(10)申请公布号 CN 102914598 A
(43)申请公布日 2013.02.06C N 102914598 A
*CN102914598A*
(21)申请号 201110220913.0
(22)申请日 2011.08.03
G01N 30/02(2006.01)
G01N 1/28(2006.01)
(71)申请人漳州片仔癀药业股份有限公司
地址363000 福建省漳州市上街1号
(72)发明人于娟 高飞 陈啓兰 刘冬英
(74)专利代理机构北京太兆天元知识产权代理
有限责任公司 11108
代理人
张韬
(54)发明名称
(57)摘要
本发明提供一种片仔癀中三七药材的质量检
测方法；本发明还提供一种片仔癀的质量检测方
法。本发明质量检测方法确认了三七药材的提取
方法，优化了谱条件，建立了三七药材及片仔癀
指纹图谱结合质谱分析能更有效地监控和评价片
仔癀的质量，使片仔癀质控体系更加完整，可从整
体反映片仔癀内在质量的稳定、可控。
(51)Int.Cl.
权利要求书3页 说明书22页 附图1页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书 3 页 说明书 22 页 附图 1 页
1.一种片仔癀中三七药材的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱检测方法：
照高效液相谱法：谱条件及系统适用性试验：选用Welch XB-C18谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～40分钟22％乙腈，流速0.5mL/min，40～50分钟22～30％乙腈，流速0.5mL/min，50～80分钟30～55％乙腈，流速0.5mL/min，80～95分钟55％乙腈，流速0.5mL/min，95～115分钟55～90％乙腈，流速0.8mL/min，115～135分钟90％乙腈，流速0.8mL/min，135～140分钟90～22％乙腈，流速0.5mL/min，柱温为25℃，
检测波长为203nm；
供试品溶液制备：取三七药材粉1～10重量份，精密称定，于具塞锥形瓶中，准确加入50～200体积份70％乙醇溶液，称重，放置过夜；置80℃～90℃水浴回流1～3小时，待冷至室温，再称重，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，准确移取25～100体积份滤液置于烧杯中，100℃水浴锅上方浓缩至干，用70％乙醇溶液溶解，转移至10体积份容量瓶中，定容；用0.45μm针式滤膜过滤至2体积份样品瓶，得三七药材供试品溶液，备用；
对照品溶液制备：分别准确称取对照品三七皂苷R
10.00569g、人参皂苷Rg
1
0.00896g、
Rb
10.00809g、Re0.00103g、Rg
2
0.00605g、Rh
1
0.00409g、Rd0.00787g、Rf0.01180g、
Rc0.00619g，加甲醇溶解定容25mL，制成对照品混合溶液；
测定法：分别吸取供试品溶液和对照品混合溶液0.005体积份，注入液相谱仪中，记录170分钟谱图，以峰面积最大、较稳定的共有峰Rg1为内标物作为参照物，分别以其保留时间和峰面积作为1，计算各共有峰相对保留时间；供试品指纹图谱与标准指纹图谱相似度为1；
所得指纹图谱应有23个共有峰，分别是1-12、14-19、23、26、28、29、32号峰，共有峰的相对保留时间分别为：27.125、37.341、39.333、57.772、63.659、64.751、65.441、66.391、67.619、68.662、69.171、69.773、71.53、72.633、73.478、81.212、83.71、85.151、91.732、104.717、109.83、110.29、113.46；
相对峰面积比值分别为：0.199、1.000、0.118、0.006、0.020、0.021、0.006、0.670、0.038、0.004、0.026、0.047、0.175、0.007、0.029、0.006、0.006、0.013、0.012、0.004、0.0019、0.004、0.009。
2.如权利要求1所述的片仔癀中三七药材的质量检测方法，其特征在于该方法还包括如下步骤：
按照权利要求1中所述液相谱条件进行液质联用分析，根据各峰所对应的编号、谱图中的位置和相应的质谱图推测各峰化学式，质谱条件为：雾化器压力：-35psi，干燥气流速：9.0L/min，干燥温度：325℃；
各共有峰对应的化学式分别为：1-3号、8号、11-12号峰及14号分别是三七皂苷R
