使用ACTRIIB配体陷阱和mTOR抑制剂贫血的方法和组合物与流程

使用actriib配体陷阱和mtor抑制剂贫血的方法和组合物
相关申请的交叉引用
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2.技术领域
3.本文提供了在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括向该受试者施用激活素iib型(actriib)配体陷阱和mtor抑制剂。
3.

背景技术：

4.贫血是红细胞数量减少或血液中血红蛋白低于正常量。血红蛋白的氧结合能力降低也可能导致贫血。
5.贫血可能由无效造血引起。如果发生活跃红细胞生成但成熟的红细胞无法以适当的速度发育，就会出现无效造血。祖细胞在达到成熟的红细胞阶段之前经历了细胞凋亡。骨髓增生异常综合征(mds)包括以无效造血为特征的造血干细胞障碍。此外，mds障碍包括以环形铁粒幼细胞为特征的障碍。环形铁粒幼细胞是异常的幼红细胞。而且，与mds相关的某些体细胞突变会导致环形铁粒幼细胞形成和无效造血。剪接因子3b1(sf3b1)中的显性突变与环形铁粒幼细胞的形成有关。环形铁粒幼细胞是其中最少有五个含铁(铁质沉着的)颗粒覆盖至少三分之一的细胞核周长的幼红细胞。参见例如，mufti等人,2008,haematologica[血液学]93(11):1712-7。环形铁粒幼细胞含有负载铁的线粒体。环形铁粒幼细胞的存在可以通过普鲁士蓝染和可视化进行检测。可以在外周血和/或骨髓涂片中检测到环形铁粒幼细胞。
[0006]
贫血可能与慢性粒单核细胞白血病(cmml)有关。cmml最常见的体征是具有太多的单核细胞，这些单核细胞可以沉积在肝脏和脾脏中，从而导致它们增大。
[0007]
此外，贫血可能与地中海贫血有关。地中海贫血主要有两种类型：α和β。血红蛋白分子由可能受突变影响的α链和β链组成。在地中海贫血中，α链或β链的产生减少，从而导致α-地中海贫血或β-地中海贫血。β-地中海贫血是全世界最常见的遗传性血红蛋白病之一，其原因是编码β-球蛋白的基因发生常染体突变，导致红细胞生成细胞中该蛋白质缺乏或低水平合成(weatherall,2001,nature reviews genetics[自然遗传学评论]2(4):245-255)。约8000至9000万人(全球人口的约1.5％)是β-地中海贫血的携带者，其中每年大约有60,000个有症状个体出生(modell等人,2007,scand.j.clin.lab.invest[斯堪的纳维亚临床和实验室调查杂志]67(1):39-69)。全世界有症状个体的年发病率估计为100,000分之
一，而欧盟则为10,000分之一(galanello和origa,2010,orphanet.j.rare dis.[罕见疾病孤儿杂志]5:11)。地中海地区、中东和东南亚(特别是印度、泰国和印度尼西亚；该地区占受影响出生人数的大约50％)的发病率最高，并且由于迁移，全世界(例如，欧洲、美国和澳大利亚)的发病率正在增加(colah等人,2010,expert rev.hematol.[血液学专家评论]3(1):103-117；modell等人,2008,bull.world health organ.[世界卫生组织公报]86(6):480-487)。
[0008]
β-地中海贫血的特征是β-球蛋白链减少，随后血红蛋白(hb)分子的球蛋白链(α链与非α链的比率)失衡，从而导致红细胞生成受损和其他并发症。已在影响β-球蛋白基因的β-地中海贫血患者中描述了近200种不同的突变，对此这些患者可能是纯合子或复合杂合子。因此，患者的表型效应范围很广，从β-球蛋白链合成的轻微受损到完全抑制(thein,2013,cold spring harb.perspect.med.[冷泉港医学展望]3(5):a011700)。除缺陷型β-球蛋白链以外，患者还可能呈现β-地中海贫血与hbe等结构变体的组合，从而导致hbe/β-地中海贫血。
[0009]
鉴于目前缺乏安全且有效的药物疗法来与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、mds、或非增殖性cmml相关的贫血，因此对于开发专门解决包括贫血和无效造血并发症在内的综合征的潜在病理生理学的新疗法存在显著未满足的医疗需求。
[0010]
两种相关的ii型受体actriia和actriib已被鉴定为激活素的ii型受体(mathews和vale,1991,cell[细胞]65:973-982；attisano等人,1992,cell[细胞]68:97-108)。除了激活素外，actriia和actriib可以与其他几种tgf-β家族蛋白(包括bmp7、nodal、gdf8和gdf11)发生生化相互作用(yamashita等人,1995,j.cell biol.[细胞生物学杂志]130:217-226；lee和mcpherron,2001,proc.natl.acad.sci.[美国国家科学院院刊]98:9306-9311；yeo和whitman,2001,mol.cell[分子细胞]7:949-957；oh等人,2002,genes dev.[基因和发育]16:2749-54)。alk4是激活素(特别是激活素a)的主要i型受体，并且alk-7也可以作为激活素(特别是激活素b)的受体。
[0011]
罗特西普(luspatercept)是一种actriib配体陷阱，已被描述用于各种适应症。参见例如，美国专利申请公开号us 2018/0050085 a1、美国专利号8,058,229、美国专利号8,361,957和美国专利号8,343,933。
4.

