(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.03.05
C N 103620052
A (21)申请号 201280029249.4
(22)申请日 2012.06.14
2011-134701 2011.06.17 JP
C12Q 1/37(2006.01)C12Q 1/26(2006.01)C12Q 1/28(2006.01)(71)申请人协和梅迪克斯株式会社
地址日本东京都
(72)发明人征矢阳代
(74)专利代理机构中原信达知识产权代理有限
责任公司 11219
代理人金龙河 穆德骏
(54)发明名称
试剂盒
(57)摘要
本发明提供不受血红蛋白的影响、准确且高
蛋白的方法。一种含有血红蛋白的试样中的糖化
血红蛋白的测定方法，其特征在于，在表面活性剂
存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的试
样、然后使用果糖基肽氧化酶进行作用的反应中，
在卤素氧化物存在下进行该反应，并且对生成的
过氧化氢进行测定。根据本发明，提供含有血红
蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其可
用于对糖尿病的诊断有用的糖化血红蛋白的测定等。(30)优先权数据
(85)PCT国际申请进入国家阶段日
2013.12.13
(86)PCT国际申请的申请数据
PCT/JP2012/065237 2012.06.14
(87)PCT国际申请的公布数据
WO2012/173185 JA 2012.12.20
(51)Int.Cl.权利要求书3页 说明书22页 附图4页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书3页 说明书22页 附图4页(10)申请公布号CN 103620052 A
1.一种含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，在表面活性剂存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的试样、然后使用果糖基肽氧化酶进行作用的反应中，在卤素氧化物存在下进行该反应，并对生成的过氧化氢进行测定。
2.如权利要求1所述的方法，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、溴酸或其盐和高碘酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，表面活性剂为阳离子型表面活性剂。
4.如权利要求3所述的方法，其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式(I)表示的
吡啶盐、下述通式(II)表示的盐和下述通式(III)表示的季铵盐组成的组中的阳离子型表面活性剂，
式(I)中，R1表示取代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，R 表示氢原子、取代
a
或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，n表示1～5的整数，X-表示一价的阴离子，
式(II)中，R2～R5相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Y-表示一价的阴离子，
式(III)中，R6～R9相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Z-表示一价的阴离子。
5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，过氧化氢的测定使用过氧化氢测定试剂进行。
6.如权利要求5所述的方法，其中，过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无型原体的试剂。
7.一种糖化血红蛋白测定试剂，用于测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白，其特征在于，含有蛋白质分解酶、果糖基肽氧化酶、卤素氧化物和表面活性剂。
8.如权利要求7所述的试剂，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、溴酸或其盐和高碘酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。
9.如权利要求7或8所述的试剂，其中，表面活性剂为阳离子型表面活性剂。
10.如权利要求9所述的试剂，其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式(I)表示
的吡啶盐、下述通式(II)表示的盐和下述通式(III)表示的季铵盐组成的组中的阳
离子型表面活性剂，
表示氢原子、取代式(I)中，R1表示取代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，R
a
或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，n表示1～5的整数，X-表示一价的阴离子，
式(II)中，R2～R5相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Y-表示一价的阴离子，
式(III)中，R6～R9相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Z-表示一价的阴离子。
11.如权利要求7～10中任一项所述的试剂，其中，还含有过氧化氢测定试剂。
12.如权利要求11所述的试剂，其中，过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无型原体的试剂。
13.一种糖化血红蛋白测定试剂盒，用于测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白，其特征在于，包含含有蛋白质分解酶、卤素氧化物和表面活性剂的第一试剂以及含有果糖基肽氧化酶的第二试剂。
14.一种糖化血红蛋白测定试剂盒，用于测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白，其特征在于，包含含有蛋白质分解酶和表面活性剂的第一试剂以及含有果糖基肽氧化酶和卤素氧化物的第二试剂。
15.如权利要求13或14所述的试剂盒，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、溴酸或其盐和高碘酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。
16.如权利要求13～15中任一项所述的试剂盒，其中，表面活性剂为阳离子型表面活性剂。
17.如权利要求16所述的试剂盒，其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式(I)表
示的吡啶盐、下述通式(II)表示的盐和下述通式(III)表示的季铵盐组成的组中的阳离子型表面活性剂，
式(I)中，R1表示取代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，R
表示氢原子、取代
a
或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，n表示1～5的整数，X-表示一价的阴离子，
式(II)中，R2～R5相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Y-表示一价的阴离子，
式(III)中，R6～R9相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Z-表示一价的阴离子。
18.如权利要求13～17中任一项所述的试剂盒，其中，在第一试剂和第二试剂中或者在第二试剂和第一试剂中还分别含有过氧化物酶和无型原体。
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糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒技术领域
[0001]
本发明涉及糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒。背景技术
[0002] 糖化血红蛋白是在血红蛋白上结合葡萄糖而成的糖化物。血红蛋白具有由α链、β链构成的四聚体结构，将β链的N 末端糖化后的血红蛋白称为血红蛋白A1c(以下也记作HbA1c)，血糖值越高越增加，因此，作为糖尿病标志物而在临床检查中进行测定。
[0003] 作为糖化血红蛋白的测定方法，已知HPLC 法等谱法、电泳法、胶乳免疫凝集法等利用抗体的免疫测定法、使用作用于糖化蛋白的酶和作用于糖化肽和/或糖化氨基酸的酶的酶测定法等。
[0004] 作为糖化血红蛋白的酶测定法，已知如下方法(吸光度法)等：首先，利用变性剂使含有血红蛋白的试样中的血红蛋白变性，使蛋白质分解酶作用于变性后的血红蛋白，接着使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化肽，使生成的过氧化氢在过氧化物酶等过氧化活性物质存在下与氧化显型原体反应而生成素，由生成的素的吸光度测定糖化血红蛋白。
[0005] 但是，利用该吸光度法的糖化血红蛋白的测定中，大量存在于试样中的血红蛋白的影响成为问题。作为针对该问题的解决方法，已知例如：使用阳离子型表面活性剂和/或两性表面活性剂的方法(专利文献I)、使用砜化合物和/或硝基化合物的方法(专利文献2、专利文献3)、使用四唑化合物的方法(专利文献4)、使用聚氧乙烯烷基醚硫酸盐类等特定的阴离子系表面活性剂的方法(专利文献5)等。
[0006] 但是，这些方法中，也未必能够避免血红蛋白的影响，因而需要不受血红蛋白影响的、准确地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的方法。
[0007] 另外，基于氧化还原反应的底物和酶的测定方法中，已知为了避免还原剂、特别是抗坏血酸的妨碍而使用碘酸盐的方法(专利文献6)。但是，还不知道为了避免血红蛋白的影响而使用碘酸盐等卤素氧化物的方法。
[0008] 现有技术文献
[0009] 专利文献
[0010] 专利文献1：日本特开平3-010696号公报
[0011]
专利文献2：WO2003/107011小册子[0012]
专利文献3：日本特开2007-147630号公报[0013]
专利文献4：日本特开2000-210100号公报[0014]
专利文献5：WO2005/049858小册子[0015] 专利文献6：日本特开昭56-151358号公报
发明内容
[0016]
发明所要解决的问题
[0017] 本发明的目的在于提供用于不受血红蛋白的影响、准确且高灵敏度地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的方法和试剂。说 明 书CN 103620052 A
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