的糖尿病模型小鼠，进行随机分组，分为模型组和实验组，同时选取正常的小鼠作为正常组对照，每组各10只。实验组每天进行灌胃给药1次，给药剂量为100mg/(kg
·
d)；模型组和正常组灌胃等量的生理盐水。连续灌胃给药6周，取血测空腹血糖值；抽血前大鼠禁食12h；具体结果见表1。
112.本实施例实验组灌胃的样品分别为：按实施例1～2以及比例1～7制备得到的含柚皮苷的组合物。测试结果见表1。
113.表1.含柚皮苷的组合物对糖尿病小鼠空腹血糖的影响
[0114][0115]
从表1实验数据可以看出，实施例1制备得到的含柚皮苷的组合物，灌胃给药6周后对小鼠的空腹血糖显著低于模型组；这说明：将柚皮苷和本发明所述方法制备得到的黄精酸枣仁提取物组合后得到的组合物，其具有较好的降血糖作用。
[0116]
从表1实验数据可以看出，相比于模型组，对比例1～4制备得到的含柚皮苷的组合物灌胃给药6周后对小鼠的空腹血糖值的降低程度，显著小于实施例1；这说明：黄精和酸枣仁的提取溶剂的选择对于提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后是否具有较好的降血糖作用起着重要的影响。采用由异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其降血糖作用显著高于采用其它有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物。
[0117]
从表1实验数据可以看出，实施例1制备得到的含柚皮苷的组合物，灌胃给药6周后对小鼠的空腹血糖显著低于对比例3和4制备得到的含柚皮苷的组合物。这说明：采用由异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物，其能协同提高黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物的降血糖作用。
[0118]
从表1实验数据可以看出，实施例2制备得到的含柚皮苷的组合物，灌胃给药6周后对小鼠的空腹血糖进一步大幅小于实施例1；这说明：在硅胶柱洗脱过程中，采用本发明所述的洗脱条件(先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱)制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，与实施例1黄精酸枣仁有机溶剂提取物和柚皮苷组合后得到的组合物相比，其降血糖作用得到了进一步的大幅提高；具有十分优异的降血糖作用。
[0119]
从表1实验数据可以看出，对比例5和6制备得到的含柚皮苷的组合物，灌胃给药6周后对小鼠的空腹血糖与实施例1相比降低的幅度并不大，其降低幅度大幅小于实施例2；对比例7制备得到的含柚皮苷的组合物，灌胃给药6周后对小鼠的空腹血糖甚至都高于实施例1；这说明：硅胶柱的洗脱条件至关重要，硅胶柱的洗脱条件选择不同，制备得到的黄精酸枣仁提取物中的有效成分的组成和含量均不相同；若硅胶柱的洗脱条件选择不当，有可能会导致制备得到的黄精酸枣仁提取物中的具有降血糖作用的有效成分的含量降低；这样不但不能进一步提高降血糖作用，甚至还有可能降低。由此可见，只有采用本发明所述的洗脱条件(先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱)制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其降血糖作用才能得到大幅的提高，才具有十分优异的降血糖作用；在其它洗脱条件下制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其降血糖作用并不能得到大幅的提高，并不具有十分优异的降血糖作用。
[0120]
实验例2含柚皮苷的组合物的抗呼吸道合胞病毒作用
[0121]
在24孔细胞培养板中按照每孔1ml接种2
×
