咖啡酸衍生物在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及咖啡酸衍生物，还涉及所述咖啡酸衍生物在在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用。

背景技术：

2.慢性阻塞性肺病是一类多由吸烟、长期肺炎、粉尘及烟雾暴露导致的不可逆转的气道阻塞性疾病，其临床表现为肺泡塌缩、支气管壁变厚、肺功能降低等。慢性阻塞性肺病还包含可见的肺部感染、氧化应激损伤等现象。另一方面，慢性阻塞性肺病是一类多见于老年患者的疾病，其发病及严重程度与年龄呈现显著的正相关性。目前临床上多采用抗生素、支气管舒张剂及糖皮质激素类药物来缓解慢性阻塞性肺病的发病症状，仍缺少有效的能够慢性阻塞性肺病的天然小分子化合物。同时，现有的方案难以解决由肺衰老导致的慢性阻塞性肺病及并发症，因此，寻通过靶向肺感染从而治愈慢性阻塞性肺病的小分子化合物仍具有很大意义。
3.咖啡酸(caffeic acid，ca)广泛存在于菊科、蔷薇科、无患子科等植物的根茎或者果实中，现代药理学研究表明，咖啡酸具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、中枢兴奋、升高白细胞及血小板等多种药理作用，可用于多种与氧化应激、炎症反应、病毒感染相关的疾病[杨九凌等，咖啡酸及其衍生物咖啡酸苯乙酯药理作用研究进展.中国药学杂志,2013,48(8):577]。咖啡酸片在临床上用于预防出血或止血，也用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症。
[0004]
中国发明专利申请cn 106146296a公开了一种咖啡酸衍生物的制备方法，但没有提及其用途。
[0005]
因此，寻求新的、用于或延缓慢性阻塞性肺病药物依然是本领域所关注的技术问题。

