[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101124890A [43]公开日2008年2月20日
[21]申请号200610030214.9[22]申请日2006.08.18
[21]申请号200610030214.9
[71]申请人上海雷允上科技发展有限公司
地址200127上海市浦东新区东方路1271号
共同申请人上海市中药研究所
[72]发明人顾慧芬 [74]专利代理机构上海光华专利事务所代理人余明伟
[51]Int.CI.A01H 4/00 (2006.01)C12N 5/04 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 5 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及
金线莲的组培方法及其应用。本发明提供了一种金
线莲组培苗培养方法：以野生金线莲为原材料进行
诱导培养，通过无激素培养，获得金线莲组培苗无
菌培养系，建立适合大规模生产的组培苗培养系统，
其培养物的主要有效成分(多糖、氨基酸)与野生金
线莲接近且稳定。主要内容包括组培苗培养基的配
制；组培苗培养条件；组培苗栽培技术及用途。解
决了野生金线莲的自然资源匮乏的问题。
200610030214.9权 利 要 求 书第1/2页
1.一种金线莲组培苗培养方法，其特征包括下列步骤：
a)培养基配置：
I)培养基配方为：
MS+生长素+细胞分裂素
生长素：取自萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸中的一种或几种，含量为0.1
-2mg/L；
细胞分裂素：取自6-苄基氨基嘌呤、激动素、玉米素中的一种或几种，含
量为0.1-2mg/L；
II)按I)配方配置培养基，调节培养基pH值在5.6-5.8范围内，加入重量百
分比8.8-9.0％的琼脂，常规高压灭菌；
b)选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，灭菌后接种于按步骤a)配制的固体培养基中进行诱导培养，培养条件为：光照(500-3000 1x)12小时/天，温度20~26℃；
c)经诱导形成的再生芽依次置于生长素和细胞分裂素浓度从高到低再到零的
驯化培养基上进行培养，生长素和细胞分裂素浓度递减梯度为0.1~0.5mg/L，
每个梯度培养30~40天，培养温度20~26℃，光照(500-3000 1x)12小时/天，
直至培养基中生长素与细胞分裂素浓度为0；
d)从步骤c)的无激素培养基上选取生长快且健壮的组培苗进行继代培养。
2.如权利要求1所述的金线莲组培苗培养方法，其特征在于，还包括下列步骤：
a)组培苗移栽：
冲洗掉组培苗根部的培养基，用0.25-0.5％多菌灵溶液浸10分钟后移栽
至有遮荫棚的基质中；
200610030214.9权 利 要 求 书 第2/2页 b)组培苗栽培条件：
温度：20～25℃
水分：相对湿度为75～85％
光照：自然散射光
基质：疏松、透气、湿润、弱酸性
用黄豆饼发酵后的稀释液定期浇肥：每隔10-15天。
3.一种如权利要求1或2所述金线莲组培苗培养方法获得的金线莲栽培苗的应用，其特征在于将所述金线莲栽培苗用于制备袋泡茶、饮料和口服制剂。
4.如权利要求3的金线莲栽培苗的应用，其特征在于，用所述金线莲栽培苗制备的袋泡茶、饮料和口服制剂中，总多糖含量为：1-20％；总氨基酸含量为：1-10％。
5.如权利要求3所述的金线莲栽培苗的应用，其特征在于，所述的口服制剂选自：胶囊剂、片剂或颗粒剂中的一种。
200610030214.9说 明 书第1/5页
金线莲组培苗培养方法
技术领域
本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及金线莲的组培苗培养方法及其应用。
背景技术
金线莲为兰科花叶开唇兰属多年生的珍稀药用植物，全草均可入药。具有清热解毒、固肾平肝、降血糖等功效，近来年的药理学研究表明，金线莲有明显的乳腺癌的作用。由于其营养体繁殖缓慢，种胚发育不全，在自然状态下难以繁殖，造成野生金线莲的自然资源储量日见减少，已成为濒危的药用植物。利用组织培养技术对金线莲进行无性快速繁育，是解决金线莲资源匮乏的关键。目前，有关金线莲的研究备受人们的关注，虽有一些金线莲组织培养的研究，但试管苗的无激素培养及其栽培苗应用未见报道，为了确保金线莲栽培苗食用的安全性，需要寻一种金线莲组培苗无激素培养的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是在于提供一种金线莲组培苗无激素培养的方法，用该方法培育出来的金线莲繁殖快速、适合大规模生产，食用安全，有效成分(多糖、氨基酸)含量与野生型金线莲相似，且相对稳定，解决其营养体繁殖缓慢及生产应用中资源匮乏问题。
本发明的一方面，提供了一种金线莲组培苗培养方法，包括下列步骤：
200610030214.9说 明 书 第2/5页 a)培养基配置：
I)培养基配方为：
MS+生长素+细胞分裂素
生长素：取自萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)中的一种或几种，含量为0.1-2mg/L，优选0.1-0.5mg/L；
细胞分裂素：取自6-苄基氨基嘌呤(BA)、激动素(KT)、玉米素(ZT)中的一种或几种，含量为0.1-2mg/L，优选0.1-0.5mg/L；
II)按I)配方配置培养基，调节培养基pH值在5.6-5.8范围内，加入8.8-9.0％的琼脂，常规高压灭菌20分钟；
b)选择野生金线莲茎段或茎尖为种源，灭菌后接种于按步骤a)配制的固体培养基中进行诱导培养，培养条件为：光照(500-3000lx)12小时/天，温度20~26℃；
c)经诱导形成的再生芽依次置于生长素和细胞分裂素浓度从高到低再到零的驯化培养基上进行培养(递减梯度0.1~0.5m g/L)，每个梯度培养30天，培养温度20~26℃，光照(500-3000l x)12小时/天，直至培养基中生长素与细胞分裂素浓度为0；
d)从步骤c)的无激素培养基上选取组培苗进行继代培养(每月一次)，优选生长快且健壮的苗。
本发明的另一方面，还提供了按上述方法获得的组培苗的大田栽培技术，包括下列步骤：
a)组培苗移栽：
清水冲洗掉组培苗根部的培养基后，再用0.25-0.5％多菌灵溶液浸10分
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