105cell/ml的hep-2细胞；然后在培养箱中培养(37℃，5％co2)至长成细胞单层；接着在实验组中每孔加入100pfu/ml呼吸道合胞病毒悬液100μl以及不同浓度的待测样品溶液100μl；此外还设置病毒对照组和细胞对照组；然后将各组放入培养箱中培养(37℃，5％co2)2h；培养结束后将病毒液吸弃，用pbs洗涤3次，各个孔中再加入0.5ml琼脂糖凝胶覆盖液进行覆盖，待琼脂糖凝胶凝固后，实验组没孔加入0.5ml对应浓度的待测样品溶液，病毒对照组和细胞对照组分别在每孔中加入等体积的维持液；再在培养箱中培养(37℃，5％co2)4～5d，培养结束后，加入甲醛(10％)固定一晚，然后去掉琼脂糖凝胶，用1％的结晶紫染40min，染完成后用水冲洗2培养板，晾干后统计空斑数；进一步根据空斑数计算样品的空斑抑制率，再根据空斑抑制率计算出半数抑制浓度ic50。
[0122]
各实验组的ic50值见表2，各实验组测试的样品分别为按实施例1～2以及比例1～7制备得到的含柚皮苷的组合物。
[0123]
表1.含柚皮苷的组合物抗呼吸道合胞病毒实验结果
[0124][0125]
从表1实验数据可以看出，实施例1制备得到的含柚皮苷的组合物，其对呼吸道合胞病毒的ic50值为15.5μg/ml；这说明：将柚皮苷和本发明所述方法制备得到的黄精酸枣仁提取物组合后得到的组合物，其具有较好的抗呼吸道合胞病毒作用。
[0126]
从表1实验数据可以看出，对比例1～4制备得到的含柚皮苷的组合物其对呼吸道合胞病毒的ic50值大幅高于实施例1；这说明：黄精和酸枣仁的提取溶剂的选择对于提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后是否具有较好的抗呼吸道合胞病毒作用起着重要的影响。采用由异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其抗呼吸道合胞病毒作用显著高于采用其它有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物。
[0127]
从表1实验数据可以看出，实施例1制备得到的含柚皮苷的组合物，其对呼吸道合胞病毒的ic50值同样大幅小于对比例3和4制备得到的含柚皮苷的组合物。这说明：采用由异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂提取得到的黄精酸枣仁提取物，其能协同提高黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物的抗呼吸道合胞病毒作用。
[0128]
从表1实验数据可以看出，实施例2制备得到的含柚皮苷的组合物，其对呼吸道合胞病毒的ic50值大幅小于实施例1；这说明：进一步采用本发明所述的硅胶柱洗脱条件(先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱)制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，与实施例1黄精酸枣仁有机溶剂提取物和柚皮苷组合后得到的组合物相比，其抗呼吸道合胞病毒作用得到了进一步的大幅提高；具有十分优异的抗呼吸道合胞病毒作用。
[0129]
从表1实验数据可以看出，对比例5和6制备得到的含柚皮苷的组合物，其对呼吸道合胞病毒的ic50值与实施例1相比降低的幅度并不大，其降低幅度大幅小于实施例2；对比例7制备得到的含柚皮苷的组合物，其对呼吸道合胞病毒的ic50值甚至都高于实施例1；这说明：硅胶柱的洗脱条件至关重要，硅胶柱的洗脱条件选择不同，制备得到的黄精酸枣仁提取物中的有效成分的组成和含量均不相同；若硅胶柱的洗脱条件选择不当，有可能会导致制备得到的黄精酸枣仁提取物中的具有抗呼吸道合胞病毒作用的有效成分的含量降低；这
样不但不能进一步提高抗呼吸道合胞病毒作用，甚至还有可能降低。由此可见，只有采用本发明所述的硅胶柱洗脱条件(先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱)制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其抗呼吸道合胞病毒作用才能得到大幅的提高，才具有十分优异的抗呼吸道合胞病毒作用；在其它硅胶柱洗脱条件下制备得到的黄精酸枣仁提取物和柚皮苷组合后得到的组合物，其抗呼吸道合胞病毒作用并不能得到大幅的提高，并不具有十分优异的抗呼吸道合胞病毒作用。
[0130]
实验例3溶解性实验
[0131]
分别将1g实施例1以及实施例5和6制备得到的含柚皮苷的组合物加入到烧杯中，接着加入200ml的水中，搅拌均匀，放置24h后观察是否有沉淀产生；结果见表3。
[0132]
表3.含柚皮苷的组合物溶解性实验结果
[0133][0134]
