(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.04.30
C N 103755758
A (21)申请号 201410028136.3
(22)申请日 2014.01.21
C07H 17/08(2006.01)
C07H 1/08(2006.01)
(71)申请人北京安汀医药生物科技有限公司
地址100101 北京市朝阳区小营路13号亚
非大厦9008室
(72)发明人程雪翔
(74)专利代理机构北京品源专利代理有限公司
11332
代理人巩克栋
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种制霉菌素的制备方法，包
括使用水溶性有机溶剂从诺尔斯氏链霉菌发酵液
提取制霉菌素以及将制霉菌素进一步纯化结晶的
步骤。本发明所述制备方法采用特定的提取工艺
及纯化结晶工艺，获得了高收率、高纯度的制霉菌
素结晶的制备，适于大规模的工业化生产。
(51)Int.Cl.
权利要求书2页 说明书4页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书4页(10)申请公布号CN 103755758 A
1.一种制霉菌素的制备方法，其特征在于，包括：
（1）将水溶性有机溶剂加入诺尔斯氏链霉菌发酵液中；
（2）调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为4-6，然后为6.5-7.5；过滤去除未溶解的物质，蒸发去除所述有机溶剂，得制霉菌素沉淀； （3）将步骤（2）所得制霉菌素沉淀在含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中制浆，将所得浆液升温至55-58℃，然后冷却至6-8℃，从浆液中回收制霉菌素。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述水溶性有机溶剂为异丙醇和/或正丙醇；
优选地，所述水溶性有机溶剂在所得混合溶液中的体积百分比为55%-72%、优选为60%-70%、更优选为65%。
3.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，步骤（2）为：调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为
4.5-
5.5、优选为5，然后为
6.5-
7.5、优选为7；过滤去除未溶解的物质，蒸发去除所述有机溶剂，回收所得沉淀即为制霉菌素沉淀。
4.根据权利要求1-3任一项所述制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中，六偏焦磷酸钠的按g/ml计的质量体积百分含量为0.8-3.0%、优选为1.0-3.0%、更优选为2.2%；
优选地，所述含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中，异丙醇的体积百分含量为20-40v/ v%、优选为30%。
5.根据权利要求1-4任一项所述制备方法，其特征在于，还包括步骤：
（4）将步骤（3）回收的制霉菌素溶解在甲醇-氯化钙溶液中，加入水，调节溶液的pH值为5.9-6.1，过滤去除未溶解的物质，调节所得滤液的pH值为5.3-5.5，加热至50-55℃持续15-40分钟、优选20-30分钟，加入与缩减之前的水体积相当的水，然后从所得混合物中回收晶体得制霉菌素结晶。
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述甲醇-氯化钙溶液中，氯化钙的按g/ml计的质量体积百分比为1-4%、优选为2-3%、更优选为2%。
7.根据权利要求5或6所述制备方法，其特征在于，步骤（4）中，第一次加入的水量为甲醇-氯化钙溶液体积的1/2。
8.根据权利要求5-7任一项所述制备方法，其特征在于，步骤（4）具体为：
将步骤（3）回收的制霉菌素溶解在氯化钙质量体积百分含量为2%的甲醇-氯化钙溶液中，加入1/2体积的水，调节溶液的pH值为5.9-6.1、优选为6.0，过滤去除未溶解的物质，调节所得滤液的pH值为5.3-5.5、优选为5.4，加热至50-55℃持续15-40分钟、优选20-30分钟，加入与缩减之前的水体积相当的水，调节并维持溶液的pH值为5.0-5.2、优选为5.1，然后从所得混合物中回收晶体得制霉菌素结晶。
9.根据权利要求1-8任一项所述制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将正丙醇和/或异丙醇加入诺尔斯氏链霉菌发酵液中，使得其在混合溶液中的体积百分比为65%；
（2）调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为5，然后为7；过滤去除未溶解的物质，蒸发去除有机溶剂，得制霉菌素沉淀；
（3）将步骤（2）所得制霉菌素沉淀在含以g/ml计的2.2%六偏焦磷酸钠的30v/v%的异
丙醇水溶液中制浆，将所得浆液升温至55-58℃，然后冷却至6-8℃，从浆液中回收制霉菌素；
（4）将步骤（3）回收的制霉菌素溶解在氯化钙质量体积百分含量为2%的甲醇-氯化钙溶液中，加入1/2体积的水，调节溶液的pH值为5.9-6.1、优选为6.0，过滤去除未溶解的物质，调节所得滤液的pH值为5.3-5.5、优选为5.4，加热至50-55℃持续20-30分钟，加入与缩减之前的水体积相当的水，调节并维持溶液的pH值为5.0-5.2、优选为5.1，然后从所得混合物中回收晶体得制霉菌素结晶。
一种制霉菌素的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药物制备技术领域，尤其涉及一种制霉菌素原料药的制备方法。
背景技术
[0002] 制霉菌素是由Hazen和Brown于1950年发现的由Streptomyces noursei发酵后分离得到的抗真菌类抗生素，在1956年开始临床应用，对念珠菌引起的胃肠炎、阴道感染，以及由于长期使用广谱抗生素所致的念珠菌病的预防和有良好的效用。
[0003] 由诺尔斯氏链霉菌属制备制霉菌素的方法在1951年1月12日提交的序号为208,978的Hazen和Bro