技术实现要素：

[0012]
本文提供了在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括向该受试者施用actriib配体陷阱以及向该受试者施用mtor抑制剂。
[0013]
在某些实施例中，贫血是与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病相关的贫血。
[0014]
在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素(rapamycin)。在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素的药学上可接受的盐或水合物。
[0015]
在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素。在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是西罗莫司(sirolimus)。在某些实施例中，mtor抑制剂是西罗莫司的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是地磷莫司(deforolimus)。在某些实施例中，mtor抑制剂是地磷莫司的药学上
可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是依维莫司(everolimus)。在某些实施例中，mtor抑制剂是依维莫司的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是替西罗莫司(temsirolimus)。在某些实施例中，mtor抑制剂是替西罗莫司的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是利达福莫司(ridaforolimus)。在某些实施例中，mtor抑制剂是利达福莫司的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是他克莫司(tacrolimus)(fk-506)。在某些实施例中，mtor抑制剂是他克莫司(fk-506)的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是咗他莫司(zotarolimus)(abt-578)。在某些实施例中，mtor抑制剂是咗他莫司(abt-578)的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是非雷帕霉素类似物mtor抑制化合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是非雷帕霉素类似物mtor抑制化合物的药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，mtor抑制剂是atp竞争性抑制剂。
[0016]
在某些实施例中，actriib配体陷阱是包含如下氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列：(a)与seq id no:3具有至少90％同一性；(b)与seq id no:3具有至少95％同一性；(c)与seq id no:3具有至少98％同一性；(d)是至少seq id no:3；(e)与seq id no:6具有至少90％同一性；(f)与seq id no:6具有至少95％同一性；(g)与seq id no:6具有至少98％同一性；(h)是至少seq id no:6；(i)与seq id no:7具有至少90％同一性；(j)与seq id no:7具有至少95％同一性；(k)与seq id no:7具有至少98％同一性；(l)是至少seq id no:7；(m)与seq id no:11具有至少90％同一性；(n)与seq id no:11具有至少95％同一性；(o)与seq id no:11具有至少98％同一性；或者(p)是至少seq id no:11。在某些实施例中，actriib配体陷阱是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式。在某些实施例中，actriib配体陷阱是人源化融合蛋白，该人源化融合蛋白由actriib的细胞外结构域和人igg1 fc结构域组成。
[0017]
在某些实施例中，该方法使受试者中的血红蛋白(hgb)水平增加到与所述前受试者中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。
[0018]
在某些实施例中，该方法使受试者中的血细胞比容(hct)水平增加到与所述前受试者中的hct水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。
[0019]
在某些实施例中，该方法使受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与所述前受试者中的mcv水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。
[0020]
在某些实施例中，该方法使受试者中的红细胞血红蛋白浓度(chc)水平增加到与所述前受试者中的chc水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。
[0021]
在某些实施例中，该方法使受试者中的红细胞分布宽度(rdw)水平降低到与所述前受试者中的rdw水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。
[0022]
在某些实施例中，受试者中的网织红细胞水平保持在与所述前受试者中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。
[0023]
在某些实施例中，受试者中的网织红细胞水平保持在与参考体中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。在特定的实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在特定的实施例中，参考体由健康个体组成。在特定的实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。
[0024]
在某些实施例中，受试者中的白细胞水平保持在与所述前受试者中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。
[0025]
在某些实施例中，受试者中的白细胞水平保持在与参考体中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。在特定的实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在特定的实施例中，参考体由健康个体组成。在特定的实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。
[0026]
在某些实施例中，mtor抑制剂在施用actriib配体陷阱之前施用或与其同时施用。在某些实施例中，在施用actriib配体陷阱之前，受试者曾接受过mtor抑制剂。在某些实施例中，在施用mtor抑制剂之前，受试者曾接受过actriib配体陷阱。
[0027]
在某些实施例中，受试者是红细胞非输注依赖性的。在某些实施例中，受试者是红细胞输注依赖性的。
[0028]
在某些实施例中，actriib配体陷阱以0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg、或1.75mg/kg的剂量施用。在某些实施例中，将actriib配体陷阱每21天一次施用于受试者。在某些实施例中，每周两次施用actriib配体陷阱。在某些实施例中，每周一次施用actriib配体陷阱。在某些实施例中，将actriib配体陷阱皮下施用于受试者。在某些实施例中，受试者是人。
[0029]
在某些实施例中，口服施用mtor抑制剂。在某些实施例中，mtor抑制剂以0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg的剂量施用。在某些实施例中，每日施用mtor抑制剂。
[0030]
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使参考体中的血红蛋白(hgb)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的受试者中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0031]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生
成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的血细胞比容(hct)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0032]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0033]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞血红蛋白浓度(chc)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0034]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞分布宽度(rdw)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0035]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该受试者中的网织红细胞水平偏离正常网织红细胞水平，与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的网织红细胞水平相比相同或低约0.1％、
0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0036]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该受试者中的白细胞水平偏离正常网织红细胞水平，与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的网织红细胞水平相比相同或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由患有与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病(cmml)相关的贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
5.附图说明
[0037]
图1描绘了临床前实验设计。对于实验1(exp1)，使用了10-12周龄野生型(c57bl/6j)雌性小鼠(杰克逊实验室(jackson lab)库存编号000664)。对于实验2(exp1)，使用了9-18周龄000664 c57bl/6j背景的b6.129p2-hbb-b1
tm1unc hbb-b2
tm1unc
/j(th3/+)雌性小鼠(杰克逊实验室库存编号002683，β-地中海贫血小鼠模型)。经由皮下(sc)途径注射总体积为150μl的在1x磷酸盐缓冲盐水(pbs)中的鼠形式(murine version)的罗特西普(rap-536)(剂量为10mg/kg)，每周两次，持续两周。除第6天和第13天外，每天经由腹腔途径注射总体积为150μl的在含有5％吐温80、5％ peg400、4％乙醇的1xpbs中的雷帕霉素(剂量为4mg/kg)，持续两周。在第15天收获组织。
[0038]
图2a和2b证明，雷帕霉素和鼠形式的罗特西普(rap-536)的联合给药比单药剂给药更能增加血液中的红细胞(rbc)水平。rap-536和雷帕霉素以相似的水平增加了rbc水平。th3/+小鼠(b6.129p2-hbb-b1
tm1unc hbb-b2
tm1unc
/j)的rbc增加百分比大于野生型(c57bl/6j)小鼠。在rap-536或雷帕霉素给药后，th3/+小鼠(000664c57bl/6j背景的b6.129p2-hbb-b1
tm1unc hbb-b2
tm1unc
/j小鼠)中的rbc数量达到野生型水平，并且在rap-536或雷帕霉素联合给药后，超过野生型水平。
[0039]
图3a和3b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药比单药剂给药更能增加血液中的血红蛋白(hgb)水平。hgb水平的增加百分比与rbc水平的增加百分比相似。th3/+小鼠的hgb水平约为野生型小鼠的hgb水平的一半。联合给药使th3/+小鼠的hgb水平增加超过40％。
[0040]
图4a和4b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药比单药剂给药更能增加血液中的hct水平。给药后，野生型小鼠的hct增加是有限的。th3/+小鼠的hct增加百分比与rbc和hgb的增加相关。联合给药对增加rbc、hgb和hct非常有效，尤其是在th3/+小鼠中。
[0041]
图5a和5b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药改变了野生型小鼠的rbc细胞尺寸
(mcv)。rap-536给药降低了野生型小鼠的mcv，但增加了th3/+小鼠的mcv水平。rap-536和雷帕霉素的联合给药降低了野生型小鼠的mcv。
[0042]
图6a和6b显示出雷帕霉素和rap-536联合给药后的平均红细胞血红蛋白(mch)水平。在野生型小鼠中，rap-536给药略微降低mch水平。与野生型小鼠相比，th3/+小鼠的mch水平显著降低。th3/+小鼠的hgb水平和rbc水平低于野生型小鼠的hgb水平和rbc水平，这解释了th3/+小鼠的hgb/细胞(mch)总量较少的原因。野生型小鼠的mch水平在雷帕霉素给药后更高，但在rap-536给药后更低，这表明不同的作用机制，并因此表明可能对红细胞产生具有累加/协同效应。
[0043]
图7a和7b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药增加了野生型小鼠的红细胞hgb浓度(chc)，但降低了th3/+小鼠的chc。
[0044]
图8a和8b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药降低了th3/+小鼠的红细胞分布宽度(rdw)。在rap-536给药或rap-536和雷帕霉素的联合给药后，野生型小鼠的rdw增加。请注意，与野生型小鼠相比，th3/+的rdw更高。在th3/+小鼠中，rdw的降低与rap-536给药及rap-536和雷帕霉素的联合给药对贫血的改善相关。
[0045]
图9a和9b证明，在野生型小鼠中，rap-536给药增加了血液中的网织红细胞水平，并且雷帕霉素给药降低了血液中的网织红细胞水平，这表明rap-536对红细胞产生的作用机制与雷帕霉素对红细胞产生的作用机制是不同的。给药后，野生型小鼠血液中的网织红细胞百分比和绝对数量以相同方式发生变化。两者的联合给药使网织红细胞水平标准化。
[0046]
图10a和10b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药增加了th3/+小鼠的网织红细胞数量，但没有增加网织红细胞百分比。与野生型小鼠相比，th3/+小鼠的网织红细胞百分比和绝对数量更高。在雷帕霉素给药、rap-536给药及两者的联合给药后，th3/+小鼠的网织红细胞绝对数量显著增加。在rap-536给药和雷帕霉素给药后，th3/+小鼠的网织红细胞绝对数量均增加，这一事实表明th3/+小鼠的网织红细胞存活率提高。
[0047]
图11a和11b证明，雷帕霉素和rap-536联合给药略微降低了野生型小鼠和th3/+小鼠的网织红细胞血红蛋白含量(chr-网织红细胞血红蛋白含量)。
[0048]
图12显示出由自动化血细胞分析仪在网织红细胞通道中分析的血液中的示例性网织红细胞组成。h为高rna水平，未成熟的网织红细胞；m为中等rna水平；并且l为低rna水平，成熟的网织红细胞。(参见例如，mori等人,2003,nephrology dialysis transplantation[肾脏透析移植],18(增刊4):416)。
[0049]
图13a和13b显示出在雷帕霉素和rap-536联合给药后野生型小鼠血液中的网织红细胞组成的变化。特别地，在rap-536给药后，h网织红细胞百分比增加，并且m网织红细胞百分比降低。在rap-536给药后，总的网织红细胞数量增加。在雷帕霉素给药后，h网织红细胞百分比降低，并且l和m网织红细胞百分比增加。同样，总的网织红细胞水平降低。
[0050]
图14a和14b描绘出在雷帕霉素和rap-536联合给药后th3/+小鼠血液中的网织红细胞组成的变化。特别地，在雷帕霉素和rap-536联合给药后，th3/+小鼠的h网织红细胞百分比降低。雷帕霉素和rap-536联合给药不会减少th3/+小鼠的总的网织红细胞数量。然而，h网织红细胞百分比显著降低，这表明网织红细胞的成熟/存活率可能增强。
[0051]
图15a和15b证明了野生型小鼠和th3/+小鼠的体重的变化。
[0052]
图16a和16b证明了野生型小鼠和th3/+小鼠的脾脏尺寸的变化。rap-536给药略微
增加了野生型小鼠的脾脏尺寸，而雷帕霉素给药减小了野生型小鼠的脾脏尺寸。雷帕霉素和rap-536的联合给药使野生型小鼠的脾脏尺寸标准化。在th3/+小鼠中，雷帕霉素和rap-536的联合给药不仅减少了贫血，而且减小了脾脏尺寸。
[0053]
图17a和17b证明，在雷帕霉素和rap-536联合给药后，th3/+小鼠骨髓中的幼红细胞频率下降。特别地，th3/+小鼠骨髓中的幼红细胞/cd45(+)比率高，并且通过雷帕霉素和rap-536的联合给药实现标准化。
[0054]
图18a和18b证明，与单独的雷帕霉素或rap-536的给药相比，在雷帕霉素和rap-536的联合给药后，在野生型小鼠和th3/+小鼠的骨髓中产生和/或保留更多的网织红细胞。在rap-536给药及雷帕霉素和rap-536的联合给药后，野生型小鼠和th3/+小鼠中的网织红细胞与幼红细胞的比率增加。
[0055]
图19a和19b证明，rap-536给药及雷帕霉素和rap-536的联合给药均增加了野生型小鼠和th3/+小鼠脾脏中的ter119(+)细胞频率。
[0056]
图20a和20b证明了雷帕霉素和rap-536联合给药后野生型小鼠和th3/+小鼠的脾脏中幼红细胞/cd45(+)比率的变化。在野生型小鼠中，rap-536给药增加了脾脏中的幼红细胞/cd45(+)比率，并且雷帕霉素降低了脾脏中的幼红细胞/cd45(+)比率。
[0057]
图21a和21b证明了野生型小鼠和th3/+小鼠的脾脏中网织红细胞/幼红细胞比率的变化。与野生型小鼠相比，雷帕霉素和rap-536联合给药对th3/+小鼠的脾脏中红细胞生成的直接影响更温和。野生型小鼠脾脏中的网织红细胞/幼红细胞比率高于th3/+小鼠脾脏中的网织红细胞/幼红细胞比率。
6.具体实施方式
6.1缩写和术语
[0058]“β
0”是指与β球蛋白亚基合成缺乏相关的等位基因。
[0059]“β
+”是指与β球蛋白亚基合成减少相关的等位基因。
[0060]
如本文所用，术语“约”当与数字结合使用时是指参考数字1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％以内的任何数字。在某些实施例中，术语“约”涵盖所列举的确切数字。
[0061]
如本文所用，“actrii”是指激活素受体ii型。如本文所用，“actriia”是指激活素受体iia型。
[0062]
如本文所用，“actriib”是指激活素受体iib型。参见例如，attisano等人,1992,cell[细胞]68:97-108。genbank
tm
登录号nm_001106.3提供了示例性人actriib核酸序列。genbank
tm
登录号np_001097.2提供了示例性人actriib氨基酸序列。
[0063]
如本文所用，“bl”是指基线。
[0064]
如本文所用，“chc”是指红细胞血红蛋白浓度-平均值。
[0065]
如本文所用，“ecd”是指细胞外结构域。
[0066]
如本文所用，“epo”是指红细胞生成素。
[0067]
如本文所用，“sepo”是指血清红细胞生成素。
[0068]
如本文所用，“esa”是指红细胞生成刺激剂。
[0069]
如本文所用，“g-csf”是指粒细胞集落刺激因子。
no:34的简并形式。
[0097]
在某些实施例中，“(treat、treating、treatment)”等是指如下行为(例如，施用actriib配体陷阱和mtor抑制剂)，以便暂时或永久性地消除、减少、阻遏、减轻或改善折磨受试者的疾病、障碍或病症的至少一个潜在原因，或与折磨受试者的疾病、障碍、病症相关的至少一种症状。
[0098]
在某些实施例中，在贫血的上下文中，“(treat、treatment或treating)”包括改善至少一种贫血症状。贫血症状的非限制性实例包括疲劳、能量损失、心跳加速、呼吸急促、头痛、注意集中困难、头晕、皮肤苍白、腿部痉挛和失眠。
[0099]
在某些实施例中，在β-地中海贫血的上下文中，“(treat、treatment或treating)”包括改善至少一种β-地中海贫血症状。β-地中海贫血症状的非限制性实例包括骨髓中的缺陷性红细胞产生、无效造血、血红蛋白水平不足、多器官功能失调、铁过载、苍白、疲劳、黄疸和脾肿大。
[0100]
在某些实施例中，在mds的上下文中，“(treat、treatment或treating)”包括改善至少一种mds症状。mds症状的非限制性实例包括疲劳、虚弱、容易挫伤或出血、发烧、骨痛、呼吸急促和频繁感染。
[0101]
在某些实施例中，在mds的上下文中，“(treat、treatment或treating)”包括改善至少一种mds症状。mds症状的非限制性实例包括疲劳、频繁感染、容易挫伤或出血、脾脏肿胀引起的腹部不适和食欲不振。6.2概述
[0102]
本文提供了在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱(例如，罗特西普，其是由开放阅读框的表达以及随后的蛋白质纯化程序产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式；参见6.7节)，以及向该受试者施用mtor抑制剂(例如，雷帕霉素；参见6.8节)。给药方案在6.4节中进行了描述。可以使用本文提供的方法的患者体在6.5节中进行了描述。本文提供的方法的临床结果在6.3节中进行了描述。6.3方法
[0103]
本文提供了在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱(例如6.7节中所述的actriib配体陷阱)；以及向该受试者施用mtor抑制剂(例如6.8节中所述的mtor抑制剂)。
[0104]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞(rbc)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的rbc水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0105]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细
胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的hct水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hct水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0106]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的血红蛋白(hgb)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0107]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0108]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞血红蛋白浓度(chc)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0109]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞分布宽度(rdw)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或低约1％、2％、
3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0110]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的网织红细胞血红蛋白水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0111]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的h网织红细胞百分比降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的h网织红细胞百分比相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0112]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的平均血小板体积(mpv)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的mpv水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0113]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的骨髓中的ter119(+)晚期红系细胞百分比增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的骨髓中的ter119(+)晚期红系细胞百分比相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、
