一种提取物、提取物益生菌组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种提取物、提取物益生菌组合物及其应用。

背景技术：

2.非酒精性脂肪肝病(nafld)是临床上较为常见的肝病，最终可能会发展为肝硬化。作为诱发慢性肝脏疾病的首要病因，非酒精性脂肪肝的发病机制较为复杂。
3.目前，全球近1/4的普通人的健康被非酒精性脂肪肝所影响，亚洲地区人患病率就已高达29.6％，近90％以上的肥胖患者深受其扰。随着高脂、高糖食物摄入增加，营养过剩普遍。此外，nafld已被公认为心血管疾病以及ii型糖尿病的重要危险因素。
4.目前，尚无批准的药物疗法用于nafld的，而大量研究表明，中药可通过调节血脂、保护肝脏免受脂质过氧化损伤。中医药nafld有着较好的发展前景，且无明显不良反应。
5.但是，单一的中药对于降血脂作用并不明显；因此，从中药中开发一种具有更加优异的降血脂作用的提取物具有重要的应用价值。

技术实现要素：

6.为了解决现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种提取物以及提取物益生菌组合物。
7.本发明的技术方案如下：
8.本发明首先提供了一种提取物的制备方法，其包含如下步骤：
9.(1)取新鲜的蓝莓，然后加入乙醇水溶液进行提取；提取结束后将提取液浓缩干燥后得蓝莓乙醇提取物；
10.(2)将蓝莓乙醇提取物加水混选，然后用大孔树脂柱吸附；吸附完成后，先用5～10倍柱体积的去离子水洗去大孔树脂中吸附的杂质；然后再用3～5倍柱体积的体积分数为20～30％的乙醇水溶液进行洗脱得洗脱液，将洗脱液浓缩去除洗脱液中的乙醇后冻干得蓝莓提取物，即所述的提取物。
11.发明人在大量的实验中研究表明，通过上述大孔树脂方法制备得到的提取物，其降血脂作用要优于常规方法制备得的蓝莓提取物。
12.此外，发明人在研究中还惊奇的发现，通过本发明所述方法制备得到的提取物，其还具有减少脂肪堆积的作用。
13.优选地，步骤(1)中乙醇水溶液的重量用量为新鲜的蓝莓的4～8倍。
14.最优选地，步骤(1)中乙醇水溶液的重量用量为新鲜的蓝莓的6倍。
15.优选地，步骤(1)中所述的乙醇水溶液是体积分数为40～60％的乙醇水溶液。
16.最优选地，步骤(1)中所述的乙醇水溶液是体积分数为50％的乙醇水溶液。
17.优选地，步骤(2)中吸附完成后，先用8倍柱体积的去离子水洗去打孔树脂中吸附
的杂质；然后再用4倍柱体积的体积分数为25％的乙醇水溶液进行洗脱得洗脱液。
18.本发明还提供了一种由上述方法制备得到的提取物。
19.本发明还提供了一种提取物益生菌组合物，其包含上述方法制备得到的提取物以及益生菌。
20.优选地，所述的提取物与益生菌的重量比为1:0.05～0.2。
21.进一步优选地，所述的提取物与益生菌的重量比为1:0.05～0.1。
22.最优选地，所述的提取物与益生菌的重量比为1:0.1。
23.优选地，所述的益生菌选自乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌。
24.最优选地，所述的益生菌为鼠李糖乳杆菌。
25.本发明所述的提取物，还可以和益生菌组合使用。发明人在大量的实验中惊奇的发现，将鼠李糖乳杆菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其降血脂以及减少脂肪堆积的作用要远远好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。然而，其它益生菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其降血脂以及减少脂肪堆积的作用并未好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。鼠李糖乳杆菌可以协同提高本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物的降血脂以及减少脂肪堆积作用；而其它益生菌并未显示出协同提高本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物的降血脂以及减少脂肪堆积作用。
26.本发明还提供了一种上述提取物或提取物益生菌组合物在制备具有降血脂作用的产品中的应用。
27.本发明还提供了一种上述提取物或提取物益生菌组合物在制备同时具有降血脂作用以及减少脂肪堆积作用的产品中的应用。
28.优选地，所述的产品为保健品或药物。
29.有益效果：本发明提供了一种全新的提取物的制备方法，研究表明通过上述大孔树脂方法制备得到的提取物，其降血脂作用要优于常规方法制备得的蓝莓提取物。此外，通过本发明所述方法制备得到的提取物，其还具有减少脂肪堆积的作用。尤其是将鼠李糖乳杆菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其降血脂以及减少脂肪堆积的作用要远远好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。因此，将本发明所述的蓝莓提取物或提取物益生菌组合物作为有效成分用于制备具有降血脂以及减少脂肪堆积作用的保健品或药物具有重要的应用价值。
具体实施方式
30.下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
31.实施例1提取物的制备
32.(1)取新鲜的蓝莓，然后加入6倍重量的体积分数为50％的乙醇水溶液进行超声提取1h；提取结束后将提取液浓缩干燥后得蓝莓乙醇提取物；
