(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711235436.9
(22)申请日 2017.11.30
(71)申请人 成都欧林生物科技股份有限公司
地址 610000 四川省成都市高新区天欣路
99号
(72)发明人 王宇 雷宇 张熠 李靖
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
C12R 1/46(2006.01)
(54)发明名称肺炎链球菌的固体培养基(57)摘要本发明公开了肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：含氮源为胰酪胨：20～85g，胰胨：25～80g，精选大豆胨：15～70g，大豆胨：20～85g，酸水解酪蛋白：15～75g，酵母提取物：15～35g，酵母浸粉：10～45g的其中三种；碳源为葡萄糖：15～55g；盐类为K 2HPO 4：3.0～15.0g，NaCl：2.0～10.0g，MgSO 4·7H 2O：0.1～4.0g，CaCl 2：0.10～0.18g ；微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.12～1.80g，烟酸：0.5～1.2mg，腺嘌呤：5.5～10.5mg，FeSO 4：3.5～7.5mg；琼脂10～15g。采用本发明培养基获得荚膜较厚的菌种，利于提高荚膜多糖的产量，提高生产效率、 降低生产成本。权利要求书1页 说明书3页CN 107760633 A 2018.03.06
C N 107760633
A
1.肺炎链球菌的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
含氮源为胰酪胨：20～85g，胰胨：25～80g，精选大豆胨：15～70g，大豆胨：20～85g，酸水解酪蛋白：15～75g，酵母提取物：15～35g，酵母浸粉：10～45g的其中三种；
碳源为葡萄糖：15～55g；
盐类为K 2HPO 4：3.0～15.0g，NaCl：2.0～10.0g，MgSO 4·7H 2O：0.1～4.0g，CaCl 2：0.10～0.18g；
微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.12～1.80g ，烟酸：0.5～1.2mg ，腺嘌呤：5.5～10.5mg，FeSO 4：3.5～7.5mg；
琼脂10～15g。
2.根据权利要求1所述的肺炎链球菌的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
含氮源为胰酪胨：45～70g，胰胨：35～65g，精选大豆胨：30～55g，大豆胨：40～60g，酸水解酪蛋白：35～55g，酵母提取物：20～30g，酵母浸粉：20～35g的其中三种；
碳源为葡萄糖：25～40g；
盐类为K 2HPO 4：6.0～9.0g，NaCl：4.0～8.0g，MgSO 4·7H 2O：0.9～2.1g，CaCl 2：0.13～0.16g；
微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.18～1.40g，烟酸：0.6～0.9mg，腺嘌呤：6.5～8.0mg，FeSO 4：4.5～6.5mg；
琼脂12～15g。
3.根据权利要求1所述的肺炎链球菌的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
含氮源为胰酪胨：60g，胰胨：55g，精选大豆胨：45g，大豆胨：50g，酸水解酪蛋白：45g，酵母提取物：25g，酵母浸粉：25g的其中三种；
碳源为葡萄糖：32g；
盐类为K 2HPO 4：8.0g，NaCl：6.0g，MgSO 4·7H 2O：1.5g，CaCl 2：0.14g；
微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：1.10g，烟酸：0.8mg，腺嘌呤：7.0mg，FeSO 4：7.5mg；琼脂13g。
4.根据权利要求1所述的肺炎链球菌的固体培养基，其特征在于，所述含氮源为：胰胨：25～80g，大豆胨：20～85g，酸水解酪蛋白：15～75g。
5.根据权利要求1所述的肺炎链球菌的固体培养基，其特征在于，含氮源为：胰酪胨：20～85g，大豆胨：20～85g，酵母浸粉：10～45g。
权 利 要 求 书1/1页CN 107760633 A
肺炎链球菌的固体培养基
技术领域
[0001]本发明涉及微生物技术领域，具体涉及肺炎链球菌的固体培养基。
背景技术
[0002]肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)于1881年首次由巴斯德分离出，是大叶性肺炎、脑膜炎、支气管炎的主要致病源之一，它也能引起中耳炎、鼻窦炎和菌血症等。肺炎链球菌感染是在全球范围内引起死亡的重要原因之一。美国有资料显示，估计每年有40～50万人患肺炎球菌性肺炎，病死率为5％～10％。在用疫苗可预防儿童死亡的疾病中，肺炎链球菌引起的疾病排名第一。随着抗菌素的大量使用，耐药菌株与日俱增，医学界再次关注疫苗的研发。肺炎球菌目前已发现90多种血清型。其细菌表面荚膜具有抗原性，再将肺炎球菌多糖共价连接到载体蛋白使之成为胸腺依赖性(TD)抗原，能够对婴幼儿和老人产生抗体，免疫效果有效提高。现有疫苗均是提取其荚膜多糖为原料制得。
[0003]自肺炎疫苗研发以来，由于其荚膜多糖产量较低，只有通过尽量扩大生产规模，以达到提高多糖产量的目的，因此生产成本较高。提高多糖产量可从筛选优质菌种、优化发酵工艺、优化纯化工艺等关键工序着手。筛选荚膜较厚的菌种，即是关键工艺之一，从源头上解决这一问题。
发明内容
[0004]本发明所要解决的技术问题是现有培养基培养肺炎链球菌获得的荚膜多糖产量较低，目的在于提供肺炎链球菌的固体培养基，采用本发明培养基获得荚膜较厚的菌种，利于提高荚膜多糖的产量，提高生产效率、降低生产成本。
[0005]本发明通过下述技术方案实现：
[0006]肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
[0007]含氮源为胰酪胨：20～85g，胰胨：25～80g，精选大豆胨：15～70g，大豆胨：20～85g，酸水解酪蛋白：15～75g，酵母提取物：15～35g，酵母浸粉：10～45g的其中三种；[0008]碳源为葡萄糖：15～55g；
[0009]盐类为K2HPO4：3.0～15.0g，NaCl：2.0～10.0g，MgSO4·7H2O：0.1～4.0g，CaCl2：0.10～0.18g；