300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0114]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的骨髓中的幼红细胞频率降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的骨髓中的幼红细胞频率相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0115]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该受试者中的网织红细胞水平偏离正常网织红细胞水平，与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的网织红细胞水平相比相同或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0116]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该受试者中的白细胞水平偏离正常网织红细胞水平，与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的网织红细胞水平相比相同或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0117]
在某些实施例中，贫血是与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病(cmml)相关的贫血。
[0118]
在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素。在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素的药学上可接受的盐或水合物。
[0119]
在某些实施例中，actriib配体陷阱是包含如下氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列：(a)与seq id no:3具有至少90％同一性；(b)与seq id no:3具有至少95％同一性；(c)与seq id no:3具有至少98％同一性；(d)是至少seq id no:3；(e)与seq id no:6具有至少90％同一性；(f)与seq id no:6具有至少95％同一性；(g)与seq id no:6具有至少98％同一性；(h)是至少seq id no:6；(i)与seq id no:7具有至少90％同一性；(j)与seq id no:7
具有至少95％同一性；(k)与seq id no:7具有至少98％同一性；(l)是至少seq id no:7；(m)与seq id no:11具有至少90％同一性；(n)与seq id no:11具有至少95％同一性；(o)与seq id no:11具有至少98％同一性；或者(p)是至少seq id no:11。在某些实施例中，actriib配体陷阱是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式。在某些实施例中，actriib配体陷阱是人源化融合蛋白，该人源化融合蛋白由actriib的细胞外结构域和人igg1 fc结构域组成。
[0120]
在某些实施例中，该方法使受试者中的血红蛋白(hgb)水平增加到与所述前受试者中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。
[0121]
在某些实施例中，该方法使受试者中的血细胞比容(hct)水平增加到与所述前受试者中的hct水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。
[0122]
在某些实施例中，该方法使受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与所述前受试者中的mcv水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。
[0123]
在某些实施例中，该方法使受试者中的红细胞血红蛋白浓度(chc)水平增加到与所述前受试者中的chc水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。
[0124]
在某些实施例中，该方法使受试者中的红细胞分布宽度(rdw)水平降低到与所述前受试者中的rdw水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。
[0125]
在某些实施例中，受试者中的网织红细胞水平保持在与所述前受试者中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。
[0126]
在某些实施例中，受试者中的网织红细胞水平保持在与参考体中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。在特定的实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在特定的实施例中，参考体由健康个体组成。在特定的实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。
[0127]
在某些实施例中，受试者中的白细胞水平保持在与所述前受试者中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。
[0128]
在某些实施例中，受试者中的白细胞水平保持在与参考体中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。在特定的实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在特定的实施例中，参考体由健康个体组成。在特定的实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。
[0129]
在某些实施例中，mtor抑制剂在施用actriib配体陷阱之前施用或与其同时施用。在某些实施例中，在施用actriib配体陷阱之前，受试者曾接受过mtor抑制剂。在某些实施例中，在施用mtor抑制剂之前，受试者曾接受过actriib配体陷阱。
[0130]
在某些实施例中，受试者是红细胞非输注依赖性的。在某些实施例中，受试者是红细胞输注依赖性的。
[0131]
在某些实施例中，actriib配体陷阱以0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg的剂量施用。在某些实施例中，actriib配体陷阱以0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg、或1.75mg/kg的剂量施用。在某些实施例中，将actriib配体陷阱每21天一次施用于受试者。在某些实施例中，每周两次施用actriib配体陷阱。在某些实施例中，每周一次施用actriib配体陷阱。在某些实施例中，将actriib配体陷阱皮下施用于受试者。在某些实施例中，受试者是人。
[0132]
在某些实施例中，口服施用mtor抑制剂。在某些实施例中，mtor抑制剂以0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、或35mg/kg的剂量施用。在某些实施例中，每日施用mtor抑制剂。
[0133]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使参考体中的血红蛋白(hgb)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的受试者中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0134]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的血细胞比容(hct)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0135]
在某些实施例中，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、
80％、90％、100％、200％或500％的水平。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由与受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。在某些实施例中，参考体由患有贫血的个体组成。在某些实施例中，参考体由健康个体组成。
[0136]
在另一方面，本文提供了在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱(例如，罗特西普，其是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式；参见6.7节)，以及向该受试者施用mtor抑制剂(例如，雷帕霉素；参见6.8节)。
[0137]
在某些实施例中，actriib信号传导抑制剂是actriib配体陷阱(例如，罗特西普，其是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式；参见6.7节)。在某些实施例中，如6.3.1节中所述向受试者施用actriib信号传导抑制剂与第二药物活性剂或疗法的组合。
[0138]
在某些实施例中，mtor抑制剂是但不限于6.8节中所述的mtor抑制剂。在某些实施例中，mtor抑制剂是雷帕霉素。在某些实施例中，如6.3.1节中所述向受试者施用mtor抑制剂(例如，雷帕霉素；参见6.8节)与第二药物活性剂或疗法的组合。6.3.1组合疗法
[0139]
在某些实施例中，包含mtor抑制剂的药物组合物在施用actriib配体陷阱之前施用或与其同时施用。
[0140]
在某些实施例中，包含mtor抑制剂的药物组合物在施用actriib配体陷阱之后施用。
[0141]
在某些实施例中，在施用actriib配体陷阱之前，受试者曾接受过mtor抑制剂。
[0142]
在某些实施例中，在施用mtor抑制剂之前，受试者曾接受过actriib配体陷阱。
[0143]
在某些实施例中，mtor抑制剂与actriib配体陷阱伴随施用。6.4剂量方案和剂量调整
[0144]
本文提供了用于在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括向该受试者施用actriib配体陷阱以及向该受试者施用mtor抑制剂。在某些实施例中，该方法进一步包括：(a)取血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的测量值；以及(b)基于与参考体中血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的测量值之间的差异，施用后续剂量的actriib配体陷阱。
[0145]
在某些实施例中，该方法进一步包括：(a)取血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的测量值；以及(b)基于步骤(a)中的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的测量值与参考体中的以上测量值之间的差异，施用后续剂量的包含mtor抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物的药物组合物。
[0146]
在某些实施例中，通过磁共振成像(mri)测量脾脏尺寸或脾脏体积。在某些实施例
中，通过计算机断层扫描(ct)测量脾脏尺寸或脾脏体积。在某些实施例中，通过触诊测量脾脏尺寸或脾脏体积。
[0147]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血、无效造血、或β-地中海贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：(a)取该受试者的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第一测量值；(b)向该受试者施用初始剂量的actriib配体陷阱；(c)向该受试者施用初始剂量的包含mtor抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物的药物组合物；(d)在第一时间段后，取该受试者的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第二测量值；以及(e)基于血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的该第二测量值与血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的该第一测量值之间的差异，施用后续剂量的包含mtor抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物的药物组合物。
[0148]
在又一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中贫血、无效造血、或β-地中海贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括：(a)取该受试者的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第一测量值；(b)向该受试者施用初始剂量的actriib配体陷阱；(c)向该受试者施用mtor抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物；(d)在第一时间段后，取该受试者的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第二测量值；以及(e)基于血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的该第二测量值与血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的该第一测量值之间的差异，施用后续剂量的actriib配体陷阱。
[0149]
在某些实施例中，在施用mtor抑制剂之前取血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第一测量值。
[0150]
在某些实施例中，在向受试者施用actriib配体陷阱之前，取血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第一测量值。
[0151]
在某些实施例中，在施用初始剂量的mtor抑制剂后大约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月取血红蛋白浓度、血细胞比容、脾脏尺寸、或脾脏体积的第二测量值。在某些实施例中，在施用初始剂量的actriib配体陷阱后大约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月取血红蛋白浓度、血细胞比容、脾脏尺寸、或脾脏体积的第二测量值。
[0152]
在某些实施例中，第一时间段为约1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周。
[0153]
在某些实施例中，mtor抑制剂的后续剂量与mtor抑制剂的初始剂量相同。
[0154]
在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量与初始剂量相同。
[0155]
在某些实施例中，包含mtor抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物的药物组合物在施用actriib配体陷阱之前施用或与其同时施用。
[0156]
在某些实施例中，在施用actriib配体陷阱之前，受试者曾接受过任何mtor抑制剂。在某些实施例中，在施用actriib配体陷阱之前，受试者曾接受过mtor抑制剂。
[0157]
在某些实施例中，升高的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、chc、脾脏尺寸、或脾脏体积的水平与参考体中前10％、前5％、前4％、前3％、前2％、或前1％中的血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、chc、脾脏尺寸、或脾脏体积的水平相比相同或高约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％。
[0158]
在某些实施例中，降低的mcv或rdw的水平与参考体中后10％、后5％、后4％、后3％、后2％或后1％中的mcv或rdw的水平相比相同或低约10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％。
[0159]
在某些实施例中，mtor抑制剂的后续剂量比mtor抑制剂的初始剂量低约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比mtor抑制剂的初始剂量低约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、或约15mg/kg。在某些实施例中，mtor抑制剂的后续剂量与mtor抑制剂的初始剂量相同。
[0160]
在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量比actriib配体陷阱的初始剂量低约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比actriib配体陷阱的初始剂量低约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/
kg、约2.5mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、或约35mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量与actriib配体陷阱的初始剂量相同。
[0161]
在某些实施例中，mtor抑制剂的后续剂量比mtor抑制剂的初始剂量高约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比mtor抑制剂的初始剂量高约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、或约35mg/kg。
[0162]
在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量比actriib配体陷阱的初始剂量高约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比actriib配体陷阱的初始剂量高约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约
9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、或约35mg/kg。6.4.1 actriib配体陷阱给药方案
[0163]
在某些实施例中，根据本文提供的方法施用于受试者的actriib配体陷阱(参见6.3节)是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式。在某些实施例中，actriib配体陷阱(例如，由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式)的剂量为约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约1.25mg/kg、约1.33mg/kg、约1.50mg/kg、约1.75mg/kg、或约2.00mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约0.3mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约0.45mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约0.6mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约0.8mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约1.0mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约1.25mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约1.33mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约1.50mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量为约1.75mg/kg。
[0164]
在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量是初始剂量。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.75mg/kg、约0.8mg/kg、约1.0mg/kg、约1.33mg/kg、约1.5mg/kg、或约1.75mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.1mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.3mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.5mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.6mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.75mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.8mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约1.0mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约0.8mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约1.5mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约1.75mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约2mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约5mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约10mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的初始剂量为约15mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的剂量是后续剂量。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量在本文的本节中进行确定。在某些实施例中，基于血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第二测量值与血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第一测量值之间的差异，确定actriib配体陷阱的后续剂量。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或
15mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.75mg/kg、约0.8mg/kg、约1.0mg/kg、约1.33mg/kg、或约1.5mg/kg、或约1.75mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.1mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.3mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.5mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.6mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.75mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约0.8mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约1.0mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约1.33mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约1.5mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约1.75mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约2mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约5mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约10mg/kg。在某些实施例中，actriib配体陷阱的后续剂量为约15mg/kg。
[0165]