33.(2)将蓝莓乙醇提取物加5倍重量的水混选，然后用d101型大孔树脂柱吸附；吸附
完成后，先用8倍柱体积的去离子水洗去大孔树脂中吸附的杂质；然后再用4倍柱体积的体积分数为25％的乙醇水溶液进行洗脱得洗脱液，将洗脱液浓缩去除洗脱液中的乙醇后冻干得蓝莓提取物，即所述的提取物。
34.实施例2提取物益生菌组合物的制备
35.按实施例1方法制备蓝莓提取物；然后将蓝莓提取物与乳双歧杆菌(100亿cfu/g)按重量比1:0.1混合均匀即得所述的提取物益生菌组合物。
36.实施例3提取物益生菌组合物的制备
37.按实施例1方法制备蓝莓提取物；然后将蓝莓提取物与副干酪乳杆菌(100亿cfu/g)按重量比1:0.1混合均匀即得所述的提取物益生菌组合物。
38.实施例4提取物益生菌组合物的制备
39.按实施例1方法制备蓝莓提取物；然后将蓝莓提取物与鼠李糖乳杆菌(100亿cfu/g)按重量比1:0.1混合均匀即得所述的提取物益生菌组合物。
40.实验例
41.取8周龄spf级sd雄性大鼠(180～220g)；动物饲养温度20～25℃，相对湿度40％～50％，昼夜明暗交替时间12h/12h，所有大鼠普通饲料适应性喂养1周后，随机选取8只大鼠为对照组，食用普通饲料，剩余大鼠为模型组，食用高脂饲料进行造模。
42.造模成功后按照体质量将模型组大鼠随机分为5组，每组8只，分别为模型组、实验组1～4。正常组给予普通饲料，其余各组大鼠给予高脂饲料，干预周期为10周。其中，实验组1～4分别灌胃实施例1～4制备得到的蓝莓提取物以及提取物益生菌组合物，剂量为30mg/kg/d；剩余大鼠进行1.5ml生理盐水灌胃，每天同一时间点进行灌胃；干预结束后，禁食12h，采用10％水合氯醛麻醉处死后，取大鼠血液样本，取附睾脂肪和肝脏，保留备用。
43.指标测定：处死后立即取附睾脂肪并称重；血脂水平指标的检测：处死大鼠后经腹主动脉取血，4℃，3000r/min离心10min取血清，按照试剂盒说明书操作，检测血清tg、tc、hdl、ldl含量；检测结果见1和2。
44.表1.
[0045][0046][0047]
与正常组相比，模型组大鼠tg、tc、ldl-c水平均升高(p＜0.01，表1)，hdl-c水平降低(p＜0.01，表1)，说明建模成功；而与模型组相比，实施例1制备得到的蓝莓提取物，其tg、tc、ldl-c明显降低，hdl-c含量明显升高；这说明，通过本发明所述方法制备得的蓝莓提取
物具有显著的降血脂作用。
[0048]
从上述实验数据还可以看出，实施例4将鼠李糖乳杆菌与本发明所述方法制备得的蓝莓提取物组合后得到的提取物益生菌组合物，与未加入鼠李糖乳杆菌的蓝莓提取物相比，其tg、tc、ldl-c含量得到了进一步的大幅降低，hdl-c含量得到了进一步的大幅升高。然而，实施例2和3将其它益生菌与本发明所述方法制备得的蓝莓提取物组合后得到的提取物益生菌组合物，与未加入鼠李糖乳杆菌的蓝莓提取物相比，其tg、tc、ldl-c含量并未降低，hdl-c含量并未升高。这说明：将鼠李糖乳杆菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其降血脂作用要远远好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。然而，其它益生菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其降血脂作用并未好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。鼠李糖乳杆菌可以协同提高本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物的降血脂作用；而其它益生菌并未显示出协同提高本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物的降血脂作用。
[0049]
表2.
[0050][0051]
与正常组相比，模型组大鼠附睾脂肪相对含量显著高于正常组；而与模型组相比，实施例1制备得到的蓝莓提取物，其附睾脂肪相对含量明显降低；这说明，通过本发明所述方法制备得的蓝莓提取物具有显著的减少脂肪在附睾中的堆积作用。
[0052]
从上述实验数据还可以看出，实施例4将鼠李糖乳杆菌与本发明所述方法制备得的蓝莓提取物组合后得到的提取物益生菌组合物，与未加入鼠李糖乳杆菌的蓝莓提取物相比，其附睾脂肪相对含量得到了进一步的大幅降低。然而，实施例2和3将其它益生菌与本发明所述方法制备得的蓝莓提取物组合后得到的提取物益生菌组合物，与未加入鼠李糖乳杆菌的蓝莓提取物相比，其附睾脂肪相对含量并未降低。这说明：将鼠李糖乳杆菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其减少脂肪在附睾中的堆积作用要远远好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。然而，其它益生菌与本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物组合后得到的组合物，其减少脂肪在附睾中的堆积作用并未好于本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物。鼠李糖乳杆菌可以协同提高本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物的减少脂肪在附睾中的堆积作用；而其它益生菌并未显示出协同提高本发明所述方法制备得到的蓝莓提取物减少脂肪在附睾中的堆积作用。