[0010]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.12～1.80g，烟酸：0.5～1.2mg，腺嘌呤：5.5～10.5mg，FeSO4：3.5～7.5mg；
[0011]琼脂10～15g。
[0012]优选地，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：[0013]含氮源为胰酪胨：45～70g，胰胨：35～65g，精选大豆胨：30～55g，大豆胨：40～60g，酸水解酪蛋白：35～55g，酵母提取物：20～30g，酵母浸粉：20～35g的其中三种；[0014]碳源为葡萄糖：25～40g；
[0015]盐类为K2HPO4：6.0～9.0g，NaCl：4.0～8.0g，MgSO4·7H2O：0.9～2.1g，CaCl2：0.13～0.16g；
[0016]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.18～1.40g，烟酸：0.6～0.9mg，腺嘌呤：6.5～8.0mg，FeSO4：4.5～6.5mg；
[0017]琼脂12～15g。
[0018]优选地，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：[0019]含氮源为胰酪胨：60g，胰胨：55g，精选大豆胨：45g，大豆胨：50g，酸水解酪蛋白：45g，酵母提取物：25g，酵母浸粉：25g的其中三种；
[0020]碳源为葡萄糖：32g；
[0021]盐类为K2HPO4：8.0g，NaCl：6.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，CaCl2：0.14g；
[0022]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：1.10g，烟酸：0.8mg，腺嘌呤：7.0mg，FeSO4：7.5mg；[0023]琼脂13g。
[0024]优选地，所述含氮源为：胰胨：25～80g，大豆胨：20～85g，酸水解酪蛋白：15～75g。[0025]优选地，含氮源为：胰酪胨：20～85g，大豆胨：20～85g，酵母浸粉：10～45g。[0026]本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果本发明肺炎链球菌的固体培养基，
[0027]本发明提供了一种肺炎链球菌的固体培养基，采用本发明培养基获得荚膜较厚的菌种，利于提高荚膜多糖的产量，提高生产效率、降低生产成本。
具体实施方式
[0028]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
[0029]实施例1
[0030]本发明提供了一种肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
[0031]含氮源为胰酪胨：20g，大豆胨：20g，酸水解酪蛋白：15g；
[0032]碳源为葡萄糖：15g；
[0033]盐类为K2HPO4：3.0g，NaCl：2.0g，MgSO4·7H2O：0.1g，CaCl2：0.10g；
[0034]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.12g，烟酸：0.5mg，腺嘌呤：5.5mg，FeSO4：3.5mg；[0035]琼脂10g。
[0036]实施例2
[0037]本发明提供了一种肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
[0038]含氮源为胰酪胨：85g，精选大豆胨：70g，大豆胨：20～85g；
[0039]碳源为葡萄糖：55g；
[0040]盐类为K2HPO4：15.0g，NaCl：10.0g，MgSO4·7H2O：4.0g，CaCl2：0.18g；
[0041]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：1.80g，烟酸：1.2mg，腺嘌呤：10.5mg，FeSO4：7.5mg；
[0042]琼脂15g。
[0043]实施例3
[0044]本发明提供了一种肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
[0045]含氮源为胰胨：35g，大豆胨：40g，酵母提取物：20g；
[0046]碳源为葡萄糖：25g；
[0047]盐类为K2HPO4：6.0g，NaCl：4.0g，MgSO4·7H2O：0.9g，CaCl2：0.13g；
[0048]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：0.18g，烟酸：0.6mg，腺嘌呤：6.5mg，FeSO4：4.5mg；[0049]琼脂12g。
[0050]实施例4
[0051]本发明提供了一种肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
[0052]含氮源为胰胨：65g，大豆胨：60g，酵母提取物：30g；
[0053]碳源为葡萄糖：40g；
[0054]盐类为K2HPO4：9.0g，NaCl：8.0g，MgSO4·7H2O：2.1g，CaCl2：0.16g；
[0055]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：1.40g，烟酸：0.9mg，腺嘌呤：8.0mg，FeSO4：6.5mg；[0056]琼脂15g。
[0057]实施例5
[0058]本发明提供了一种肺炎链球菌的固体培养基，所述固体培养基的配方组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：
[0059]含氮源为胰酪胨：60g，精选大豆胨：45g，酵母浸粉：25g；
[0060]碳源为葡萄糖：32g；
[0061]盐类为K2HPO4：8.0g，NaCl：6.0g，MgSO4·7H2O：1.5g，CaCl2：0.14g；
[0062]微量元素为L-半胱氨酸盐酸盐：1.10g，烟酸：0.8mg，腺嘌呤：7.0mg，FeSO4：7.5mg；[0063]琼脂13g。
[0064]以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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