在某些实施例中，actiib配体陷阱的后续剂量比actriib配体陷阱的初始剂量高约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比初始剂量高约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、或约0.5mg/kg。
[0166]
在某些实施例中，actiib配体陷阱的后续剂量比actiib配体陷阱的初始剂量高约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比初始剂量低约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、或约0.5mg/kg。
[0167]
在某些实施例中，actiib配体陷阱的后续剂量的施用频率高于actiib配体陷阱的初始剂量的施用频率。在某些实施例中，actiib配体陷阱的后续剂量的施用频率低于actiib配体陷阱的初始剂量的施用频率。在某些实施例中，actiib配体陷阱的后续剂量的施用频率与actiib配体陷阱的初始剂量的施用频率相同。在某些实施例中，每14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天或28天施用后续剂量
15029)、mtor抑制剂10(cas编号：1222999-54-3；参见例如，liu等人,2011,bioorg.med.chem.lett.[生物有机与药物化学快报]21(13):4036-4040)、mtor/hdac1-in-12l((r)-n-(4-(1-(7-(羟氨基)-7-氧代庚基)-4-吗啉代-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)苯基)-2-甲基吗啉-4-甲酰胺)、mtorc1-in-1(2-(4-((2,4,6-三甲基-3-(4-(3-(甲基磺酰基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)-1-基)苄腈)、mtor-in-1(cas编号：1207358-59-5)、mtor-in-17((e)-6-(苯基二氮烯基)-1h-二吡唑并[1,5-a:4',3'-e]嘧啶-3,4,7-三胺)、氯硝柳胺、nv-128(ly-303511)、nvp-bgt226、奥米利塞、osi-027、osu-53、帕洛米德(palomid)529(p529)、哌立福新(perifosine)、pf 05212384、pf-04691502、pf-04979064、pi 103盐酸盐、pki-402、pki-587(吉达利塞(gedatolisib))、pp 121、pp-242(拓克尼布(torkinib))、pp30、pqr-620、ql-ix-55、rapalink、白藜芦醇、sar245409、ly294002、渥曼青霉素、槲皮素、杨梅素、星形孢菌素、sf1126、sf2523、stk16-in-1、舒尼替尼、torin 1、torin 2、三乙酰基芦荟大黄素、vs-5584、way-600、wjd008、wye-125132(wye-132)、wye-354、wye-687、xl388、xl-765(沃他利司(voxtalisib)，sar245409)、(+)-松萝酸、山金车内酯d、bgt226马来酸盐(nvp-bgt226马来酸盐)、cbz-b3a、cc-115盐酸盐、环维黄杨星d、二氢杨梅素(白蔹素或蛇葡萄素)、ft-1518、gne-317、黑海常春藤苷a1、jr-ab2-011、ku-0060648、nsc781406、pi-103、重楼皂苷i、橙桑黄酮(nsc 5113)、pqr-530、rheb抑制剂nr1、铁冬青酸、或wye-687。
[0172]
在某些实施例中，mtor抑制剂选自由以下组成的组：雷帕霉素、地磷莫司、依维莫司、替西罗莫司、利达福莫司、他克莫司(fk-506)、咗他莫司(abt-578)、3,3-二吲哚甲烷(dim)、32脱氧雷帕霉素(sar943)、3-甲基腺嘌呤、沙蟾毒精、azd 3147、azd-2014(维妥替)、azd8055、bc-li-0186、bez235(达克利司)、比米利司(pqr309)、、cc-115、cc-223(奥纳塔替)、大黄酸(大黄酚)、环吡酮胺、cid3528206、cidd0067106、化合物401、姜黄素、cz415、ecf 309、表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)、etp 45658、etp-46464、gdc-0084、gdc-0349、gdc-0980(阿托利司，rg7422)、染料木素、gne-477、gne-493、gsk1059615、gsk-2126458(奥米利塞)、icsn3250、ink-128(mln0128，沙帕替)、ku-0063794、ly3023414(沙托利塞)、me-344(nv-344)、二甲双胍、mhy1485、mti-31(lxi-15029)、mtor抑制剂10(cas编号：1222999-54-3)、mtor/hdac1-in-12l、mtorc1-in-1、mtor-in-1、mtor-in-17、氯硝柳胺、nv-128(ly-303511)、nvp-bgt226、奥米利塞、osi-027、osu-53、帕洛米德529(p529)、哌立福新、pf 05212384、pf-04691502、pf-04979064、pi 103盐酸盐、pki-402、pki-587(吉达利塞)、pp 121、pp-242(拓克尼布)、pp30、pqr-620、ql-ix-55、rapalink、白藜芦醇、sar245409、ly294002、渥曼青霉素、槲皮素、杨梅素、星形孢菌素、sf1126、sf2523、stk16-in-1、舒尼替尼、torin 1、torin 2、三乙酰基芦荟大黄素、vs-5584、way-600、wjd008、wye-125132(wye-132)、wye-354、wye-687、xl388、xl-765(沃他利司，sar245409)、(+)-松萝酸、山金车内酯d、bgt226马来酸盐(nvp-bgt226马来酸盐)、cbz-b3a、cc-115盐酸盐、环维黄杨星d、二氢杨梅素(白蔹素或蛇葡萄素)、ft-1518、gne-317、黑海常春藤苷a1、jr-ab2-011、ku-0060648、nsc781406、pi-103、重楼皂苷i、橙桑黄酮(nsc5113)、pqr-530、rheb抑制剂nr1、铁冬青酸、和wye-687。在某些实施例中，mtor抑制剂选自由以下组成的组：雷帕霉素、地磷莫司、依维莫司、替西罗莫司、利达福莫司、他克莫司(fk-506)和咗他莫司(abt-578)。
[0173]
在某些实施例中，mtor抑制剂是atp竞争性抑制剂。
[0174]
在某些实施例中，将mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物口服施用于受试者。在某些实施例中，将mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物每日施用于受试者。在某些实施例中，每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天或28天向受试者施用mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物。
[0175]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的剂量为约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、或约15mg/kg。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的剂量为约0.1mg至约0.5mg、约0.5mg至约1.0mg、约1mg至约5mg、约5mg至约10mg、或约10mg至约15mg。
[0176]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的剂量为初始剂量。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)的初始剂量为约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、或约15mg/kg。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的初始剂量为约0.1mg/kg至约0.5mg/kg、约0.5mg/kg至约1.0mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至约15mg/kg、或约15mg/kg至约50mg/kg。
[0177]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的剂量为后续剂量。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的后续剂量根据本文的本节中提供的方法进行确定。在某些实施例中，基于血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第二测量值与血红蛋白浓度、血细胞比容、mch、mcv、mcv、chc、rdw、网织红细胞、脾脏尺寸、或脾脏体积的第一测量值之间的差异，确定mtor抑制剂或其药学上可接受的盐或水合物的后续剂量。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的后续剂量为约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、或约15mg/kg。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的初始剂量为约0.1mg/kg至约0.5mg/kg、约0.5mg/kg至约1.0mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至约15mg/kg、或约15mg/kg至约50mg/kg。
[0178]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的后续剂量比mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的初始剂量高约0.5mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约
3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比初始剂量高约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、或约0.5mg/kg。
[0179]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的后续剂量比mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)或其药学上可接受的盐或水合物的初始剂量低约0.5mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、或约35mg，或比初始剂量低约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、或约0.5mg/kg。6.5患者体
[0180]
根据本文所述的方法的受试者可以是任何哺乳动物，例如啮齿类动物和灵长类动物，并且在一个优选的实施例中，是人。
[0181]
在某些实施例中，受试者是输注依赖性的。
[0182]
在某些实施例中，受试者是输注非依赖性的。
[0183]
在某些实施例中，本文所述的方法可用于在本文所述的受试者中贫血，例如与无效造血或地中海贫血相关的贫血。
[0184]
在某些实施例中，本文所述的方法可用于在本文所述的受试者中增强晚期红细胞生成。
[0185]
在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者(参见6.3节)患有β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是输注依赖性β-地中海贫血。输注依赖性β-地中海贫血也被称为“库利氏贫血”。在某些实施例中，β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是非输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是非中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者患有hbe/β地中海贫血。在某些实施例中，受试者(i)患有重型β-地中海贫血；(ii)患有严重hbe/β-地中海贫血；以及(iii)是输注依赖性的。在某些实施例中，受试者(i)患有中间型β-地中海贫血；(ii)患有轻度/中度hbe/β-地中海贫血；以及(iii)是非输注依赖性的。
[0186]
在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者(参见6.3节)患有输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者已被诊断患有输注依赖性β-地中海贫血。在某些
实施例中，受试者已被诊断患有β-地中海贫血和血红蛋白e。在某些实施例中，诊断已通过遗传分析确认。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者包含基因型，该基因型包含针对突变β球蛋白等位基因的纯合性或复合杂合性。在某些实施例中，纯合性包含β0/β0，其中β0是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因。在某些实施例中，纯合性包含β
+
/β
+
，其中β
+
是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含β0/β
+
，其中β0是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因，并且其中β
+
是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含β0/hbe，其中β0是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因，并且其中hbe是指血红蛋白e。在某些实施例中，复合杂合性包含β
+
/hbe，其中β
+
是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因，并且其中hbe是指血红蛋白e。在某些实施例中，受试者患有症状性地中海贫血。在某些实施例中，受试者患有共遗传的α-球蛋白基因重复。在某些实施例中，受试者已被诊断患有输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，诊断已通过遗传分析确认。在某些实施例中，受试者是人婴儿受试者。在某些实施例中，受试者患有遗传性胎儿血红蛋白持续症。
[0187]
在某些实施例中，本文所述的方法可用于在本文所述的受试者中mds和/或非增殖性cmml。
[0188]
在某些实施例中，通过本文所述的方法的贫血是由于蛋白质沉淀、蛋白质聚集和蛋白质构象变化引起的贫血。
[0189]
在某些实施例中，本文所述的方法可用于其他血红蛋白病，例如镰状细胞贫血。
[0190]
在某些实施例中，本文所述的方法可用于对任何红细胞生成刺激剂或红细胞生成素(epo)具有抗性的任何贫血。
[0191]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者中为环形铁粒幼细胞的幼红细胞的百分比为至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、或至少20％。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者中为环形铁粒幼细胞的幼红细胞的百分比为至少15％。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者中为环形铁粒幼细胞的幼红细胞的百分比为约15％。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者中为环形铁粒幼细胞的幼红细胞的百分比为约10％至约20％。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者中为环形铁粒幼细胞的幼红细胞的百分比为约12％至17％。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者具有至少1:10、至少1:7、或至少1:5的环形铁粒幼细胞与正常幼红细胞的比率。
[0192]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有血液相关障碍。在某些实施例中，血液相关障碍为贫血。在某些实施例中，血液相关障碍为需要输注的贫血。在某些实施例中，血液相关障碍为mds。在某些实施例中，血液相关障碍为非增殖性cmml。
[0193]
在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者可以是任何年龄。在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者小于18岁。在特定的实施例中，根据本文所述的方法的受试者小于13岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法的受试者小于12岁、小于11岁、小于10岁、小于9岁、小于8岁、小于7岁、小于6岁或小于5岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法的受试者是1-3岁、3-5岁、5-7岁、7-9岁、9-11
岁、11-13岁、13-15岁、15-20岁、20-25岁、25-30岁、或大于30岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法的受试者是30-35岁、35-40岁、40-45岁、45-50岁、50-55岁、55-60岁、或大于60岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法的受试者是60-65岁、65-70岁、70-75岁、75-80岁、或大于80岁。
[0194]
在某些实施例中，受试者需要定期的、终生的红细胞输注。在某些实施例中，受试者具有高输注负担。在某些实施例中，高输注负担是根据本文提供的方法进行之前24周内12个或更多个红细胞单位。在某些实施例中，受试者具有低输注负担。在某些实施例中，低输注负担是根据本文提供的方法进行之前24周内7-12个红细胞单位。
[0195]
在某些实施例中，受试者患有一种或多种输注依赖性β-地中海贫血临床并发症。输注依赖性β-地中海贫血临床并发症的非限制性实例包括生长迟缓、苍白、黄疸、肌肉组织不良、膝外翻、肝脾肿大、腿部溃疡、髓外造血导致的肿块发展、和骨髓扩张导致的骨骼变化。在某些实施例中，受试者患有一种或多种慢性红细胞输注并发症。慢性红细胞输注并发症的非限制性实例包括输注相关感染，例如像，乙型肝炎病毒感染、丙型肝炎病毒感染和人类免疫缺陷病毒感染，同种异体免疫，以及因铁过载导致的器官损伤，例如像，肝脏损伤、心脏损伤和内分泌腺损伤。
[0196]
在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者(参见6.3节)患有非输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者已被诊断患有β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者已被诊断患有β-地中海贫血和血红蛋白e。在某些实施例中，β-地中海贫血已通过遗传分析确认。在某些实施例中，非输注依赖性β-地中海贫血是中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，非输注依赖性β地中海贫血是轻度-中度血红蛋白e/β-地中海贫血。在某些实施例中，非输注依赖性β-地中海贫血不需要定期的红细胞输注。在某些实施例中，受试者很少需要红细胞输注。在某些实施例中，非输注依赖性β-地中海贫血在生命后期需要定期的红细胞输注。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前24周的时间段期间受试者已接受0-6个红细胞单位。在某些实施例中，受试者具有小于10.0g/dl的平均基线血红蛋白水平。
[0197]
在某些实施例中，β-地中海贫血是非输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是非中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者包含基因型，该基因型包含复合杂合性。在某些实施例中，复合杂合性包含β0等位基因，其中β0是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含β
+
等位基因，其中β
+
是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含β0/β
+
，其中β0是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因，并且其中β
+
是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含一个或多个血红蛋白变体。在某些实施例中，血红蛋白变体是血红蛋白e。在某些实施例中，受试者(i)包含含有两个严重β球蛋白链突变的共遗传的基因型，并且(ii)患有α-地中海贫血。在某些实施例中，受试者(i)包含含有两个严重β球蛋白链突变的共遗传的基因型，并且(ii)患有遗传性胎儿血红蛋白持续症。在某些实施例中，受试者患有症状性地中海贫血。在某些实施例中，受试者患有共遗传的α-球蛋白基因重复。在某些实施例中，受试者已被诊断患有β-地中海贫血。在某些实施例中，诊断已通过遗传分析确认。
[0198]
在某些实施例中，受试者表现一种或多种非输注依赖性β-地中海贫血临床并发
症。非输注依赖性β-地中海贫血临床并发症的非限制性实例包括内分泌异常，例如像，糖尿病、甲状腺功能减退、性腺功能减退、血栓性事件、肺动脉高压、高凝性、生命后期输注依赖性的发展、无效造血、骨髓髓质外造血组织扩张、髓外造血肿块形成、骨骼畸形、骨质减少、骨质疏松症、骨痛、胆结石、和腿部溃疡。在某些实施例中，受试者展现同种异体免疫。
[0199]
在某些实施例中，受试者表现β-地中海贫血症状的轻度症状。在某些实施例中，受试者具有接近正常的生长。
[0200]
在某些实施例中，非输注依赖性β-地中海贫血受试者表现严重症状。严重症状的非限制性实例包括生长迟缓、发育迟缓和骨骼畸形。
[0201]
在某些实施例中，受试者患有脾肿大。在某些实施例中，脾肿大在受试者生命的前6-12个月内发展。
[0202]
在某些实施例中，受试者在该受试者生命的前10年期间生长受损。
[0203]
在某些实施例中，受试者展现小细胞低素性贫血。在某些实施例中，与参考体(例如，如6.9节中所述的参考体)中的血红蛋白a2水平相比，在根据本文提供的方法受试者前该受试者中的血红蛋白a2水平升高。在某些实施例中，与参考体(例如，如6.9节中所述的参考体)中的胎儿血红蛋白水平相比，在根据本文提供的方法受试者前该受试者中的胎儿血红蛋白水平升高。
[0204]
在某些实施例中，受试者不表达血红蛋白s。
[0205]
在某些实施例中，受试者不表达血红蛋白s。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前(参见6.3节)12周内受试者未接受红细胞输注，其中该受试者患有非输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者未患活动性丙型肝炎感染。在某些实施例中，受试者未患活动性乙型肝炎感染。在某些实施例中，受试者对人类免疫缺陷病毒不是阳性的。在某些实施例中，受试者未患胰岛素依赖型糖尿病。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前3个月内未向受试者施用红细胞生成刺激剂。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前168天内受试者未经历铁螯合疗法。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前168天内受试者未经历羟基脲。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前168天内未向受试者施用双膦酸盐。在某些实施例中，受试者未患不受控高血压。根据nci ctcae 4.0版，不受控高血压是指》1级。在某些实施例中，受试者未患alt大于正常值上限3倍的肝脏疾病。在某些实施例中，受试者未患具有如通过肝脏活组织检查确定的肝硬化/纤维化的组织病理学证据的肝脏疾病。在某些实施例中，受试者未患心脏疾病。可通过纽约心脏协会(new york heart association)将心脏疾病或心力衰竭分类为3级或更高级。在某些实施例中，受试者未患需要的心律失常。在某些实施例中，受试者未患肺部疾病。肺部疾病的非限制性实例包括肺纤维化和肺动脉高压。在某些实施例中，如通过cockroff-gault方法确定，受试者的肌酐清除率不小于60ml/min。在某些实施例中，受试者未患叶酸缺乏症。在某些实施例中，受试者没有3级或更高级的蛋白尿。在某些实施例中，受试者未患肾上腺功能不全。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前30天内受试者未经历重大手术，除非其中重大手术是脾切除术。在某些实施例中，受试者没有对重组蛋白的严重变应性或过敏性反应或超敏性的病史。在某些实施例中，受试者未经历长期抗凝血疗法。抗凝血疗法的非限制性实例包括肝素和华法林。在某些实施例中，在根据本文提供的方法进行之前28天内受试者未经历使用细胞毒性剂、全身皮
质类固醇、免疫抑制剂、或抗凝血疗法的。
[0206]
在某些实施例中，受试者正经历其他介入。其他介入的非限制性实例包括脾切除术、输注疗法、铁螯合疗法、和胎儿血红蛋白诱导剂。在某些实施例中，受试者需要铁螯合疗法。对于组合疗法的描述参见6.3.1节。