技术实现要素：

[0006]
本发明的目的是提供一种新的可用于或延缓慢性阻塞性肺病的化合物，并验证该化合物的药用效果。
[0007]
基于此，本发明提供咖啡酸衍生物在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用。
[0008]
在本发明中，所述咖啡酸衍生物是式（i）或式（ii）化合物：。
[0009]
本发明的式（i）或式（ii）化合物是依据中国发明专利申请cn 106146296 a公开的
咖啡酸衍生物的制备方法制备得到的化合物。
[0010]
基于此，本发明还提供一种抗肺部炎症的药物，所述药物含有上述咖啡酸衍生物。
[0011]
在本发明中，所述药物是慢性阻塞性肺疾病copd的药物。
[0012]
根据一种的实施方式，所述药物包括咖啡酸衍生物和医学上可接受的辅料。
[0013]
根据一种优选的实施方式，所述药物的剂型为可以是口服制剂或吸入制剂。
[0014]
更优选地，所述的吸入剂为粉剂或雾化剂。
[0015]
本发明提供了咖啡酸衍生物在制备或延缓慢性阻塞性肺病的药物的用途。本发明人进行了开发慢性阻塞性肺病的剂的研究工作，经动物实验发现，对吸烟小鼠肺组织切片进行病理分析，结果显示细胞浸润评分降低；并对支气管肺泡灌洗液进行了分析，根据染细胞的性质将所得细胞分为巨噬细胞、中性粒细胞等，然后关于总细胞数计算各细胞的比率以进行组间比较，从而得出总细胞数、巨噬细胞数和中性粒细胞减少。本发明的研究结果确认了本发明的化合物在具有诱导的copd的小鼠肺组织中对免疫细胞的浸润、对支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞、中性粒细胞表达表现出抑制作用。本发明发现咖啡酸衍生物有望成为作为一种抗慢性阻塞性肺病活性成分应用于相关药物的研发或疾病的诊断或。
附图说明
[0016]
图1为小鼠肺部组织细胞浸润切片评分图。
[0017]
图2为咖啡酸衍生物对吸烟小鼠肺部组织细胞浸润表达抑制作用。
[0018]
图3为咖啡酸衍生物对支气管肺泡灌洗液(bal液)中巨噬细胞表达抑制作用。
[0019]
图4咖啡酸衍生物对支气管肺泡灌洗液(bal液)中中性粒细胞表达抑制作用。
[0020]
图5咖啡酸衍生物对支气管肺泡灌洗液(bal液)中总细胞数表达抑制作用。
具体实施方式
[0021]
以下实施例用于非限制性地解释本发明的技术方案。
[0022]
在本发明中，如无特殊说明，用于解释浓度的“%”均为质量百分比，“：”均为质量比。
[0023]
实施例1。
[0024]
1、构建具有诱导的copd的动物模型(吸烟s-rat copd模型)。
[0025]
将雌性6周龄昆明种小鼠（由昆明医科大学提供）共18只置于密封烟雾盒中，点燃香烟，将其过滤嘴连接负压抽吸软管，并将软管的另一端与烟雾盒连接，通过负压抽吸，使香烟燃烧产生的烟雾输入到烟雾盒内，使小鼠在吸气的同时被迫吸入香烟烟雾。使小鼠共吸烟28d，其中，小鼠在第一天、第二天和第三天分别暴露在一支、两支和四支香烟中一次，并在第四天和第五天分别再次暴露在四支香烟中两次和三次。之后，在剩下的6d-28d内，小鼠每天3次暴露于四支香烟。18只小鼠随机分为阳性对照组、式（i）组和式（ii）组。另取6只正常饲养的非吸烟小鼠（nor-rat）作为阴性对照。
[0026]
2、制备咖啡酸衍生物。
[0027]
依据中国发明专利申请cn 106146296 a公开的咖啡酸衍生物的制备方法制备得到的式（i）和式（ii）化合物：
。
[0028]
3、制备咖啡酸衍生物（ⅰ）雾化剂及给药。
[0029]
取式（i）化合物50mg和edta-2na 20mg溶于10ml蒸馏水中，溶解混合均匀，药液经0.45
µ
m微孔滤膜过滤，滤液装入鼻腔喷雾泵备用。每日按照以下方式给药一次（共0.3ml/每日）：每日第一次烟草烟雾暴露后2h，小鼠鼻腔给药0.1ml，间隔10min，再鼻腔给药0.1ml，再间隔10min，再鼻腔给药0.1ml，完成当日给药。
[0030]
以相同的方法制备咖啡酸衍生物（ii）雾化剂，给药方式和剂量同上。
[0031]
在吸烟s-rat copd模型小鼠构建过程的第15天至28天通过鼻腔给药分别将咖啡酸衍生物（ⅰ）雾化剂和咖啡酸衍生物（ii）雾化剂给药于式（i）组和式（ii）组麻醉小鼠，每日给药剂量为50mg/kg，如下表：。
[0032]
实施例2评估免疫细胞浸润。
[0033]
实施例1各组小鼠取出肺后，对肺组织切片进行病理分析，并与阴性对照组对比。
[0034]