由表3实验结果可以看出，实施例1制备得到的柚皮苷和黄精酸枣仁提取物组成的含柚皮苷的组合物，其在水中的溶解性不好，放置24h后出现明显的沉淀。而实施例5和6在柚皮苷和黄精酸枣仁提取物中加入由本发明所述方法制备得到的甘草提取物组成的含柚皮苷的组合物，放置24h后并未有沉淀产生；这说明：通过本发明所述方法制备得到的甘草提取物与柚皮苷和黄精酸枣仁提取物混合后，其可以提高柚皮苷和黄精酸枣仁提取物在水中的溶解能力。
[0135]
实施例7含柚皮苷的饮料的制备
[0136]
在1000ml的纯净水中加入1g实施例1制备得到的含柚皮苷的组合物以及0.2g矫味剂，搅拌均匀，再经灭菌后即得所述的含柚皮苷的饮料。
[0137]
实施例8含柚皮苷的饮料的制备
[0138]
在1000ml的纯净水中加入0.5g实施例2制备得到的含柚皮苷的组合物以及0.2g矫味剂，搅拌均匀，再经灭菌后即得所述的含柚皮苷的饮料。
[0139]
实施例9含柚皮苷的饮料的制备
[0140]
在1000ml的纯净水中加入1g实施例5制备得到的含柚皮苷的组合物以及0.1g矫味剂，搅拌均匀，再经灭菌后即得所述的含柚皮苷的饮料。
[0141]
实施例10含柚皮苷的饮料的制备
[0142]
在1000ml的纯净水中加入1g实施例6制备得到的含柚皮苷的组合物以及0.1g矫味剂，搅拌均匀，再经灭菌后即得所述的含柚皮苷的饮料。

技术特征：

1.一种含柚皮苷的组合物，其特征在于，包含柚皮苷以及黄精酸枣仁提取物；其中，柚皮苷和黄精酸枣仁提取物的重量比为1～2:1；所述的黄精酸枣仁取物是以黄精和酸枣仁为原料提取得到。2.根据权利要求1所述的含柚皮苷的组合物，其特征在于，所述的黄精甘草提取物通过如下方法制备得到：取黄精和酸枣仁，用有机溶剂进行提取，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液去除有机溶剂并干燥后得黄精酸枣仁有机溶剂提取物，即所述的黄精酸枣仁提取物。3.根据权利要求2所述的含柚皮苷的组合物，其特征在于，所述的有机溶剂是由体积比为3～5:1的异丙醇和丙酮组成的混合有机溶剂。4.根据权利要求2所述的含柚皮苷的组合物，其特征在于，黄精和酸枣仁的重量比为1～3:1～3。5.根据权利要求2所述的含柚皮苷的组合物，其特征在于，所述的黄精酸枣仁提取物通过如下方法制备得到：取黄精和酸枣仁，用有机溶剂进行提取，得黄精酸枣仁有机溶剂提取液，将黄精酸枣仁有机溶剂提取液去除有机溶剂并干燥后即得黄精酸枣仁有机溶剂提取物；进一步将黄精酸枣仁有机溶剂提取物上硅胶柱，先用丙酮体积分数占5～8％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱除杂；再用丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂进行洗脱，收集丙酮体积分数占17～20％的正庚烷丙酮混合溶剂洗脱下来的馏分，去除有机溶剂并干燥后即得所述的黄精酸枣仁提取物。6.权利要求1～5任一项所述的含柚皮苷的组合物在制备具有降血糖和/或抗病毒作用的产品中的应用。7.权利要求1～5任一项所述的含柚皮苷的组合物在制备含柚皮苷的饮料中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，在1000ml含柚皮苷的饮料中含柚皮苷的组合物的含量为0.5～1g。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的含柚皮苷的饮料中还含有矫味剂。10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的含柚皮苷的饮料中还含有防腐剂。

技术总结

本发明公开了一种含柚皮苷的组合物及其在制备含柚皮苷的饮料中的应用。所述的含柚皮苷的组合物包含柚皮苷以及黄精酸枣仁提取物；其中，柚皮苷和黄精酸枣仁提取物的重量比为1～2:1；所述的黄精酸枣仁取物是以黄精和酸枣仁为原料提取得到。由于所述的含柚皮苷的组合物由柚皮苷和黄精酸枣仁提取物组合而成；因此，将本发明所述的含柚皮苷的组合物作为有效成分制备得到的产品(如饮料、食品、药物或保健品)，不仅具有柚皮苷本身的抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、镇痛、降血压等作用；同时还具有降血糖作用。时还具有降血糖作用。