[0207]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)已被诊断患有ipss-r定义的mds。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者已被诊断患有ipss-r定义的mds，并且该受试者中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、或至少20％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。
[0208]
ipss-r是指国际预后评分系统-修订版，其用于评价骨髓增生异常综合征的预后。参见例如，greenberg等人,2012,blood[血液]120(12):2454-2465和erratum in blood[血液勘误表],1998；91:1100。ipss-r采用标准分数系统将骨髓增生异常综合征患者的结果表征为极低危(小于或等于1.5分；中位生存期为8.8年)、低危(大于1.5分，小于或等于3分；中位生存期为5.3年)、中危(大于3分，小于或等于4.5分；中位生存期为3年)、高危(大于4.5分，小于或等于6分；中位生存期为1.6年)、或极高危(大于6分；中位生存期为0.8年)。该分数系统尤其对以下进行评价：(i)受试者的骨髓原始细胞的百分比；(ii)受试者的核型；以及(iii)和受试者的血细胞减少(定义为血红蛋白浓度小于10g/dl，中性粒细胞绝对计数小于1,800/μl，并且血小板计数小于100,000/μl)。
[0209]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)已被诊断患有非增殖性cmml。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者已被诊断患有非增殖性cmml，并且该受试者中至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、或至少20％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。
[0210]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)患有mds。在某些实施例中，mds是ipss定义的低危mds。在某些实施例中，mds是ipss定义的中危-1mds。在某些实施例中，mds是ipss定义的中危-2mds。在某些实施例中，mds是ipss定义的高危mds。在某些实施例中，mds是ipss-r定义的极低危mds。在某些实施例中，mds是ipss-r定义的低危mds。在某些实施例中，mds是ipss-r定义的中危mds。在某些实施例中，mds是ipss-r定义的高危mds。在某些实施例中，mds是ipss-r定义的极高危mds。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，并且(ii)患有rars。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，并且(ii)患有rcmd-rs。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，并且(iii)患有rcmd-rs。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，并且(ii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，并且(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rcmd-rs，并且(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，(iii)患有rcmd-rs，并且(iv)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，并且(iii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本
文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rcmd-rs，并且(iii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，(iii)患有rcmd-rs，并且(iv)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(iii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(iv)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rcmd-rs，(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(iv)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有mds，(ii)患有rars，(iii)患有rcmd-rs，(iv)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(v)表达具有一个或多个突变的sf3b1。
[0211]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)患有非增殖性cmml。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，并且(ii)患有rars。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，并且(ii)患有rcmd-rs。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，并且(iii)患有rcmd-rs。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，并且(ii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，并且(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rcmd-rs，并且(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，(iii)患有rcmd-rs，并且(iv)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，并且(ii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，并且(iii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rcmd-rs，并且(iii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，(iii)患有rcmd-rs，并且(iv)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(iii)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(iv)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rcmd-rs，(iii)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(iv)表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有(i)患有非增殖性cmml，(ii)患有rars，(iii)患有rcmd-rs，(iv)该受试者中至少15％的幼红细胞是环形铁粒幼细胞，并且(v)表达具有一个或多个突变的sf3b1。
[0212]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)表达具有与无效造血相关的突变的基因。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达包含一个或多个突变的一个或多个剪接因子基因。在特定的实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有一个或多个突变的sf3b1。在某些实施例中，一个或多个突变是在非编码区内。在某些实施例中，sf3b1是编码sb3b1的基因。在某些实施例中，一个或多个突变是在编码区内。在某些实施例中，sf3b1是sf3b1蛋白。在某些实施例中，sf3b1蛋白中的一个或多个突变选自由以下组成的组：e622d、r625c、h662q、h662d、k66n、k666t、k666q、k666e、a672d、k700e、i704n。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变e622d的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变r625c的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变h662q的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变h662d的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变k66n的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变k666t的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变k666q的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变k666e的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变a672d的sf3b1蛋白。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变k700e的sf3b1。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有突变i704n的sf3b1蛋白。在特定的实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有一个或多个突变的srsf2。在特定的实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有一个或多个突变的dnmt3a。在特定的实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有一个或多个突变的tet2。在特定的实施例中，根据本文提供的方法的受试者表达具有一个或多个突变的setbp1。
[0213]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)患有血小板减少症。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者具有小于1x10
11
个血小板/升。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有中性粒细胞减少症。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者具有小于1x109/升的中性粒细胞绝对计数。
[0214]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者具有小于13,000个白细胞/μl、小于12,000个白细胞/μl、小于11,000个白细胞/μl、小于10,000个白细胞/μl、小于7,500个白细胞/μl、或小于500个白细胞/μl。
[0215]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者中的血红蛋白水平小于10g/dl、9g/dl、8g/dl或7g/dl。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者的血红蛋白水平为7g/dl至7.5g/dl、7.5g/dl至8g/dl、8g/dl至8.5g/dl、8.5g/dl至9.0g/dl、9.0g/dl至9.5g/dl、或9.5g/dl至10.0g/dl。
[0216]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)具有低输注负担。在某些实施例中，根据本文提供的方法的具有低输注负担的受试者需要最多0、1、2或3个单位的红细胞/8周。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)具有高输注负担。在某些实施例中，根据本文提供的方法的具有高输注负担的受试者需要至少4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个单位的红细胞/8周。
[0217]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者对一种或多种esa没有应答、丧失应答或应答几率低。
[0218]
在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者(参见6.3节)已经经历过使用一种或多种esa的既往或目前正在经历使用一种或多种esa的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者已经经历过使用低甲基化剂(hypomethylating agent)的既往。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者已经经历过使用来那度胺(lenalidomine)的既往。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者未经历使用阿扎胞苷、地西他滨、esa、g-csf、gm-csg或来那度胺的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者对使用一种或多种esa的没有应答。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者对使用一种或多种esa的是难治性的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者对使用一种或多种esa的变成难治性的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者对既往esa是难治性的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者是对既往esa是难治性的受试者，其具有对于既往含有esa的方案(作为单药剂或(例如，与g-csf)组合)无应答或应答不再维持的记录；该esa方案必须是(a)大于40,000iu/周的重组人红细胞生成素持续至少8个剂量或等同方案，或(b)每三周一次大于500μg的达贝泊汀α(darbepoetin alpha)持续至少4个剂量或等同方案。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者对既往esa是不耐受的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者是对既往esa不耐受的受试者，其具有在引入之后的任何时间由于不耐受或不良事件而中止既往含有esa的方案(作为单药剂或(例如，与g-csf)组合)的记录。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者是esa-无资格的。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者是esa-无资格的受试者，其对esa的应答几率低，这是基于先前未使用esa的受试者的内源性血清红细胞生成素水平大于200u/l。
[0219]
在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者(参见6.3节)患有mds。在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者患有mds，并且具有完整的染体5q。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有mds，具有完整的染体5q，并且没有使用来那度胺失败的记录。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有mds，具有完整的染体5q，并且具有使用来那度胺失败的记录。在某些实施例中，根据本文所述的方法的受试者患有mds伴染体5q缺失。mds伴染体5q缺失包括5号染体长臂的缺失，并且特征尤其是大细胞性贫血伴椭圆形大红细胞、白细胞计数正常至略微减少、血小板计数正常至升高、以及骨髓和血液中的原始细胞小于5％。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有mds伴染体5q缺失，并且没有使用来那度胺失败的记录。在某些实施例中，根据本文提供的方法的受试者患有mds伴染体5q缺失，并且具有使用来那度胺失败的记录。在某些实施例中，使用来那度胺失败包括对来那度胺丧失应答、在使用来那度胺4个月后对来那度胺没有应答、对使用来那度胺的不耐受、或发生妨碍使用来那度胺的的血细胞减少。6.6药物组合物
[0220]
在某些实施例中，actriib配体陷阱和mtor抑制剂被配制为适用于本文所述的组合。
[0221]
在某些实施例中，将actriib配体陷阱和mtor抑制剂与药学上可接受的载体一起配制用于与本文所述的方法一起使用。
[0222]
在某些实施例中，将actriib配体陷阱和mtor抑制剂一起配制用于肠胃外施用。
[0223]
在某些实施例中，将actriib配体陷阱和mtor抑制剂一起配制用于皮下施用。
[0224]
在某些实施例中，将actriib配体陷阱与药学上可接受的载体一起配制用于与本文所述的方法一起使用。
[0225]
在一个优选的实施例中，actriib配体陷阱被配制用于皮下施用。
[0226]
在另一个优选的实施例中，将actriib配体陷阱作为无菌、无防腐剂的冻干粉末或饼包装在容器中。在某些实施例中，容器包含25mg的actriib配体陷阱。在某些实施例中，包含25mg的actriib配体陷阱的容器包含总共37.5mg的蛋白质。在某些实施例中，包含25mg的actriib配体陷阱的容器中的actriib配体陷阱用0.68ml的注射用水重构。在某些实施例中，容器包含75mg的actriib配体陷阱。在某些实施例中，包含75mg的actriib配体陷阱的容器包含总共87.5mg的蛋白质。在某些实施例中，包含75mg的actriib配体陷阱的容器中的actriib配体陷阱用1.6ml的注射用水重构。在某些实施例中，将容器中的actriib配体陷阱用一定体积的注射用水重构，使得注射用水中重构的actriib配体陷阱的最终浓度是50mg/ml，ph是大约6.5。在某些实施例中，容器在2℃至8℃储存。在某些实施例中，容器是具有灰丁基涂层塞的3ml玻璃小瓶。
[0227]
在某些实施例中，本文提供的方法包括将组合物(包含actriib配体陷阱)作为植入物或装置全身或局部施用。当施用时，本文提供的用于使用的组合物是无热原的生理学上可接受的形式。除了actriib配体陷阱之外的其他上有用的药剂(也可以任选地包括在如上所述的组合物中)可以与主题化合物(例如，actriib配体陷阱，参见6.7节)同时或顺序施用。
[0228]
在某些实施例中，肠胃外施用actriib配体陷阱。在一个优选的实施例中，将皮下施用actriib配体陷阱。适合用于肠胃外施用的药物组合物可以包含与以下项组合的一种或多种actriib多肽：一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳剂、或可以在使用之前即刻重构于无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，这些溶液、分散液、悬浮液或乳剂、或无菌粉末可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。可以在用于本文所述方法的药物组合物中使用的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如油酸乙酯)。例如，可以通过使用包衣材料(例如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒径、以及通过使用表面活性剂来维持适宜的流动性。
[0229]
本文所述的组合物还可以含有辅助剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂以及分散剂。可以通过包括多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)来确保防止微生物的作用。还希望在组合物中包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，可以通过包括延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝和明胶)引起可注射药物形式的延长吸收。
[0230]
应理解，剂量方案将由主治医师考虑调节本文所述的化合物(例如，actriib配体陷阱(参见6.7节))的作用的各种因素来确定。
[0231]
在某些实施例中，actriib配体陷阱在药物组合物中是基本上纯的。特别地，药物
组合物中最多20％、10％、5％、2.5％、1％、0.1％或最多0.05％的化合物是actriib配体陷阱和药学上可接受的载体之外的化合物。
[0232]
在某些实施例中，将mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)与药学上可接受的载体一起配制用于与本文所述的方法一起使用。
[0233]
在一个优选的实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)被配制用于口服施用。
[0234]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)被配制用于肠胃外施用。在另一个优选的实施例中，将mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)作为无菌、无防腐剂的冻干粉末或饼包装在容器中。
[0235]
在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)呈胶囊或片剂的形式。在某些实施例中，mtor抑制剂(例如，雷帕霉素)呈微片剂或微丸的形式，并且其中这些微片剂或微丸被肠溶包衣。在某些实施例中，微片剂或微丸包含在胶囊中。6.7actriib配体陷阱
[0236]
在某些实施例中，本节中描述的actriib配体陷阱可用于本文提供的方法中(参见6.3节)。在某些实施例中，用于与本方法一起使用的actriib配体陷阱包含seq id no:11的氨基酸序列。在某些实施例中，用于与本方法一起使用的actriib配体陷阱是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码seq id no:11的seq id no:34的核苷酸序列或seq id no:34的简并形式。
[0237]
如本文所用，术语“actriib”是指来自任何物种的激活素受体iib型(actriib)蛋白的家族以及通过诱变或其他修饰衍生自此类actriib蛋白的变体。本文提及actriib应理解为是提及目前鉴定的受体形式中的任一种。actriib家族的成员通常是跨膜蛋白，由具有富半胱氨酸区的细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的细胞质结构域构成。
[0238]
本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包括但不限于激活素结合可溶性actriib多肽；与激活素(特别是激活素a或b亚基，也称为βa或βb)结合并破坏actriib结合的抗体；与actriib结合并破坏激活素结合的抗体；针对激活素或actriib结合选择的非抗体蛋白；以及针对激活素或actriib结合选择的随机肽，它们可以与fc结构域缀合。
[0239]
在某些实施例中，具有激活素或actriib结合活性的两种或更多种不同的蛋白质(或其他部分)，尤其是分别阻断i型(例如，可溶性i型激活素受体)和ii型(例如，可溶性ii型激活素受体)结合位点的激活素结合蛋白可以连接在一起，以产生抑制actriib的双功能或多功能结合分子，因此可用于本文所述组合物和方法中。在某些实施例中，抑制actriib的激活素-actriib信号传导轴拮抗剂包括用于本文所述组合物和方法中的核酸适体、小分子和其他药剂。
[0240]
此类actriib配体陷阱可以如先前在国际公开号wo2014/066486的5.5.2节中所述产生和修饰，将该国际公开以其全文并入本文。(a)包含actriib抗体的actriib配体陷阱
[0241]
在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包括与激活素(特别是激活素a或b亚基)结合并破坏actriib结合的抗体。(b)包含actriib多肽的actriib配体陷阱
[0242]
如本文所用，术语“actriib多肽”是指包含actriib家族成员的任何天然存在的多
肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。例如，actriib多肽包括衍生自任何已知actriib受体的序列的多肽，该受体具有以下序列，该序列与actriib多肽的序列具有至少约80％的同一性，任选地至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性。例如，actriib多肽可以结合并抑制actriib蛋白和/或激活素的功能。actriib多肽的实例包括人actriib前体多肽(seq id no:2或seq id no:14)。对于其氨基酸序列以seq id no:2或seq id no:14描述的actriib前体多肽(即人actriib前体多肽)，actriib前体多肽的信号肽位于氨基酸1-18处；细胞外结构域位于氨基酸19至134处，并且可能的n-连接糖基化位点位于氨基酸位置42和65处。编码seq id no:2的人actriib前体多肽的核酸序列被披露为seq id no:5(seq id no:5提供了在对应于氨基酸位置64的密码子处的丙氨酸，但本领域技术人员可使用本领域已知的方法容易地对其进行修饰，以提供对应于氨基酸位置64的密码子处的精氨酸取而代之)。有关序列的描述参见表1。
