一种用于宫颈癌超声造影的造影剂及其制备方法与流程

1.本发明属于诊断试剂领域，具体涉及一种用于宫颈癌超声造影的造影剂及其制备方法。

背景技术：

2.宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，且近年来年轻患者增多，准确诊断宫颈癌对其方式的选择及其效果有着重要的意义。超声是一种无创、费用低廉的检查方法，特别是超声造影技术的迅速发展，可以显示病灶内的微循环改变，为临床提供了更可靠的影像学信息。
3.例如，张金慧等探讨了超声造影在宫颈癌分期中的价值(超声造影在宫颈癌分期中的应用[j].临床超声医学杂志，2013，15(6):4.)，其选择经病理证实并行常规超声和超声造影检查的宫颈癌患者30例，观察宫颈病变与周围组织的关系，分析其造影资料，比较时间-强度曲线的形态及造影参数的差异.结果超声造影诊断28例，诊断符合率为93.33％；常规超声诊断20例，诊断符合率为66.67％，二者比较差异有统计学意义(p＝0.01).造影特点为造影剂注入14.0s时，宫颈癌病灶早于(16.0s)，高于肌层显影，待注入26.7s时，病灶内的造影剂先消退，呈低增强，周边呈略高增强，可清晰的显示宫颈病变的浸润范围.较周围正常宫体组织，宫颈癌病灶的峰值强度升高，达峰时间缩短，差异有统计学意义(p0.05)。研究结论显示宫颈癌的超声造影表现有一定的特异性，可辅助临床分期。
[0004]
超声造影剂是一类能够显著增强超声检测信号的诊断试剂，其一般包含微气泡结构，对超声波有强散射的特性。在上述研究中，使用的超声造影剂为声诺维。但声诺维是一种无定向选择作用的全身性造影剂，其敏感性较低，特异性不高。为了进一步增强超声造影剂的靶向性成像增强效果，靶向超声造影剂的研究也越来越多，现有的靶向超声造影往往利用抗原-抗体、生物素-抗生物素等手段实现靶向效果，具有制备方法复杂、保存运输条件要求高、使用成本高等缺点，从而限制了其应用。
[0005]
例如，中国授权专利cn113041365b公开了一种增强颈动脉硬化超声诊断的靶向超声造影剂及其制备方法，所述增强颈动脉硬化超声诊断的靶向超声造影剂由包含透明质酸及任选甘露糖及其衍生物的磷脂、生物惰性气体制备而成，低成本的实现了超声造影剂的颈动脉硬化靶向性，增强了颈动脉硬化的超声显像效果。
[0006]
再例如，中国授权专利cn111686263b公开了一种增强下肢动脉硬化超声诊断的靶向超声造影剂及其制备方法，所述增强下肢动脉硬化超声诊断的靶向超声造影剂由氨基修饰脂膜的超声造影剂、纤维蛋白靶向多肽制备而成，实现了造影剂在下肢动脉硬化患处的富集，明显延长了造影持续时间，显著增强了下肢动脉硬化的超声显像效果。
[0007]
然而，如何开发一种能够增强宫颈癌超声造影的造影剂，仍然是本领域的技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现要素：