为了确认本发明的化合物对预防或慢性阻塞性肺病的作用，评估了免疫细胞浸润的程度。在从各组小鼠取出肺后，对肺组织切片进行h&e染，并进行病理分析，如图1所示。图1由左到右分别是阴性对照组、（ii）组、（i）组和阳性对照组肺部组织切片。根据染图像将细胞浸润程度标记为0至3分，其中，0分表示无损伤，1分表示轻度损伤，2分表示中度损伤，3分表示重度损伤，如图显示在10x和20x镜下正常小鼠（阴性对照）的支气管粘膜较完整，管壁及肺泡腔炎症细胞少见，管腔无明显渗出物，肺泡大小较一致，肺泡壁完整；（ii）组的支气管粘膜上皮细胞轻微脱落、坏死，气管壁平滑肌及纤维母细胞增生，弹性组织部分断裂，结构紊乱；（i）组的支气管黏膜上皮细胞脱落严重，弹性组织断裂，无完整结构；而阳性对照组各个组织均被破坏，杂乱无章。由此图可知，吸烟对小鼠肺部损害严重，时间越久损害程度越深，但本发明所涉及的两种咖啡酸衍生物对吸烟小鼠的肺部组织具有一定保护作用，且（ii）组的效果优于（i）组。
[0035]
使用r语言estimate算法计算各组小鼠的细胞浸润评分(p《0.05)，结果如图2所示，其中，图2从左至右分别为阴性对照组（nor-rat）、阳性对照组（s-rat）、式（i）组（s-rat(yr-djk-01)）和式（ii）组（s-rat(yr-djk-02)）。其中，阳性对照（吸烟小鼠s-rat组）平均得
分为2.38x103，阴性对照组（nor-rat）平均得分为0.31x103，与阳性对照在相比，式（i）组和式（ii）组表现出细胞浸润评分降低，式（ii）组效果更显著，其中，式（i）组平均得分为1.93x103，式（ii）组平均得分为1.65x103。
[0036]
由此可知，本发明的化合物表现出抑制免疫细胞浸润的作用，因此可用于慢性阻塞性肺病的预防或。
[0037]
实施例3 支气管肺泡灌洗液(bal液)分析。
[0038]
对实施例1各组小鼠中分离出2ml支气管肺泡灌洗液，离心后将所得液体悬浮在磷酸盐缓冲溶液(pbs)中，然后计数总细胞数。通过细胞离心涂片器将2
×
105个细胞附着在载玻片上，用diff-quick染试剂盒染后，由于巨噬细胞的细胞核呈圆形或者椭圆形，中性粒细胞的细胞核呈杆状或2~5分叶状，叶与叶间有细丝相连，因此根据染细胞的性质将所得细胞分为巨噬细胞、中性粒细胞等，然后关于总细胞数计算各细胞的比率以进行组间比较。
[0039]
巨噬细胞和中性粒细胞均为免疫细胞，巨噬细胞主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用，并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应；而中性粒细胞在血液的非特异性细胞免疫系统中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体，特别是在化脓性细菌入侵的第一线，当炎症发生时，它们被趋化性物质吸引到炎症部位。其吞噬对象以细菌为主，也吞噬异物。中性粒细胞在吞噬、处理了大量细菌后，自身也死亡，成为脓细胞。因此，总细胞数、巨噬细胞和中性粒细胞的减少，说明炎症因子减少，从而说明慢性阻塞性肺疾病有所缓解，所以该咖啡酸衍生物对慢性阻塞性肺疾病有一定的作用。
[0040]
结果如图3-5所示，其中，各图中从左至右分别为阴性对照组（nor-rat）、阳性对照组（s-rat）、式（i）组（s-rat(yr-djk-01)）和式（ii）组（s-rat(yr-djk-02)）。其中，式（i）组和式（ii）组与阳性对照组进行比较，从而得出总细胞数、巨噬细胞数和中性粒细胞减少。其中，式（ii）组效果更明显。由此可知，本发明的化合物表现出抑制炎症细胞浸润的作用，因此可用于预防或慢性阻塞性肺病。

技术特征：

1.咖啡酸衍生物在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述咖啡酸衍生物是式（i）或式（ii）化合物：。3.一种抗肺部炎症的药物，其特征在于所述药物含有根据权利要求2所述的咖啡酸衍生物。4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于所述药物是慢性阻塞性肺疾病copd的药物。5.根据权利要求3所述的药物，其特征在于所述药物包括咖啡酸衍生物和医学上可接受的辅料。

技术总结

本发明提供咖啡酸衍生物在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用，所述咖啡酸衍生物是式（I）或式（II）化合物。本发明提供了咖啡酸衍生物在制备或延缓慢性阻塞性肺病的药物的用途。经动物实验发现，本发明的咖啡酸衍生物能降低吸烟小鼠肺组织细胞浸润评分；并减少支气管肺泡灌洗液中的总细胞数、巨噬细胞数和中性粒细胞。本发明确认了该衍生物具有诱导COPD的小鼠肺组织中对免疫细胞的浸润、对支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞、中性粒细胞表达表现出抑制作用。本发明的咖啡酸衍生物有望成为作为一种抗慢性阻塞性肺病活性成分应用于相关药物的研发或疾病的诊断或。药物的研发或疾病的诊断或。药物的研发或疾病的诊断或。