[0243]
本文所述的所有actriib相关多肽的氨基酸编号是基于seq id no:2和seq id no:14(不同之处仅为在位置64处表达的氨基酸)的氨基酸编号，除非另外具体指定。例如，如果actriib多肽被描述为在氨基酸位置79处具有取代/突变，则要理解为位置79是指衍生出actriib多肽的seq id no:2或seq id no:14中的第79个氨基酸。同样，如果actriib多肽被描述为在氨基酸位置64处具有丙氨酸或精氨酸，则要理解为位置64是指衍生出actriib多肽的seq id no:2或seq id no:14中的第64个氨基酸。
[0244]
在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含含有actriib的激活素结合结构域的多肽。在某些实施例中，actriib的激活素结合结构域包含actriib的细胞外结构域或其部分。在特定实施例中，actriib的细胞外结构域或其部分是可溶的。actriib多肽的说明性修饰形式在美国专利申请公开号20090005308和20100068215中披露，其披露内容通过引用以其全文并入本文。
[0245]
在特定实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱是可溶性actriib多肽。术语“可溶性actriib多肽”通常指包含actriib蛋白的细胞外结构域(包括actriib蛋白的任何天然存在的细胞外结构域及其任何变体(包括突变体、片段和肽模拟物形式))的多肽。可溶性actriib多肽可以与激活素结合；然而，野生型actriib蛋白在与激活素相对于gdf8/11的结合方面没有表现出显著的选择性。在某些实施例中，具有不同结合特性的actriib的改变形式可以用于本文提供的方法中。例如，在国际专利申请公开号wo 2006/012627和wo 2010/019261中披露了此类改变形式，其披露内容通过引用以其全文并入本文。通过将天然或改变的actriib蛋白与第二激活素选择性结合剂偶联，可以增加这些天然或改变的actriib蛋白对激活素的特异性。示例性的可溶性actriib多肽包括人actriib多肽的细胞外结构域(例如，seq id no:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29)。
[0246]
hilden等人(blood[血液],1994,83(8):2163-70)披露的具有actriib细胞外序列的fc融合蛋白，其在对应于actriib前体氨基酸序列(即seq id no:2)的氨基酸64的位置处具有丙氨酸(在本文中称为“a64”)，已被证明对激活素和gdf-11具有相对较低的亲和力。相比之下，在actriib前体氨基酸序列的位置64处具有精氨酸(在本文中称为“r64”)的fc融合蛋白对激活素和gdf-11具有低纳摩尔至高皮摩尔范围内的亲和力(参见例如，美国专利申
请公开号20100068215，将其披露内容以其全文并入本文)。在位置64处具有精氨酸的actriib前体氨基酸序列以seq id no:14表示。这样，在某些实施例中，根据本文所述组合物和方法使用的actriib多肽可包含(i)在对应于actriib前体氨基酸序列(即seq id no:2)的氨基酸64的位置处的丙氨酸；或(ii)actriib前体氨基酸序列(即seq id no:14)的位置64处的精氨酸。在其他实施例中，根据本文所述组合物和方法使用的actriib多肽可以在对应于actriib前体氨基酸序列(即seq id no:2或seq id no:14)的氨基酸64的位置处包含不是丙氨酸或精氨酸的氨基酸。
[0247]
已经表明，actriib细胞外结构域的c末端处脯氨酸结的缺失降低了受体对激活素的亲和力(参见例如，attisano等人,cell[细胞],1992,68(1):97-108)。相对于含有seq id no:14的氨基酸20-134(即seq id no:17)的actriib-fc融合蛋白“actriib(20-134)-fc”(其包括脯氨酸结区域和完整的近膜结构域)，含有seq id no:14的氨基酸20-119(即seq id no:18)的actriib-fc融合蛋白“actriib(20-119)-fc”对gdf-11和激活素的结合减少。然而，相对于actriib的非截短的细胞外结构域，含有seq id no:14的氨基酸20-129的actriib-fc融合蛋白“actriib(20-129)-fc”保留了相似但略微降低的活性，即使脯氨酸结区域被破坏。因此，预期包含终止于seq id no:14(或seq id no:2)的氨基酸134、133、132、131、130和129处的细胞外结构域的actriib多肽都是有活性的，但终止于氨基酸134或133的构建体可能是活性最强的。类似地，预期在任何残基129-134处的突变不会大幅度改变配体结合亲和力，如seq id no:14的p129和p130的突变不会显著降低配体结合的事实所表明的。因此，根据本文所述方法和组合物使用的actriib多肽可止于早至seq id no:14(或seq id no:2)的氨基酸109(即，最后的半胱氨酸)，然而，预期止于seq id no:14(或seq id no:2)的氨基酸位置109和119处或其之间的形式的配体结合能力降低。
[0248]
seq id no:2和seq id no:14的氨基酸29代表actriib前体序列中的起始半胱氨酸。预期始于seq id no:2或seq id no:14的n末端的氨基酸29或这些氨基酸位置之前开始的actriib多肽，将保持配体结合活性。seq id no:2或seq id no:14的位置24处的丙氨酸到天冬酰胺的突变引入了n-连接糖基化序列，而基本上不影响配体结合。这证实了信号切割肽和半胱氨酸交联区之间的区域(对应于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-29)中的突变是极大被接受的。特别地，始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置20、21、22、23和24的actriib多肽将保持活性，还预期始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置25、26、27、28和29的actriib多肽保持活性。始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置22、23、24或25的actriib多肽将具有最大活性。
[0249]
总之，根据本文所述方法和组合物使用的actriib前体蛋白(即seq id no:2或seq id no:14)的活性部分(即actriib多肽)通常包含seq id no:2或seq id no:14的氨基酸29-109，并且此类actriib多肽可以例如从对应于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸19-29中任一个的残基处开始并且在对应于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸109-134中任一个的位置处结束。本文涵盖的actriib多肽的特定实例包括从seq id no:2或seq id no:14的19-29、20-29或21-29的氨基酸位置处开始并且从seq id no:2或seq id no:14的119-134、119-133或129-134、129-133的氨基酸位置处结束的那些。本文涵盖的actriib多肽的其他特定实例包括从seq id no:2或seq id no:14的20-24(或21-24、或22-25)的氨基酸位置处开始并且从seq id no:2或seq id no:14的109-134(或109-133)、119-134(或
119-133)或129-134(或129-133)的氨基酸位置处结束的那些。还考虑落入这些范围内的变体actriib多肽，特别是与seq id no:2或seq id no:14的对应部分具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性或序列同源性的那些。
[0250]
在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含actriib的细胞外结构域的截短形式。截短可以是在actriib多肽的羧基末端和/或氨基末端。在某些实施例中，相对于成熟的actriib多肽细胞外结构域，截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸长度。在某些实施例中，截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟的actriib多肽细胞外结构域的n末端氨基酸。在某些实施例中，截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟的actriib多肽细胞外结构域的c末端氨基酸。例如，actriib的截短形式包括具有氨基酸20-119、20-128、20-129、20-130、20-131、20-132、20-133、20-134、20-131、21-131、22-131、23-131、24-131和25-131的多肽，其中氨基酸位置是指seq id no:2或seq id no:14中的氨基酸位置。
[0251]
actriib的另外示例性截短形式包括(i)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸21-29的任一个的氨基酸(任选地始于seq id no:2或seq id no:14的22-25)和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸109-134的任一个的多肽；(ii)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-29的任一个(任选地始于seq id no:2或seq id no:14的22-25)和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸109-133的任一个的多肽；(iii)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-24的任一个(任选地始于seq id no:2或seq id no:14的22-25)和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸109-133的任一个的多肽；(iv)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸21-24的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸109-134的任一个的多肽；(v)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-24的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸118-133的任一个的多肽；(vi)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸21-24的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸118-134的任一个的多肽；(vii)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-24的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸128-133的任一个的多肽；(viii)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-24的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸128-133的任一个的多肽；(ix)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸21-29的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸118-134的任一个的多肽；(x)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-29的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸118-133的任一个的多肽；(xi)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸21-29的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸128-134的任一个的多肽；以及(xii)始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-29的任一个和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸128-133的任一个的多肽。在特定的实施例中，actriib多肽包含始于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置25和止于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置131的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在另一个特定的实施例中，actriib多肽由或基本上由seq id no:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28或29的氨基酸序列组成。
[0252]
本文所述组合物和方法中使用的actriib多肽的任一个可以作为同源二聚体产
生。本文所述组合物和方法中使用的actriib多肽的任一个可配制成具有异源部分的融合蛋白，该异源部分包含来自igg重链的恒定区，例如fc结构域。本文所述组合物和方法中使用的actriib多肽的任一个可包含在对应于seq id no:2或seq id no:14的位置79的位置处的酸性氨基酸，任选地与相对于seq id no:2或seq id no:14的一个或多个另外的氨基酸取代、缺失或插入组合。
[0253]
在特定实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含具有一个或多个氨基酸取代/突变的actriib的细胞外结构域。这样的氨基酸取代/突变可以是例如seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置79处的亮氨酸交换为酸性氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸。例如，在actriib细胞外结构域多肽中seq id no:2或seq id no:14的位置l79可改变，以赋予改变的激活素-肌生成抑制蛋白(gdf-11)结合特性。与激活素结合相比，l79a和l79p突变在较大程上降低gdf-11结合。l79e和l79d突变保持gdf-11结合，同时表明极大地降低了激活素结合。
[0254]
在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含截短形式的actriib细胞外结构域，该细胞外结构域还携带氨基酸取代，例如seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置79处的亮氨酸交换为酸性氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸。在特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的还携带氨基酸取代的actriib多肽的细胞外结构域的截短形式是seq id no:9。截短的和/或携带一个或多个氨基酸取代的actriib的形式可与上文论述的抗体的fc结构域连接。
[0255]
例如，可通过筛选重组产生自编码actriib多肽的核酸的相应片段的多肽，获得actriib多肽的功能活性片段。此外，片段可使用本领域已知的技术，例如常规的merrifield固相f-moc或t-boc化学过程来化学合成。可产生片段(重组地或通过化学合成)，并对其进行测试，以鉴定可用作actriib蛋白或激活素介导的信号传导的拮抗剂(抑制剂)的那些肽基片段。
[0256]
此外，可通过例如筛选重组产生自编码actriib多肽的相应诱变核酸的修饰多肽的文库，获得actriib多肽的功能活性变体。可产生变体，并对其进行测试，以鉴定可用作actriib蛋白或激活素介导的信号传导的拮抗剂(抑制剂)的那些。在某些实施例中，actriib多肽的功能变体包含与选自seq id no:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。在某些实施例中，功能变体具有与选自seq id no:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。
[0257]
已经表明，由seq id no:2或seq id no:14的残基y31、n33、n35、l38到t41、e47、e50、q53到k55、l57、h58、y60、s62、k74、w78到n83、y85、r87、a92和e94到f101限定了actriib的配体结合口袋。在这些位置，预期保守突变将是被接受的，尽管k74a突变是极大被接受的，r40a、k55a、f82a和位置l79处的突变也是一样。在非洲蟾蜍属(xenopus)中r40是k，表明该位置处的碱性氨基酸将是被接受的。q53在牛actriib中是r且在非洲蟾蜍属actriib中是k，因此包括r、k、q、n和h的氨基酸在该位置处将是被接受的。因此，用于在本文所述方法和组合物中使用的actriib多肽的通式是包含seq id no:2或seq id no:14的氨基酸29-109，但任选地始于seq id no:2或seq id no:14的范围为20-24或22-25的氨基酸位置和止于seq id no:2或seq id no:14的范围为129-134的氨基酸位置，且在配体结合口袋中包含不
超过1、2、5或15个保守氨基酸改变，以及在配体结合口袋中在seq id no:2或seq id no:14的氨基酸位置40、53、55、74、79和/或82处包含零、一个或多个非保守改变的通式。这样的actriib多肽可以保持与seq id no:2或seq id no:14的氨基酸29-109的序列大于80％、90％、95％或99％序列同一性或序列同源性。结合口袋(特别地，此处可以极大接受变异性)外的位点包括actriib的细胞外结构域的氨基和羧基末端以及位置42-46和65-73。seq id no:2或seq id no:14的位置65处天冬酰胺向丙氨酸的改变(n65a)实际上改善了a64背景中的配体结合，并因此预期在r64背景中对配体结合无不利影响。该变化可能会消除a64背景中n65处的糖基化，因此表明在该区域内显著的变化可能是被接受的。尽管r64a变化是不太被接受的，但是r64k是极大被接受的，并因此另一个碱性残基，如h在位置64处可以是被接受的。
[0258]
在特定实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含缀合物/融合蛋白，该缀合物/融合蛋白包含与抗体的fc部分连接的actriib受体的细胞外结构域(例如激活素结合结构域)。此类缀合物/融合蛋白可包含本文披露的actriib多肽的任一个(例如seq id no:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的任一个)、本领域已知的任何actriib多肽、或使用本领域已知的和/或本文提供的方法产生的任何actriib多肽。
[0259]
在某些实施例中，细胞外结构域经由接头(例如肽接头)与抗体的fc部分连接。示例性接头包括短多肽序列，例如2-10、2-5、2-4、2-3个氨基酸残基(例如甘氨酸残基)，例如像，gly-gly-gly接头。在特定的实施例中，接头包含氨基酸序列gly-gly-gly(ggg)。在另一个特定的实施例中，接头包含氨基酸序列thr-gly-gly-gly(tggg)。任选地，fc结构域在残基例如asp-265、赖氨酸322和asn-434处具有一个或多个突变。在某些情况下，相对于野生型fc结构域，具有一个或多个这些突变(例如asp-265突变)的突变体fc结构域结合fcγ受体的能力降低。在其他情况下，相对于野生型fc结构域，具有一个或多个这些突变(例如asn-434突变)的突变体fc结构域结合mhc i类相关fc受体(fcrn)的能力提高。seq id no:6、7、10、11、20、21、24、25、26、27、30、32和33中所示包含与fc结构域融合的actriib的可溶性细胞外结构域的示例性融合蛋白。
[0260]
在特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含与抗体的fc部分连接的actriib的细胞外结构域或其部分，其中所述actriib配体陷阱包含与选自seq id no:6、7、10、11、20、21、24、25、26、27、30、32和33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。在另一个特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱包含与抗体的fc部分连接的actriib的细胞外结构域或其部分，其中所述actriib配体陷阱包含与选自seq id no:6、7、10、11、20、21、24、25、26、27、30、32和33的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。
[0261]
在特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱是人actriib受体的细胞外结构域与igg1的fc部分之间的融合蛋白。在另一个特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱是人actriib受体的截短的细胞外结构域与igg1的fc部分之间的融合蛋白。在另一个特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱是人actriib受体的截短的细胞外结构域与igg1的fc部分之间的融合蛋白，其中该人actriib受体的截短的细胞外结构域在对应于seq id no:2或seq id no:14的氨基酸79的氨基酸位置处具有氨基酸取代。在一个实施例中，在对应于seq id no:
2或seq id no:14的氨基酸79的氨基酸位置处的氨基酸取代是用天冬氨酸取代亮氨酸(即l79d突变)。
[0262]
在特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱是seq id no:10或11，其代表人actriib受体的细胞外结构域与igg1的fc部分之间的融合蛋白，其中所述actriib细胞外结构域包含具有l79d突变的seq id no:14的氨基酸25-131。编码seq id no:10的actriib-fc融合蛋白的核酸序列以seq id no:31表示。
[0263]
在另一个特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actrii配体陷阱是多肽，该多肽包含：(i)actriib的细胞外结构域的片段，其中该片段由seq id no:14的氨基酸25-131的序列组成，并且其中该片段携带l79d氨基酸取代；(ii)接头；以及(iii)igg的fc。
[0264]
在另一个特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的actriib配体陷阱是seq id no:20或21，其代表人actriib受体的细胞外结构域与igg1的fc部分之间的融合蛋白，其中所述actriib细胞外结构域包含具有l79d突变的seq id no:2的氨基酸25-131。
[0265]
在特定实施例中，相对于actriib(r64)-fc形式，包含增加actriib-fc融合蛋白的血清半衰期的另外的n-连接糖基化位点(n-x-s/t)的突变的actriib多肽可用于本文所述方法和组合物中。在特定的实施例中，在seq id no:2或seq id no:14的位置24处引入天冬酰胺(a24n)产生赋予更长半衰期的nxt序列。其他nx(t/s)序列可在42-44(nqs)和65-67(nss)处发现，尽管后者可能无法用位置64处的r(即在r64多肽中)有效糖基化。通常，可以在actriib的配体结合口袋外的位置处引入n-x-s/t序列，这在上文中有详细说明。特别适合于非内源n-x-s/t序列引入的位点包括seq id no:2或seq id no:14的氨基酸20-29、20-24、22-25、109-134、120-134或129-134。还可将n-x-s/t序列引入actriib序列与fc或其他融合组分之间的接头中。可通过将n引入相对于预先存在的s或t的正确位置或通过将s或t引入对应于预先存在的n的位置，以最小努力引入这样的位点。因此，产生n-连接糖基化位点的所希望的改变是：a24n、r64n、s67n(可能与n65a改变组合)、e106n、r112n、g120n、e123n、p129n、a132n、r112s和r112t(所有氨基酸位置对应于它们可在seq id no:2或seq id no:14中发现的位置)。可将预期糖基化的任何s变为t，因为由糖基化提供了保护而不产生免疫原性位点。同样，可将预期糖基化的任何t变为s。因此，本文涵盖s67t和s44t改变。同样，在a24n变体中，可以使用s26t改变。因此，actriib多肽可包括一个或多个另外的非内源n-连接糖基化共有序列。
