(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911096539.0
(22)申请日 2019.11.11
(71)申请人 福建医科大学
地址 350122 福建省福州市闽侯上街学府
北路1号福建医科大学药学院
(72)发明人 柯方 侯慧青 张志强 许贻文
王津 张鹏 林媚 陈艳 周孙英
(74)专利代理机构 福州智理专利代理有限公司
35208
代理人 王义星
(51)Int.Cl.
C07D 421/10(2006.01)
C09K 11/06(2006.01)
G01N 21/64(2006.01)
(54)发明名称
究
(57)摘要
本发明公开一种硒唑类荧光染料化合物的
合成及其性能研究，以苯并硒唑作为识别基团，
时检测HOCl水平提供一种可靠的方法。本发明探
针技术效果如下：可以灵敏地和选择性地与HOCl
响应并检测肿瘤活细胞中的HOCl水平，实现快速
监测肿瘤活细胞中的HOCl水平，可为肿瘤的早期
检测提供新方法。且含有硒化物官能团的荧光反
应体系较之其他的荧光化合物简单，具有发光效
率高，背景干扰小等特点，是一类具有广阔前途
的荧光探针。权利要求书2页 说明书6页 附图3页CN 110804050 A 2020.02.18
C N 110804050
A
1.一种含有硒化物官能团的荧光探针，其特征在于：该荧光探针具有如下结构，该荧光探针能检测细胞中的HOCl水平：
。
2.一种用于检测细胞中的HOCl水平的含有硒化物官能团的荧光探针的合成方法，包括如下步骤
（1）化合物 I（9-氨基吖啶）的合成:
在100 mL圆底烧瓶中，将1 mmol的2-碘苯胺和1.2 mmol的对溴苯甲醛溶解在30 mL无水二甲基亚砜（DMSO）中，再加入3 mmol硒粉，0.1 mmol活性铜粉和2 mmolKOH得反应混合物；将反应混合物在氮气气氛下在120℃下搅拌36 h，反应完成后，将混合物冷却至室温，用
饱和NaHCO3溶液稀释，然后用NH4Cl水溶液与乙酸乙酯萃取，将有机层用MgSO4干燥，并在减压下除去溶剂，通过硅胶柱谱法纯化残余物，用V乙酸乙酯：V石油醚=1: 50洗脱，得到淡黄化合物Ⅰ（9-氨基吖啶）固体；
（2）中间体化合物 II（2-（4-溴苯基）苯并[d] [1,3]硒唑）的合成：
在装有冷凝管和搅拌子的双颈瓶中加入3 mmol吖啶酮，充N2，在氮气的气氛中加入6 mL POCl3，在105 ℃下回流3 h，待反应结束后，冷却至室温，将反应液边搅拌边缓慢滴入冰水中，将浓氨水和氯仿的混合液加入到上述液体中，分离氯仿层，无水硫酸镁干燥，过滤，得到淡黄液体，用V乙酸乙酯：V石油醚=1：3过柱纯化，得到白 9-氯吖啶针状结晶；在100 mL圆底烧瓶中在70℃下添加1 mmol 9-氯吖啶溶于苯酚，加入2 mmol碳酸铵，快速升温至120 ℃反应2 h，待反应结束倒入10wt%的NaOH中，过滤，并用10wt % NaOH溶液洗涤，得淡黄化合物Ⅱ（2-（4-溴苯基）苯并[d] [1,3]硒唑）固体；
（3）荧光探针III（N-（4-（苯并[d][1,3]硒唑-2-基）苯基）吖啶-9-胺）的合成：
在100mL 圆底烧瓶中，加入1 mmol的2-(4-溴基苯基)苯并硒唑，1.2 mmol的9-氨基吖啶，0.1 mmol的CuI，2 mmol的Cs2CO3，0.2 mmol的N，N-二甲基乙二胺（DMEDA）溶解在30 mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，N2保护下120 ℃回流反应24 h；反应完后，加水与乙酸乙酯萃取，再旋干乙酸乙酯，通过谱柱分离，用V乙酸乙酯：V石油醚=2: 1洗脱，得到荧光探针Ⅲ（N-（4-（苯并[d][1,3]硒唑-2-基）苯基）吖啶-9-胺）。
