(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811568040.0(22)申请日 2018.12.21
(71)申请人 安徽联创生物医药股份有限公司
地址 230000 安徽省合肥市经开区繁华大
道工投立恒工业广场B-9幢(72)发明人 吴其华 葛德培 陈海兵 (74)专利代理机构 合肥市科融知识产权代理事
务所(普通合伙) 34126
代理人 陈思聪(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
(54)发明名称
一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法(57)摘要
本发明提供了一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～40℃，采用紫外检测器对依帕列净原料药的有关物质进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，通过综合考虑分析柱、流动相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，从而有效的控制原料药的质量，并且该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、快速简便、操作方便，适用于分离测定依帕列净原料药的有关 物质。
权利要求书1页 说明书6页 附图4页
CN 109374782 A 2019.02.22
C N 109374782
A
1.一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为
25～40℃，采用紫外检测器对依帕列净原料药的有关物质进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。
2.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：谱柱长为150mm～250mm。
3.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：谱柱长为250mm。
4.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：所述填充剂的粒径为1.8～5μm。
5.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：所述填充剂的粒径为5μm。
6.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：所述流速为1.0ml/min，柱温为30℃柱温。
7.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：所述梯度洗脱的条件为：时间，分钟流动相A，体积％流动相B，体积％070～8020～3015554530～405～1585～955
55～1585～95
。
8.根据权利要求1所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：所述梯度洗脱的条件为：时间，分钟流动相A，体积％流动相B，体积％07525155545301090551090
。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其特征在于：所述紫外检测器的检测波长为224nm。
权 利 要 求 书
1/1页
CN 109374782 A
一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法
技术领域
[0001]本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法。
背景技术
[0002]依帕列净(Empagliflozin，商品名Jardiance)，由勃林格殷格翰与礼来公司联合开发的一种新型的抗糖尿病药物，于2014年08月01日经美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，用于改善2型糖尿病成人患者的血糖控制。依帕列净是一种新的钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂药物，通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。分子式为C23H27ClO7，分子量为450.91，结构式如下式(1)：
[0003]
[0004]依帕列净在制备过程中，因起始原料、合成工艺、降解等多种因素产生多个杂质，其中以杂质A、 杂质B、杂质C、杂质D和杂质E在合成工艺中较易产生，作为有关物质项目中主要考察杂质，其限度要求均为不得过0.10wt％。
[0005]依帕列净杂质A为合成工艺起始原料，分子式：C17H16BrClO2，分子量：367.66，化学结构式如下式(2)：
[0006]
[0007]依帕列净杂质B为中间体Ⅳ，分子式：C31H35ClO11，分子量：619.06，化学结构式如下式(3)：
[0008]
[0009]依帕列净杂质C为中间体Ⅱ，分子式：C24H29ClO8，分子量：480.93，化学结构式如下式(4)：
[0010]
[0011]依帕列净杂质D为中间体-II合成中，碳负离子不同位置进攻葡萄糖酸内酯上的羰基，形成不同手性中间体，最终生成依帕列净相应的异构体杂质，分子式：C23H27ClO7，分子量：450.91，化学结构式如下式(5)：
[0012]
[0013]依帕列净杂质E为合成依帕列净中糖的片断可能开环形成杂质，分子式：C23H29ClO8，分子量：468.9，化学结构式如下式(6)：
[0014]
[0015]为了控制依帕列净原料药的质量，需要对主要成分和杂质进行控制，在现有的技术中，没有适合于快速、简便、精确分析检测依帕列净原料药有关物质的分析方法。因此，对于依帕列净原料药有关物质的测定方法存在进一步的改进和优化需求。
发明内容
[0016]为了克服现有技术存在的上述技术问题，本发明人在进行了大量的深入研究之后，从而提供了一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，具有快速简便、灵敏度高、准确可靠的优点。
[0017]本发明采用的技术方案是：
[0018]一种用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A、乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～40℃，采用紫外检测器对依帕列净原料药的有关物质进行检测，所述紫外检测器的检测波长为205～230nm。
[0019]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其中，谱柱长为150mm～250mm，优选250mm。由此，可以提高主峰与杂质D峰和杂质E峰的分离度。[0020]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其中，所述填充剂的粒径为1.8～5μm，优选5μm。由此，可以进一步提高分离度。
[0021]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其中，流速为1.0ml/min，柱温为30℃柱温。由此，可提高杂质之间的分离度。
[0022]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其中，所述梯度洗脱的条件为：
[0023]
时间，分钟流动相A，体积％流动相B，体积％
070～8020～30
155545
30～405～1585～95
555～1585～95
[0024]。[0025]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其中，所述梯度洗脱的条件为：
[0026]
时间，分钟流动相A，体积％流动相B，体积％
07525
155545
301090
551090
[0027]由此得到的分离效果最佳，峰形最好。
[0028]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，其中，所述紫外检测器的检测波长为224nm。由此，可以提高杂质的检测灵敏度。
[0029]与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0030]本发明所述的用HPLC分离测定依帕列净原料药有关物质的方法，通过综合考虑分析柱、流动相、梯度洗脱程序以及流速、柱温对分离检测的综合影响，使得检测结果达到了最优化，可以将依帕列净原料药中的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E、在同一谱条件进行快速高效的分离，从而有效的控
制原料药的质量，并且该检测方法灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、快速简便、操作方便，可有效控制药品的质量，适用于分离测定依帕列净原料药的有关物质。
附图说明
[0031]图1为本发明中按实施例1条件检测的空白溶液的谱图；
[0032]图2为本发明中按实施例1条件检测的系统适用性溶液的谱图；
[0033]图3为本发明中按实施例1条件检测的定量限溶液的谱图；
[0034]图4为本发明中按实施例1条件检测的供试品溶液的谱图；
[0035]图5为本发明中按实施例1条件检测的检测限溶液的谱图；
[0036]图6为本发明中按实施例2条件检测的空白溶液的谱图；
[0037]图7为本发明中按实施例2条件检测的供试品溶液的谱图；
[0038]图8为本发明中按实施例2条件检测的系统适用性溶液的谱图；
[0039]图9为本发明中按实施例2条件检测的定量限溶液的谱图；
[0040]图10为本发明中按实施例2条件检测的检测限溶液的谱图。
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