[0266]
在某些实施例中，本文所述方法和组合物利用分离的或纯化的actriib多肽，即分离自其他蛋白质或在其他方面基本上不含其他蛋白质的actriib多肽可用于本文所述方法和组合物。通常，将通过从重组核酸表达来产生actriib多肽。
[0267]
在某些方面，本文所述方法和组合物中使用的actriib多肽由分离的和/或重组核酸编码，包括本文披露的片段、功能变体和融合蛋白。例如，seq id no:5编码天然存在的人actriib前体多肽。主题核酸可以是单链的或双链的。此类核酸可以是dna或rna分子。这些核酸可用于例如制备actriib多肽的方法，或作为直接的剂(例如在基因疗法中)。
[0268]
在某些方面，要进一步了解，可用于产生适用于本文所述方法和组合物的actriib多肽的核酸包括作为seq id no:5的变体的核酸以及编码可溶性actriib多肽的那些核酸序列的变体的核酸(例如编码seq id no:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的核酸)。变体核苷酸序列包括差异在于一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列，例如等
103盐酸盐、pki-402、pki-587(吉达利塞)、pp 121、pp-242(拓克尼布)、pp30、pqr-620、ql-ix-55、rapalink、白藜芦醇、sar245409、ly294002、渥曼青霉素、槲皮素、杨梅素、星形孢菌素、sf1126、sf2523、stk16-in-1、舒尼替尼、torin 1、torin 2、三乙酰基芦荟大黄素、vs-5584、way-600、wjd008、wye-125132(wye-132)、wye-354、wye-687、xl388、xl-765(沃他利司，sar245409)、(+)-松萝酸、山金车内酯d、bgt226马来酸盐(nvp-bgt226马来酸盐)、cbz-b3a、cc-115盐酸盐、环维黄杨星d、二氢杨梅素(白蔹素或蛇葡萄素)、ft-1518、gne-317、黑海常春藤苷a1、jr-ab2-011、ku-0060648、nsc781406、pi-103、重楼皂苷i、橙桑黄酮(nsc5113)、pqr-530、rheb抑制剂nr1、铁冬青酸、或wye-687。
[0272]
在某些实施例中，mtor抑制剂选自由以下组成的组：雷帕霉素、地磷莫司、依维莫司、替西罗莫司、利达福莫司、他克莫司(fk-506)、咗他莫司(abt-578)、3,3-二吲哚甲烷(dim)、32脱氧雷帕霉素(sar943)、3-甲基腺嘌呤、沙蟾毒精、azd 3147、azd-2014(维妥替)、azd8055、bc-li-0186、bez235(达克利司)、比米利司(pqr309)、、cc-115、cc-223(奥纳塔替)、大黄酸(大黄酚)、环吡酮胺、cid3528206、cidd 0067106、化合物401、姜黄素、cz415、ecf 309、表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)、etp 45658、etp-46464、gdc-0084、gdc-0349、gdc-0980(阿托利司，rg7422)、染料木素、gne-477、gne-493、gsk1059615、gsk-2126458(奥米利塞)、icsn3250、ink-128(mln0128，沙帕替)、ku-0063794、ly3023414(沙托利塞)、me-344(nv-344)、二甲双胍、mhy1485、mti-31(lxi-15029)、mtor抑制剂10(cas编号：1222999-54-3)、mtor/hdac1-in-12l、mtorc1-in-1、mtor-in-1、mtor-in-17、氯硝柳胺、nv-128(ly-303511)、nvp-bgt226、奥米利塞、osi-027、osu-53、帕洛米德529(p529)、哌立福新、pf 05212384、pf-04691502、pf-04979064、pi 103盐酸盐、pki-402、pki-587(吉达利塞)、pp 121、pp-242(拓克尼布)、pp30、pqr-620、ql-ix-55、rapalink、白藜芦醇、sar245409、ly294002、渥曼青霉素、槲皮素、杨梅素、星形孢菌素、sf1126、sf2523、stk16-in-1、舒尼替尼、torin 1、torin 2、三乙酰基芦荟大黄素、vs-5584、way-600、wjd008、wye-125132(wye-132)、wye-354、wye-687、xl388、xl-765(沃他利司，sar245409)、(+)-松萝酸、山金车内酯d、bgt226马来酸盐(nvp-bgt226马来酸盐)、cbz-b3a、cc-115盐酸盐、环维黄杨星d、二氢杨梅素(白蔹素或蛇葡萄素)、ft-1518、gne-317、黑海常春藤苷a1、jr-ab2-011、ku-0060648、nsc781406、pi-103、重楼皂苷i、橙桑黄酮(nsc5113)、pqr-530、rheb抑制剂nr1、铁冬青酸、和wye-687。在某些实施例中，mtor抑制剂选自由以下组成的组：雷帕霉素、地磷莫司、依维莫司、替西罗莫司、利达福莫司、他克莫司(fk-506)和咗他莫司(abt-578)。
[0273]
在某些实施例中，mtor抑制剂是atp竞争性抑制剂。6.9参考体
[0274]
在某些实施例中，参考体的大小可以是1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500或1000个个体。在某些实施例中，参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。在某些实施例中，参考体由随机志愿者组成。在某些实施例中，参考体由健康人组成。在某些实施例中，参考体由与如6.5节中所述的患者体相同的年龄、体重和/或性别的人组成。在某些实施例中，参考体由未患有地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病(cmml)的人组成。在某些实施例中，参考体由患有地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海
贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病(cmml)的人组成。7.实例7.1实例1.雷帕霉素(西罗莫司)与罗特西普的组合实验7.1.1背景
[0275]
进行了两个独立的实验以测试雷帕霉素和罗特西普的联合施用是否比施用单独的罗特西普更能增加红细胞和血红蛋白的水平。这两个实验在设计上相似，只是在实验1中使用了野生型雌性小鼠，而在实验2中使用了β-地中海贫血模型小鼠(9-18周龄雌性小鼠，这些小鼠是hbb-b1和hbb-b2基因的杂合子突变体)。实验设计在图1中说明。7.1.2材料和方法(a)小鼠
[0276]
所有小鼠均购自杰克逊实验室。对于实验1，使用了10-12周龄野生型(c57bl/6j)雌性小鼠(杰克逊实验室库存编号000664)。对于实验2，使用了9-18周龄000664c57bl/6j背景的b6.129p2-hbb-b1
tm1unc hbb-b2
tm1unc
/j雌性小鼠(杰克逊实验室库存编号002683，β-地中海贫血小鼠模型)。(b)给药
[0277]
经由皮下(sc)途径注射总体积为150μl的在1x磷酸盐缓冲盐水(pbs)中的鼠形式的罗特西普(rap-536)(剂量为10mg/kg)，每周两次，持续两周。除周日外，每天经由腹腔途径注射总体积为150μl的在含有5％吐温80、5％ peg400、4％乙醇的1x pbs中的雷帕霉素(剂量为4mg/kg)，持续两周。对于对照组，经由皮下(sc)途径注射150μl的1x pbs(媒介物1)，每周两次，持续两周；并且除周日外，每天经由腹腔途径注射体积为150μl的含有5％吐温80、5％ peg400、4％乙醇的1x pbs(媒介物2)溶液，持续两周。在两个实验中，小鼠被分为4组。第1组接受媒介物1(sc)+媒介物2(ip)注射，第2组接受rap-536(药物1)(sc)+媒介物2(ip)注射，第3组接受媒介物1(sc)+雷帕霉素(药物2)(ip)注射，并且第4组接受rap-536(药物1)(sc)+雷帕霉素(药物2)(ip)注射。(c)骨髓和脾脏悬浮液及血液制剂
[0278]
在第15天(最后一次给药后的一天)，对小鼠实施安乐死，并且经由心脏穿刺采集血液并立即放入k2edta采血管中。通过使用带针头的注射器并使用5ml的含有2％热灭活牛血清的1x hbss(不含ca和mg)(赛默飞世尔科技公司(thermo fisher scientific))冲洗每只小鼠的股骨和胫骨，采集骨髓。去除脾脏，并且通过使用注射器柱塞在置于50ml锥形管中的70μm细胞滤网(cell strainer)上粉碎脾脏来制备脾细胞。将骨髓悬浮液和脾脏悬浮液都保持在冰上，直到进行流式细胞术分析。(d)全血计数(cbc)分析
[0279]
使用西门子公司(siemens)的advia 120装备在采血当天对血液样品进行cbc、网织红细胞(retic)和chr分析。(e)通过流式细胞术进行骨髓、脾脏和血液分析
[0280]
对来自制备的细胞悬浮液的200万个骨髓和脾脏细胞以及500万个血细胞进行染，用于每次流式细胞术分析。首先用在染培养基(含有2％热灭活牛血清的hbss)中的噻唑橙(1:50,000稀释的10mm原液)和赫斯特(hoechst)(1:1000稀释的5mg/ml原液)将细胞在室温下染45分钟。用染培养基洗涤一次后，将细胞在4℃用抗体混合物染20分钟。所
用抗体为cd45(克隆30-f11)、ter119、cd44(克隆im7)、cd71(克隆ri7217)。本研究中使用的所有针对表面抗原的抗体均购自(北京)生物科技有限公司(biolegend)和赛默飞世尔科技公司。抗体染后，将细胞用染培养基洗涤一次。按照产品方案，使用sytox-aadvanced试剂(来自赛默飞世尔科技公司)作为活性染料。使用bd生物科学公司(bd bioscience)的lsr fortessa流式细胞术分析仪进行流式细胞术分析。使用bd生物科学公司的flowjo软件对流式细胞术数据进行分析。通过microsoft excel和graphpad prism软件进行统计分析。7.1.3详细的给药方案(a)实验1：
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使用了10-12周龄野生型(c57bl/6j)小鼠(杰克逊实验室库存编号000664)。
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药物1：在1x pbs中的rap-536：10mg/kg，皮下(sc)，从第一天开始每周两次。
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媒介物1：1x pbs
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药物2：在含有5％吐温80、5％ peg400、4％乙醇的1x pbs中的雷帕霉素。4mg/kg剂量，ip(4mg/kg剂量)。
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媒介物2：在1x pbs中的5％吐温80、5％ peg400、4％乙醇
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组：c57bl/6j野生型(wt)雌性小鼠(杰克逊)，7只动物/组(1)第1组：媒介物1(sc)+媒介物2(ip)(2)第2组：药物1(rap-536)(sc)+媒介物2(ip)(3)第3组：媒介物1(sc)+药物2(雷帕霉素)(ip)(4)第4组：药物1(rap-536)(sc)+药物2(雷帕霉素)(ip)
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给药和收获时间表(1)第1天(周二)：
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测量体重。
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经由sc将媒介物1和药物1(rap-536)注射至指定组
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经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(2)第2天和第3天(周三和周四)：
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每天经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(3)第4天(周五)：
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经由sc将媒介物1和药物1(rap-536)注射至指定组
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经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(4)第5天(周六)：
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经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(5)第7天(周一)：
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经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(6)第8天(周二)：
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经由sc将媒介物1和药物1(rap-536)注射至指定组
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经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(7)第9天和第10天(周三和周四)：
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每天经由ip将媒介物2和药物2(雷帕霉素)注射至指定组(8)第11天(周五)：
536给药和单独的雷帕霉素给药各自以相似的水平增加了rbc水平。th3/+小鼠的rbc水平的增加百分比大于野生型小鼠的rbc水平的增加百分比(在rap-536给药、雷帕霉素给药、以及两者的联合给药后)。在施用单独的rap-536或雷帕霉素后，th3/+小鼠的rbc水平达到野生型小鼠的rbc水平，并且在rap-536或雷帕霉素的联合给药后，超过野生型水平。
[0282]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和β-地中海贫血模型小鼠(th3/+小鼠；实验2中)的血液中的血红蛋白(hgb)水平变化进行了分析。如图3a和3b所示，雷帕霉素和rap-536的联合给药(第4组)比rap-536或雷帕霉素的单药剂(与仅rap-536给药(第2组)和仅雷帕霉素给药(第3组)相比)更能增加野生型小鼠和th3/+小鼠两者的hgb水平。hgb水平的增加百分比与rbc水平的增加百分比相似。th3/+的hgb水平约为野生型小鼠的hgb水平的一半。rap-536和雷帕霉素的联合给药使th3/+小鼠的hgb水平增加了超过40％，但产生的hgb水平仍低于野生型小鼠的hgb水平。
[0283]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的血液中的hct水平变化进行了分析。如图4a和4b所示，与图2a-2b和图3a-3b相比，th3/+小鼠的hct增加百分比与rbc和hgb的增加相关联。与th3/+小鼠相比(达到的hct水平接近野生型小鼠的hct水平)，野生型小鼠的hct水平的增加是有限的。因此，rap-536和雷帕霉素的联合给药对增加rbc、hgb和hct水平非常有效，尤其是在th3/+小鼠中。
[0284]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的rbc细胞尺寸(mcv)变化进行了分析。如图5a和5b所示，rap-536给药降低了野生型小鼠的mcv，但增加了th3/+小鼠中已经很低的mcv水平。rap-536和雷帕霉素的联合给药降低了野生型小鼠的mcv。
[0285]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的hgb/细胞(mch)总量进行了分析。如图6a和6b所示，在rap-536给药后，野生型小鼠的mch略微下降，但th3/+小鼠的mch没有变化。在th3/+小鼠中，rbc、hgb和hct水平的增加相似，导致mch值没有变化。观察到与野生型小鼠的mch值相比，th3/+小鼠的mch值显著降低。th3/+小鼠的hgb水平和rbc水平低于野生型小鼠的hgb水平和rbc水平，这解释了th3/+小鼠的hgb/细胞(mch)总量较少的原因。mch水平在雷帕霉素给药后更高，但在rap-536给药后更低，这表明不同的作用机制，并因此表明可能具有累加/协同效应。
[0286]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的血液中的红细胞hgb浓度(chc)水平变化进行了分析。如图7a和7b所示，雷帕霉素和rap-536的联合给药增加了野生型小鼠的chc，但降低了th3/+小鼠的chc。野生型小鼠在rap-536给药(第2组)后或在联合给药(第4组)后chc水平增加的原因可能是因为mcv降低(细胞变得更小)，导致每个细胞中的hgb浓度更高(尽管每个细胞中的总hgb减少)。最后，在rap-536给药后，野生型小鼠的hct水平的增加小于hgb水平的增加。在雷帕霉素给药后，野生型小鼠的mcv没有降低。如图7b所示，在th3/+小鼠中，在rap-536给药(第2组)后或在联合给药(第4组)后，chc水平降低，因为在rap-536给药后，th3/+小鼠的mcv增加(经校正)。因此，可以得出结论，th3/+小鼠的rbc水平具有较低的总hgb/细胞，因为它们更小，但th3/+小鼠的每个rbc中的hgb浓度(chc)与野生型小鼠rbc中的chc相似。
[0287]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的血液中的红细胞分布宽度(rdw)变化进行了分析。如图8a和8b所示，雷帕霉素和rap-536的联合给药显著降
低了th3/+小鼠的rdw。在rap-536给药(第2组)后或在联合给药(第4组)后，野生型小鼠的rdw增加。请注意，与野生型小鼠的rdw相比，th3/+小鼠的rdw更高。在th3/+小鼠中，rdw的降低与rap-536给药(第2组)和两者的联合给药(第4组)对贫血的改善相关。
[0288]
对不同组的野生型小鼠(实验1)的血液中网织红细胞的百分比变化和绝对数量变化进行了分析。如图9a和9b所示，rap-536给药增加了野生型小鼠血液中的网织红细胞水平，并且雷帕霉素给药降低了野生型小鼠血液中的网织红细胞水平。给药后，野生型小鼠血液中的网织红细胞百分比(图9a)和绝对数量(图9b)以相同方式发生变化。rap-536给药增加了野生型小鼠血液中的网织红细胞水平，并且雷帕霉素给药降低了野生型小鼠血液中的网织红细胞水平。两者的联合给药使网织红细胞水平标准化。这是另一个数据集，其表明罗特西普和雷帕霉素对红细胞产生的作用机制是不同的，并说明了联合给药表现出累加或协同效应(对rbc或hgb水平的增加超过单药剂给药)的原因。
[0289]
对不同组的th3/+小鼠(实验2)的血液中网织红细胞的百分比变化和绝对数量变化进行了分析。如图10a和10b所示，雷帕霉素和rap-536的联合给药增加了th3/+小鼠血液中的网织红细胞数量，但没有增加网织红细胞百分比。请注意，与野生型小鼠相比，th3/+小鼠的网织红细胞百分比和绝对数量高得多。在雷帕霉素给药(第3组)后、在rap-536给药(第2组)后、以及在联合给药(第4组)后，th3/+小鼠的网织红细胞绝对数量显著增加。在rap-536给药和雷帕霉素给药后，th3/+小鼠的网织红细胞绝对数量均增加，这一事实表明th3/+小鼠的网织红细胞存活率提高。更高的网织红细胞存活率意味着更多的rbc产生。如果网织红细胞存活率增加，则rbc寿命也可能增加。尽管th3/+小鼠的无效造血发生部分降低，但网织红细胞水平没有降低，原因是这些小鼠仍然贫血。因此，在给药后，在增加的网织红细胞存活率/减少的贫血之间达到了平衡，最终达到了高网织红细胞水平。
[0290]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的血液中的网织红细胞血红蛋白水平(chr)变化进行了研究。如图11a和11b所示，雷帕霉素和rap-536的联合给药略微降低了野生型小鼠和th3/+小鼠两者的网织红细胞血红蛋白水平。请注意，th3/+小鼠的网织红细胞血红蛋白水平已经很低。这可能是因为血液中存在未成熟的网织红细胞。
[0291]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的血液中的网织红细胞组成变化进行了研究。图12显示出由自动化血细胞分析仪(例如，由adiva分析仪)在网织红细胞通道中分析的示例性网织红细胞组成。在获得的示例性网织红细胞散点吸收图(图12)中，h网织红细胞代表rna吸收水平高的网织红细胞(未成熟的网织红细胞)，m网织红细胞代表rna吸收水平中等的网织红细胞，并且l网织红细胞是rna吸收水平低的网织红细胞(成熟的网织红细胞)。参见例如，mori等人,2003,nephrology dialysis transplantation[肾脏透析移植],18(增刊4):416。如图13a和13b所示，在雷帕霉素或rap-536的给药或两者的联合给药后，野生型小鼠血液中的网织红细胞组成发生变化。特别地，在rap-536给药后，h网织红细胞百分比增加，并且m网织红细胞百分比降低。在rap-536给药后，总的网织红细胞数量增加。rap-536给药可能会诱导更多的从骨髓释放的网织红细胞产生以及血液中更多的网织红细胞成熟。在雷帕霉素给药后，h网织红细胞百分比降低，并且l和m网织红细胞百分比增加。同样，血液中总的网织红细胞水平降低。这可能是由于网织红细胞成熟更快和/或rbc寿命延长造成的。这是另一个数据集，其表明罗特西普和雷帕霉素
对红细胞产生的作用机制是不同的，并说明了联合给药表现出累加或协同效应(对rbc或hgb水平的增加超过单药剂给药)的原因。
[0292]
图14a和14b显示，在雷帕霉素或rap-536的给药或两者的联合给药后，th3/+小鼠血液中的网织红细胞组成发生变化。特别地，在雷帕霉素或rap-536的给药或两者的联合给药后，th3/+小鼠的h网织红细胞百分比降低。雷帕霉素和rap-536联合给药不会减少th3/+小鼠的总的网织红细胞数量。然而，h网织红细胞百分比显著降低，这表明网织红细胞的成熟/存活率可能增强。
[0293]
如图15a和15b所示，对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的体重变化进行了研究。对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的脾脏尺寸变化进行了研究。如图16a和16b所示，在雷帕霉素和rap-536的联合给药后，th3/小鼠的脾脏尺寸实现标准化。因此，联合给药不仅减少了th3/+小鼠的贫血，而且减小了增大的脾脏尺寸。rap-536给药略微增加了野生型小鼠的脾脏尺寸，而雷帕霉素给药减小了野生型小鼠的脾脏尺寸。
[0294]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的骨髓中的幼红细胞频率变化进行了研究。如图17a和17b所示，雷帕霉素和rap-536的联合给药降低了th3/+小鼠骨髓中的幼红细胞频率。特别地，th3/+小鼠骨髓中的幼红细胞/cd45(+)比率高，并且通过雷帕霉素和rap-536的联合给药实现标准化。图18a和18b证明，与单独的雷帕霉素或rap-536的给药相比，在雷帕霉素和rap-536的联合给药后，在野生型小鼠和th3/+小鼠的骨髓中产生和/或保留更多的网织红细胞。在rap-536给药及雷帕霉素和rap-536的联合给药后，野生型小鼠和th3/+小鼠中的网织红细胞与幼红细胞的比率增加。
[0295]
对不同组的野生型小鼠(实验1中)和th3/+小鼠(实验2中)的脾脏中的红细胞生成变化也进行了研究。如图19a和19b所示，证明了rap-536给药以及两者的联合给药均增加了野生型小鼠和th3/+小鼠脾脏中的ter119(+)细胞频率。图20a证明，在野生型小鼠中rap-536给药增加了脾脏中的幼红细胞/cd45(+)比率，而雷帕霉素降低了脾脏中的幼红细胞/cd45(+)比率。图21a和21b证明，与野生型小鼠相比，雷帕霉素和rap-536的联合给药对th3/+小鼠的脾脏中红细胞生成的直接影响更温和。野生型小鼠脾脏中的网织红细胞/幼红细胞比率高于th3/+小鼠脾脏中的网织红细胞/幼红细胞比率。雷帕霉素给药和联合给药使th3/+小鼠的脾脏尺寸减小，但rap-536给药对th3/+小鼠的脾脏尺寸减小不多，因为rap-536诱导脾脏中的红细胞生成。请注意，与th3/+小鼠的网织红细胞/幼红细胞比率相比，野生型小鼠的脾脏中的网织红细胞/幼红细胞比率高得多。这是因为在野生型小鼠中，幼红细胞水平非常低，并且野生型脾脏中的网织红细胞不是在那里产生的网织红细胞。它们在那里是出于不同的原因。8.序列的说明表1.序列信息
9.等效形式
[0296]
尽管参考其特定实施例详细描述了本发明，但应理解，功能等效形式的变化均在本发明的范围内。实际上，除了本文中显示和描述的那些之外，根据前述描述和附图，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。本领域的技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的本发明这些
特定实施例的许多等效形式。此类等效形式旨在为下列权利要求所涵盖。
[0297]
本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本说明书中，如同每一单独的出版物、专利或专利申请特别且单独地指明通过引用以其全文并入本文。