1
、人
参皂苷Rg
1、Rb
1
、Re、Rg
2
、Rh
1
、Rd；4号峰为C
41
H
70
O
13
；5号峰为C
59
H
100
O
27
；6号峰为C
59
H
100
O
27
；7
号峰为C
42H
72
O
14
和C
54
H
90
O
23
；9号峰为C
41
H
70
O
13
；10号峰为C
53
H
90
O
22
；
15号峰为C
36
H
62
O
9
；16号
峰为C
48H
82
O
18
；17号峰为C
42
H
70
O
13
；18号峰为C
36
H
60
O
8
；19号峰为C
36
H
60
O
8
；23号峰为C
25
H
8
O
18
和
C 21H
8
O
17
；26号峰为C
18
H
32
O
3
；28号峰为C
29
H
12
O
22
；29号峰为C
15
H
21
O
2
；32号峰为C
29
H
14
O
25
。
3.如权利要求1或2所述的片仔癀中三七药材的质量检测方法，其特征在于该方法中
的供试品溶液制备为：
取三七药材粉1.0g，精密称定，于250mL具塞锥形瓶中，准确加入50.00ml70％乙醇溶液，称重，放置过夜；置80℃水浴回流2小时，待冷至室温，再称重，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，准确移取25.00ml滤液置于50mL烧杯中，100℃水浴锅上方浓缩至干，用70％乙醇溶液溶解，转移至10mL容量瓶中，定容；用0.45μm针式滤膜过滤至2mL样品瓶，得三七药材供试品溶液，备用。
4.一种片仔癀的质量检测方法，，其特征在于该方法包括如下指纹图谱检测：
照高效液相谱法：谱条件及系统适用性试验：选用Welch XB-C18谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～40分钟22％乙腈，流速0.5mL/min，40～50分钟22～30％乙腈，流速0.5mL/min，50～80分钟30～55％乙腈，流速0.5mL/min，80～95分钟55％乙腈，流速0.5mL/min，95～115分钟55～90％乙腈，流速0.8mL/min，115～135分钟90％乙腈，流速0.8mL/min，135～140分钟90～22％乙腈，流速0.5mL/min，柱温为25℃，检测波长为 203nm；
供试品溶液制备：取市售片仔癀(锭剂)1～10重量份，经研钵研细，过筛5号或80目，
精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入50～200体积份70％乙醇溶液(V
乙醇∶V
水
＝7∶3)，
称重，放置过夜；置80℃～90℃水浴回流1～3小时，待冷至室温，再称重，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，准确移取25～100体积份滤液置于烧杯中，100℃水浴锅上方浓缩至干，用70％乙醇溶液溶解，转移至10体积份容量瓶中，定容；用0.45μm针式滤膜过滤至2体积份样品瓶，备用；
对照品溶液制备：分别准确称取对照品三七皂苷R
10.00569g、人参皂苷Rg
1
0.00896g、
Rb
10.00809g、Re0.00103g、Rg
2
0.00605g、Rh
1
0.00409g、Rd0.00787g、Rf0.01180g、
Rc0.00619g，加甲醇溶解定容25mL，制成对照品混合溶液；
测定法：分别吸取供试品溶液和对照品混合溶液0.005体积份，注入液相谱仪中，记录170分钟谱图，以峰面积最大、较稳定的共有峰Rg1为内标物作为参照物，分别以其保留时间和峰面积作为1，计算各共有峰相对保留时间；供试品指纹图谱与标准指纹图谱相似度大于0.998；
所得指纹图谱应有16个共有峰，共有峰分别是1-9、11、12、14-16、19和27号峰，共有峰的相对保留时间分别为：27.557、37.956、39.968、57.919、63.809、64.917、65.613、66.549、67.785、69.34、69.948、71.733、72.821、73.697、85.395、105.602；
相对峰面积比值分别为：0.204、1.000、0.116、0.006、0.020、0.021、0.006、0.677、0.040、0.026、0.050、0.183、0.015、0.033、0.012、0.013。
5.如权利要求4所述的片仔癀的质量检测方法，其特征在于该方法还包括如下步骤：