[0008]
针对现有技术的缺陷，本发明提供了一种能够增强宫颈癌超声造影的造影剂。具体而言，为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案：
[0009]
本发明一方面涉及一种用于宫颈癌超声造影的造影剂，其特征在于所述造影剂包括：聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽ngksavlf和全氟烯烃气体。
[0010]
在本发明的一个优选实施方式中，所述全氟烯烃气体选自：全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、全氟己烷、全氟辛烷中的一种或者多种的组合；更优选的，所述全氟烯烃气体选自：全氟丙烷和/或全氟丁烷。
[0011]
在本发明的一个优选实施方式中，所述聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽ngksavlf的重量比为2-4：3-6：2-4：0.2-0.5。
[0012]
在本发明的一个优选实施方式中，所述聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽ngksavlf的重量比为2-3：3-4：2-3：0.2-0.4。
[0013]
在本发明的一个优选实施方式中，所述造影剂为密封包装的冻干粉针剂。
[0014]
在本发明的一个优选实施方式中，所述聚乙二醇的平均重均分子量为1500-3000。
[0015]
本发明还提供了上述超声造影剂的制备方法，包括以下步骤：
[0016]
(1)将聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂加入到乙醇水的混合溶剂中，于20-40℃、80-120mpa压力下匀质3-5分钟后，再加入多肽ngksavlf，均质0.5-2分钟后，经滤膜过滤除菌，得乳液；
[0017]
(2)使用西林瓶将步骤(1)所得乳液分装后真空冷冻干燥得冻干粉，随后在真空状态下缓慢充入全氟烯烃气体，随后缓慢充入全氟烯烃气体与氮气的混合气体，随后使用橡胶塞密封西林瓶，所述混合气体中全氟烯烃气体的体积占比为40-60％；
[0018]
(3)将密封后的冻干粉分装容器经辐照灭菌即得。
[0019]
本发明有益效果
[0020]
本发明通过设计多肽序列，与特定的磷脂进行组合制备得到了具有宫颈癌靶向性的超声造影剂，提高了超声诊断宫颈癌的灵敏度和准确率；另一方面，本发明所制备得到超声造影剂制备方法简单易行、成本低廉，非常有利于临床诊断的广泛引用；再一个方面，本发明所制备得到的超声造影剂有利于降低超声造影剂的临床使用剂量，在有利于避免造影剂副作用的同时也有利于进一步降低使用成本。
附图说明
[0021]
图1和图2是采用实施例1所制备的造影剂进行超声诊断的结果图。
具体实施方式
[0022]
为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0023]
如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠
道购买获得。本发明所涉及的多肽序列ngksavlf由发明人设计，由上海生工采用固相合成法合成得到。
[0024]
实施例1：用于宫颈癌超声诊断的靶向超声造影剂
[0025]
聚乙二醇2000 2重量份，二硬脂磷酯酰胆碱(dspc)2重量份，二棕榈磷酯酰甘油钠3重量份，多肽ngksavlf 0.2重量份，50(v/v)％乙醇水混合溶剂100重量份，全氟丙烷适量，按照以下步骤制备：
[0026]
(1)将聚乙二醇2000，二硬脂磷酯酰胆碱，二棕榈磷酯酰甘油钠加入到乙醇水的混合溶剂中，于30℃、100mpa压力下匀质4分钟后，再加入多肽，均质1分钟后，经220nm滤膜过滤除菌，得乳液；
[0027]
(2)使用西林瓶将步骤(1)所得乳液分装后真空冷冻干燥得冻干粉，随后在真空状态下缓慢充入全氟丙烷至55kpa，随后缓慢充入全氟丙烷与氮气的混合气体至1个标准大气压，随后使用橡胶塞密封西林瓶，所述混合气体中全氟丙烷的体积占比为50％；
[0028]
(3)将密封后的冻干粉分装容器使用
60
co辐照灭菌，即得本发明所述的宫颈癌超声诊断的靶向超声造影剂。
[0029]
实施例2：
[0030]
与实施例1相同，区别在于采用大豆磷脂代替二硬脂磷酯酰胆碱。
[0031]
实施例3：
[0032]
与实施例1相同，区别在于采用将多肽ngksavlf的用量调整为0.1重量份。
[0033]
对比例1：
[0034]
与实施例1相同，区别在于不加入多肽ngksavlf。
[0035]
对比例2：
[0036]
与实施例1相同，区别在于采用5重量份的二硬脂磷酯酰胆碱代替二硬脂磷酯酰胆碱和二棕榈磷酯酰甘油钠的组合物。
[0037]
实施例4：动物学实验
[0038]
(1)细胞培养：用含10％小牛血清的deme培养基于37℃、5％co2细胞培养箱内对人宫颈癌hela细胞进行常规培养。
[0039]
(2)移植瘤动物模型构建：选取bala/ca-nu裸小鼠80只，鼠龄5周，体重15-18g，取对数生长期人宫颈癌hela细胞于裸鼠背部皮下注射，每只注射1
×
106个细胞/只。
[0040]
(3)超声造影检查：肉眼观察裸鼠瘤体长至直径约0.5cm左右时，进行荷瘤裸鼠超声造影检查。选择造模成功的小鼠21只，随机分为模型组、阳性对照组(声诺维)、实施例1-3组和对比例1-2组，各组相应的超声造影剂0.1ml(用10倍量生理盐水制成混悬液)，模型组注射等量生理盐水。使用超声诊断仪，探头频率10mhz，记录各组大鼠瘤体部位的超声造影峰值强度比，其中：
[0041]
峰值强度比＝实验组平均峰值强度/模型组平均峰值强度。
[0042]
(4)实验结果：实验结果如表1所示，实验结果显示，本发明的超声造影剂显示了较为明显的超声增强效果，且其效果高于阳性对照组声诺维。特别是，本发明的实施例1显示了更为优异的宫颈癌靶向性效果。
[0043]
表1.靶向超声造影剂对宫颈癌超声诊断的影响
[0044][0045][0046]
实施例5：临床试验
[0047]
2022年6月我院收治的1例宫颈癌患者，经病理结果诊断确诊。该患者无心脏病、造影剂及其他过敏史，签知情同意书后行超声造影检查。患者憋尿取仰卧位，首先经腹行妇科常规超声检查，记录病灶的位置、大小、形态及回声特点等，做出常规超声诊断。选择能清楚显示病灶的最佳切面，转换至造影模式，经肘静脉快速团注实施例1所制备的造影剂(采用10倍生理盐水制成混悬液)1.2ml，同时启动计时器，连续实时观察120s，并将此过程储存于仪器硬盘中，造影结束后回放、分析造影图像，做出超声造影诊断。实验结果如图1-2所示，实验结果显示，本发明的造影剂能够显著提高宫颈处的对比度。
[0048]
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。