技术特征：

1.一种提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)取新鲜的蓝莓，然后加入乙醇水溶液进行提取；提取结束后将提取液浓缩干燥后得蓝莓乙醇提取物；(2)将蓝莓乙醇提取物加水混选，然后用大孔树脂柱吸附；吸附完成后，先用5～10倍柱体积的去离子水洗去大孔树脂中吸附的杂质；然后再用3～5倍柱体积的体积分数为20～30％的乙醇水溶液进行洗脱得洗脱液，将洗脱液浓缩去除洗脱液中的乙醇后冻干得蓝莓提取物，即所述的提取物。2.根据权利要求1所述的提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中乙醇水溶液的重量用量为新鲜的蓝莓的4～8倍；最优选地，步骤(1)中乙醇水溶液的重量用量为新鲜的蓝莓的6倍。3.根据权利要求1所述的提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的乙醇水溶液是体积分数为40～60％的乙醇水溶液；最优选地，步骤(1)中所述的乙醇水溶液是体积分数为50％的乙醇水溶液。4.根据权利要求1所述的提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中吸附完成后，先用8倍柱体积的去离子水洗去打孔树脂中吸附的杂质；然后再用4倍柱体积的体积分数为25％的乙醇水溶液进行洗脱得洗脱液。5.权利要求1～4任一项所述的制备方法制备得到的提取物。6.一种提取物益生菌组合物，其特征在于，包含权利要求5所述的提取物以及益生菌。7.根据权利要求6所述的提取物益生菌组合物，其特征在于，所述的提取物与益生菌的重量比为1:0.05～0.2；进一步优选地，所述的提取物与益生菌的重量比为1:0.05～0.1；最优选地，所述的提取物与益生菌的重量比为1:0.1。8.根据权利要求6所述的提取物益生菌组合物，其特征在于，所述的益生菌选自乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌。9.权利要求5所述的提取物或权利要求6～8任一项所述的提取物益生菌组合物在制备具有降血脂作用的产品中的应用。10.权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的产品为保健品或药物。

技术总结

本发明公开了一种提取物、提取物益生菌组合物及其应用。所述提取物的制备方法，其包含如下步骤：(1)取新鲜的蓝莓，然后加入乙醇水溶液进行提取；提取结束后将提取液浓缩干燥后得蓝莓乙醇提取物；(2)将蓝莓乙醇提取物加水混选，然后用大孔树脂柱吸附；先用5～10倍柱体积的去离子水洗去大孔树脂中吸附的杂质；然后再用3～5倍柱体积的体积分数为20～30％的乙醇水溶液进行洗脱得洗脱液，将洗脱液浓缩去除洗脱液中的乙醇后冻干得蓝莓提取物，即所述的提取物。所述的提取物以及组合物具有降血脂以及减少脂肪堆积的作用；因此，将其作为有效成分用于制备具有降血脂以及减少脂肪堆积作用的保健品或药物具有重要的应用价值。保健品或药物具有重要的应用价值。