按照所述液相谱条件进行液质联用分析，根据各峰所对应的编号、谱图中的位置和相应的质谱图推测各峰化学式，质谱条件为：雾化器压力-35psi，干燥气流速-9.0L/ min，干燥温度-325℃；
各共有峰对应的化学式分别为：1-3号、8号、11-12号峰及14号峰分别是三七皂苷R
1
、
人参皂苷Rg
1、Rb
1
、Re、Rg
2
、Rh
1
、R
d
；4号峰为C
41
H
70
O
13
；
5号峰为C
59
H
100
O
27
；6号峰为C
59
H
100
O
27
；
7号峰为C
42H
72
O
14
或C
54
H
90
O
23
；9号峰为C
41
H
70
O
13
；15号峰为C
36
H
62
O
9
；16号峰为C
48
H
82
O
18
；19号
峰为C
36H
60
O
8
；27号峰为C
18
H
32
O。
6.如权利要求4或5所述的片仔癀的质量检测方法，其特征在于该方法中的供试品溶液制备为：
供试品溶液制备：取与三七药材相对应的十批号的片仔癀，每批1.0g，精密称定，置于250mL具塞锥形
瓶中，准确加入50.00ml70％乙醇溶液，称重，放置过夜；置80℃水浴回流2小时，待冷至室温，再称重，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，准确移取25.00ml滤液置于50mL烧杯中，100℃水浴锅上方浓缩至干，用70％乙醇溶液溶解，转移至10mL容量瓶中，定容；用0.45μm针式滤膜过滤至2mL样品瓶，备用。
1/22页
片仔癀原药材及片仔癀的质量检测方法技术领域
[0001] 本发明涉及中药材的质量检测方法，特别涉及片仔癀原药材及片仔癀的质量检测方法。
背景技术
[0002]
片仔癀的质量控制标准收载于卫生部标准中药成方制剂第十八册
WS 3-B-3381-98，仅收载两个反应及三七的薄层谱鉴别项目。片仔癀是由三七、牛黄、蛇胆、麝香等多种名贵中药材精制而成的复方中药制剂，生产工艺条件乃国家级保密。陈海滨等对片仔癀中三七的薄层鉴别进行改进，增加了对牛黄和蛇胆的薄层谱鉴别，同时利用气相谱法测定麝香酮的含量；赖延
锦等采用高效液相谱梯度洗脱法同时测定了三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1及牛磺胆酸钠四种成分的含量；此外，还有一些相关研究，主要是测定片仔癀中某单一组分，如分别用HPLC 和紫外分光光度法测定胆红素、利用气相谱测定麝香酮等。而片仔癀由三七、牛黄、蛇胆、麝香等多种名贵中药材精制而成的复方中药制剂，其成分相当复杂，包含百十种化学成分，其药效是各成分整体协同的结果。因此，仅用有限的化学对照品，测定药物中少数几种化学成分或浓度大的化学成分，不一定真正代表药物中有效的化学成分，而其它化学成分和浓度小的化学成分也有可能对疗效有一定的影响。单一或少量化学成分的定性或定量指标，难以保证制剂的质量稳定，需要进一步发展片仔癀质量的控制方法和手段，建立更加科学、完善的质量标准，符合国际药品质量控制要求，保证片仔癀质量稳定，使产品更具有国际市场竟争力。
[0003] 中药指纹图谱是指以系统的化学成分研究和药理学研究为基础，经化学测定或基因鉴定得到的某种或某产地中药及其制剂所共有的、具有特异性的组分体(某类或数类成分)特征图谱或图像。中药指纹图谱的基本属性是整体性和模糊性，要求专属、稳定、实用，具有系统性、特征性和稳定性等特征。指纹图谱既具定性(通过特征峰、峰位)功能，又具定量(峰高、峰面积)功能，在一定程度上可较全面控制药品质量，同时通过对原药材和成品的指纹图谱控制，可基本解决批次间的一致性问题。发明内容
[0004]
本发明目的在于提供一种片仔癀中三七药材的质量检测方法；本发明目的还在于
提供一种片仔癀的质量检测方法。
[0005] 本发明目的是通过如下技术方案实现的。
[0006] 1、本发明片仔癀中三七药材的质量检测方法，包括如下指纹图谱检测方法：
[0007] 照高效液相谱法：谱条件及系统适用性试验：选用Welch XB-C18谱柱(250mm×4.6mm ，5μm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～40分钟22％乙腈，流速0.5mL/min ，40～50分钟22～30％乙腈，流速0.5mL/min ，50～80分钟30～55％乙腈，流速0.5mL/min ，80～95分钟55％乙腈，流速0.5mL/min ，95～115分钟55～90％乙腈，流速0.8mL/min ，115～135分钟90％说 明 书CN 102914598 A
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