技术特征：

1.一种用于宫颈癌超声造影的造影剂，其特征在于所述造影剂包括：聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽ngksavlf和全氟烯烃气体。2.根据权利要求1所述的造影剂，所述全氟烯烃气体选自：全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、全氟己烷、全氟辛烷中的一种或者多种的组合。3.根据权利要求1所述的造影剂，所述全氟烯烃气体选自：全氟丙烷和/或全氟丁烷。4.根据权利要求1所述的造影剂，所述聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽ngksavlf的重量比为2-4：3-6：2-4：0.2-0.5。5.根据权利要求1所述的造影剂，所述聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽ngksavlf的重量比为2-3：3-4：2-3：0.2-0.4。6.根据权利要求1所述的造影剂，所述造影剂为密封包装的冻干粉针剂。7.根据权利要求1所述的造影剂，所述聚乙二醇的平均重均分子量为1500-3000。8.权利要求1-7任意一项所述的超声造影剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂加入到乙醇水的混合溶剂中，于20-40℃、80-120mpa压力下匀质3-5分钟后，再加入多肽ngksavlf，均质0.5-2分钟后，经滤膜过滤除菌，得乳液；(2)使用西林瓶将步骤(1)所得乳液分装后真空冷冻干燥得冻干粉，随后在真空状态下缓慢充入全氟烯烃气体，随后缓慢充入全氟烯烃气体与氮气的混合气体，随后使用橡胶塞密封西林瓶，所述混合气体中全氟烯烃气体的体积占比为40-60％；(3)将密封后的冻干粉分装容器经辐照灭菌即得。

技术总结

本发明公开了一种用于宫颈癌超声造影的造影剂及其制备方法，所述造影剂包括：聚乙二醇、二棕榈磷酯酰甘油或其盐、二硬脂磷酯酰胆碱和/或大豆磷脂、多肽NGKSAVLF和全氟烯烃气体。本发明通过设计多肽序列，与特定的磷脂进行组合制备得到了具有宫颈癌靶向性的超声造影剂，提高了超声诊断宫颈癌的灵敏度和准确率。率。