3.权利要求1所合成的化合物能灵敏地和选择性地与HOCl响应，在制备用于检测细胞的HOCl水平的药物中的应用。
硒唑类荧光染料化合物的合成及其性能研究
技术领域
[0001]本发明公开一种苯并硒唑荧光染料化合物的合成方法，以苯并硒唑作为识别基团，用于检测细胞中的HOCl水平。
背景技术
[0002] 检测活性氮和活性氧的方法有比法、质谱法、电化学分析法、电子自旋共振波谱法、紫外可见光谱分析法和荧光分析法等。其中荧光分析法具有灵敏度高、生物相容性好、易于化学和生物学修饰等
优点，备受分析化学、生物学和医学等领域的关注，尤其是近年来被广泛应用于活性氮和活性氧检测，大大推进人们对机体活性氮和活性氧的研究进程。近年来，通过众多科学家不断的研究努力，关于ROS/RNS及其在维持人体生理和生物过程中的重要作用的研究成果陆续报道出来。HOCl作为氧化剂，可与细胞内的生物硫醇基团（半胱氨酸，高半胱氨酸和谷胱甘肽）和硫醚（如甲硫氨酸）反应。由于这种作用，生物系统中如果存在过量浓度的HOCl可导致炎症相关组织损伤和一系列危及生命的疾病，如神经退行性疾病（如阿尔茨海默病），动脉粥样硬化，心血管疾病，肝脏缺血再灌注损伤，肺损伤和癌症等。因此，开发生物相容性好且具有高灵敏度和高选择性的ROS荧光探针分子来检测细胞中的HOCl浓度对于生命系统至关重要。通过实现快速监测肿瘤活细胞中的HOCl水平，为肿瘤的早期检测提供新方法 。
[0003]硒是生物学中必需的微量元素，在谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的活性位点中起重要作用并将生物过氧化氢转化为水。有研究表明有机硒化合物选择性检测ROS/RNS，生物硫醇和氨基酸等，因为它们具有抗氧化，抗炎，抗肿瘤和抗真菌的特性。近年来，有机硒化合物的设计和合成生物学上重要的分析物的选择性检测已成为研究人员极为关注的领域。现已报道合成了许多荧光团衍生物，例如荧光素，二苯并噻唑啉环己烯，BODIPY，以检测超氧化物。但关于苯并硒唑作为识别基团检测HOCl的报道较少，且含有硒化物官能团的荧光反应体系较之其他的荧光化合物简单，具有发光效率高，背景干扰小等特点，是一类具有广阔前途的荧光探针。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供一种苯并硒唑荧光染料化合物的合成方法，含有硒化物官能团的荧光反应体系较之其他的荧光化合物简单，具有发光效率高，背景干扰小等特点，是一类具有广阔前途的荧光探针。
[0005]本发明的另一目的是提供一类能够灵敏地和选择性地与HOCl响应并检测肿瘤活细胞中的HOCl水平，实现快速监测肿瘤活细胞中的HOCl水平的方法， 该方法具有操作方便、原料廉价、灵敏度高等优点。
[0006]本发明所采用的技术方案为：苯并硒唑类荧光探针，其特征在于：该荧光探针具有如下结构，该荧光探针能检测细胞中的HOCl水平：
。
[0007]本发明上述用于检测细胞中的HOCl水平的荧光探针的合成方法，该方法步骤如下：
（1）化合物 I（9-氨基吖啶）的合成:
在100 mL圆底烧瓶中，将2-碘苯胺（1 mmol）和对溴苯甲醛（1.2 mmol）溶解在30 mL无水二甲基亚砜（DMSO）中，再加入硒粉（3 mmol），活性铜粉（0.1 mmol）和KOH（2 mmol）。将反应混合物在氮气气氛下在120℃下搅拌36小时。反应完成后，将混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3溶液稀释。然后用NH4Cl水溶液与乙酸乙酯萃取。 将有机层用MgSO4干燥，并在减压下
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议