技术特征：

1.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂。2.如权利要求1所述的方法，其中该贫血是与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病(cmml)相关的贫血。3.如权利要求1或2所述的方法，其中该mtor抑制剂是雷帕霉素。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中该mtor抑制剂是雷帕霉素的药学上可接受的盐或水合物。5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该actriib配体陷阱是如下多肽，该多肽：(a)与seq id no:11具有90％同一性；(b)与seq id no:11具有95％同一性；(c)与seq id no:11具有98％同一性；或者(d)包含seq id no:11。6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中该actriib配体陷阱是包含seq id no:11的氨基酸序列的多肽。7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的血红蛋白(hgb)水平增加到与所述前该受试者中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的血细胞比容(hct)水平增加到与所述前该受试者中的hct水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与所述前该受试者中的mcv水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的红细胞血红蛋白浓度(chc)水平增加到与所述前该受试者中的chc水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的红细胞分布宽度(rdw)水平降低到与所述前该受试者中的rdw水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中该受试者中的网织红细胞水平保持在
与所述前该受试者中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。13.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中该受试者中的网织红细胞水平保持在与参考体中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中该受试者中的白细胞水平保持在与所述前该受试者中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。15.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中该受试者中的白细胞水平保持在与参考体中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中该mtor抑制剂在施用actriib配体陷阱之前施用或与其同时施用。17.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中在施用actriib配体陷阱之前，该受试者曾接受过该mtor抑制剂。18.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中在施用mtor抑制剂之前，该受试者曾接受过该actriib配体陷阱。19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中该受试者是红细胞非输注依赖性的。20.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中该受试者是红细胞输注依赖性的。21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中该actriib配体陷阱以0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg、或1.75mg/kg的剂量施用。22.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中将该actriib配体陷阱每21天一次施用于该受试者。23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中将该actriib配体陷阱皮下施用于该受试者。24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中该受试者是人。25.如权利要求13、15和16至24中任一项所述的方法，其中该参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。26.如权利要求13、15和16至25中任一项所述的方法，其中该参考体由健康个体组成。27.如权利要求13、15和16至26中任一项所述的方法，其中该参考体由与该受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。28.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中口服施用该mtor抑制剂。29.如权利要求1至28中任一项所述的方法，其中该mtor抑制剂以0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg的剂量施用。30.如权利要求1至29中任一项所述的方法，其中每日施用该mtor抑制剂。31.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：
向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使参考体中的血红蛋白(hgb)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的受试者中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。32.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的血细胞比容(hct)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的hgb水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。33.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的平均红细胞体积(mcv)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。34.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞血红蛋白浓度(chc)水平增加到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。35.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该方法使该受试者中的红细胞分布宽度(rdw)水平降低到与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的血红蛋白(hgb)水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。36.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包
括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该受试者中的网织红细胞水平偏离正常网织红细胞水平，与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的网织红细胞水平相比相同或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。37.一种用于在有需要的受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，该方法包括：向该受试者施用actriib配体陷阱；以及向该受试者施用mtor抑制剂，其中该受试者中的白细胞水平偏离正常网织红细胞水平，与接受actriib配体陷阱或mtor抑制剂但不是一起接受的参考体中的网织红细胞水平相比相同或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。38.如权利要求31至37中任一项所述的方法，其中该受试者是人。39.如权利要求31至38中任一项所述的方法，其中该参考体由1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、或1000个个体组成。40.如权利要求31至39中任一项所述的方法，其中该参考体由与该受试者年龄、体重、和/或性别相同的人组成。41.如权利要求31至40中任一项所述的方法，其中该参考体由患有贫血的个体组成。42.如权利要求31至41中任一项所述的方法，其中该贫血是与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(mds)、或非增殖性慢性粒单核细胞白血病(cmml)相关的贫血。43.如权利要求31至42中任一项所述的方法，其中该mtor抑制剂是雷帕霉素。44.如权利要求31至43中任一项所述的方法，其中该mtor抑制剂是雷帕霉素的药学上可接受的盐或水合物。45.如权利要求31至44中任一项所述的方法，其中该actriib配体陷阱是如下多肽，该多肽：(a)与seq id no:11具有90％同一性；(b)与seq id no:11具有95％同一性；(c)与seq id no:11具有98％同一性；或者(d)包含seq id no:11。46.如权利要求31至45中任一项所述的方法，其中该actriib配体陷阱是包含seq id no:11的氨基酸序列的多肽。47.如权利要求31至46中任一项所述的方法，其中该受试者是红细胞非输注依赖性的。48.如权利要求31至46中任一项所述的方法，其中该受试者是红细胞输注依赖性的。49.如权利要求31至48中任一项所述的方法，其中该actriib配体陷阱以0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg、或1.75mg/kg的剂量施用。50.如权利要求31至49中任一项所述的方法，其中将该actriib配体陷阱每21天一次施用于该受试者。
51.如权利要求31至50中任一项所述的方法，其中将该actriib配体陷阱皮下施用于该受试者。52.如权利要求31至51中任一项所述的方法，其中口服施用该mtor抑制剂。53.如权利要求31至52中任一项所述的方法，其中该mtor抑制剂以0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg的剂量施用。54.如权利要求31至53中任一项所述的方法，其中每日施用该mtor抑制剂。

技术总结

本文提供了在受试者中贫血或增强晚期红细胞生成的方法，这些方法包括向该受试者施用激活素IIB型(ActRIIB)配体陷阱和mTOR抑制剂。制剂。制剂。

技术研发人员：

M

受保护的技术使用者：

细胞基因公司

技术研发日：

2021.05.14

技术公布日：

2022/12/30