wn的同时待审的申请中有描述。粗制的制霉菌素浓缩液可通过用几部分的甲醇提取菌丝垫，然后用乙酸乙酯分级沉淀，用0.85%NaCl溶液洗涤沉淀，将沉淀溶解在甲醇中并用乙醚分级沉淀来处理甲醇溶液。活性晶体材料可通过在丁醇和盐水之间分配和通过从甲醇中部分沉淀由所得粗制浓缩液中获得，。高纯度的晶体制霉菌素通过使部分纯化的制霉菌素浓缩液在通过混合正丁醇、甲醇、水和己烷制作的两相系统中分配，并允许该系统暴露于空气蒸发直到晶体在截面上聚集而得。
[0004] 以上描述的方法可产生晶体制霉菌素，但是由于杂质的存在和低产量备受争议，并且难以控制和进行大规模的工业化生产。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提出一种高收率、高纯度的制霉菌素制备方法。
[0006] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：
[0007] 一种制霉菌素的制备方法，包括：
[0008] （1）将水溶性有机溶剂加入诺尔斯氏链霉菌发酵液中；
[0009] （2）调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为4-6，然后为6.5-7.5；过滤去除未溶解的物质，蒸发去除所述有机溶剂，得制霉菌素沉淀；
[0010] （3）将步骤（2）所得制霉菌素沉淀在含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中制浆，将所得浆液升温至55-58℃，然后冷却至6-8℃，从浆液中回收制霉菌素。
[0011] 上述制备方法中，作为优选，步骤（1）中，所述水溶性有机溶剂为异丙醇和/或正丙醇；
[0012] 优选地，所述水溶性有机溶剂在所得混合溶液中的体积百分比为55%-72%、优选为60%-70%、更优选为65%。
[0013] 在具体的实施方式中，所述水溶性有机溶剂在所得混合溶液中的体积百分比可以为55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%或72%。[0014] 作为优选，步骤（2）为：调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为4.5-5.5、优选为5，然后为6.5-7.5、优选为7；过滤去除未溶解的物质，蒸发去除所述有机溶剂，回收所得沉淀即为制霉菌素沉淀。
[0015] 在具体的实施方式中，步骤（2）中，可调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为4.5、
4.6、4.7、4.8、4.9、
5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5，然后再调节至
6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、
7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5。
[0016] 作为优选，步骤（3）中，所述含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中，六偏焦磷酸钠的按g/ml计的质量体积百分含量为0.8-3.0%，优选为1.0-3.0%，更优选为2.2%。
[0017] 在具体的实施方式中，所述含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中，六偏焦磷酸钠的按g/ml计的质量体积百分含量可以为0.8%、0.9%、1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、2.9%或3.0%。[0018] 优选地，所述含六偏焦磷酸钠的异丙醇水溶液中，异丙醇的体积百分含量为20-40v/v%、优选为30%。
[0019] 作为优选，上述制备方法还包括进一步纯化结晶制霉菌素的步骤，具体为：[0020] （4）将步骤（3）回收的制霉菌素溶解在甲醇-氯化钙溶液中，加入水，调节溶液的pH值为5.9-6.1，过滤去除未溶解的物质，调节所得滤液的pH值为5.3-5.5，加热至50-55℃持续15-40分钟、优选20-30分钟，加入与缩减之前的水体积相当的水，然后从所得混合物中回收晶体得制霉菌素结晶。
[0021] 作为优选，步骤（4）中，所述甲醇-氯化钙溶液中，氯化钙的按g/ml计的质量体积百分比为1-4%、优选为2-3%、更优选为2%。
[0022] 作为优选，步骤（4）中，第一次加入的水量为甲醇-氯化钙溶液体积的1/2。[0023] 更优选地，步骤（4）具体为：
[0024] 将步骤（3）回收的制霉菌素溶解在氯化钙质量体积百分含量为2%的甲醇-氯化钙溶液中，加入1/2体积的水，调节溶液的pH值为5.9-6.1、优选为6.0，过滤去除未溶解的物质，调节所得滤液的pH值为5.3-5.5、优选为5.4，加热至50-55℃持续15-40分钟、优选20-30分钟，加入与缩减之前的水体积相当的水，调节并维持溶液的pH值为5.0-5.2、优选为5.1，然后从所得混合物中回收晶体得制霉菌素结晶。
[0025] 本发明的一个特别优选的实施方案具体包括如下步骤：
[0026] （1）将正丙醇和/或异丙醇加入诺尔斯氏链霉菌发酵液中，使得其在混合溶液中的体积百分比为65%；
[0027] （2）调节步骤（1）所得混合溶液的pH值为5，然后为7；过滤去除未溶解的物质，蒸发去除有机溶剂，得制霉菌素沉淀；
[0028] （3）将步骤（2）所得制霉菌素沉淀在含以g/ml计的2.2%六偏焦磷酸钠的30v/v%的异丙醇水溶液中制浆，将所得浆液升温至55-58℃，然后冷却至6-8℃，从浆液中回收制霉菌素；
[0029] （4）将步骤（3）回收的制霉菌素溶解在氯化钙质量体积百分含量为2%的甲醇-氯化钙溶液中，加入1/2体积的水，调节溶液的pH值为5.9-6.1、优选为6.0，过滤去除未溶解的物质，调节所得滤液的pH值为5.3-5.5、优选为5.4，加热至50-55℃持续20-30分钟，加入与缩减之前的水体积相当的水，调节并维持溶液的pH值为5.0-5.2、优选为5.1，然后从所得混合物中回收晶体得制霉菌素结晶。
[0030] 本发明所述制备方法采用特定的提取工艺及纯化结晶工艺，获得了高收率、高纯度的制霉菌素结晶的制备，适于大规模的工业化生产。
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