[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101236192A [43]公开日2008年8月6日
[21]申请号200710073144.X [22]申请日2007.01.29
[21]申请号200710073144.X
[71]申请人深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公
司
地址518057广东省深圳市南山区高新技术产业
园区科技南十二路迈瑞大厦
[72]发明人匡玉吉 徐兵 [74]专利代理机构深圳创友专利商标代理有限公司代理人罗瑶
[51]Int.CI.G01N 33/48 (2006.01)G01N 33/50 (2006.01)G01N 33/72 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 13 页 附图 4 页
[54]发明名称
[57]摘要
此溶血剂可将血液中的红细胞裂解，裂解红细胞后
的血液可用于血红蛋白浓度的测定。此外，本发明
还涉及一种白细胞分类试剂体系，包括前述溶血剂
和一种抑制剂。溶血剂裂解红细胞后，加入抑制剂
可以阻止溶血剂对白细胞形态和结构的破坏。此外，
本发明还涉及采用前述试剂体系对白细胞进行分类
的方法。
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1. 一种溶血剂，其特征在于：所述溶血剂含有季铵盐阳离子表面活性剂，所述季铵盐阳离子表面活性剂具有如下式(I)所示的结构，
其中，n为3～5的整数。
2. 根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述季铵盐阳离子表面活性剂在溶血剂中的浓度为0.1～10g/L。
3. 根据权利要求2所述的溶血剂，其特征在于：所述季铵盐阳离子表面活性剂在溶血剂中的浓度为0.5～2g/L。
4. 根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述溶血剂中还含有缓冲剂，所述缓冲剂调节溶血剂的pH值为8～12。
5. 根据权利要求4所述的溶血剂，其特征在于：所述缓冲剂调节溶血剂的pH值为9～11。
6. 根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述溶血剂中还含有增溶剂。
7. 根据权利要求6所述的溶血剂，其特征在于：所述增溶剂为非离子表面活性剂，浓度为0.1～5g/L。
8. 根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述溶血剂中还含有渗透压调节剂，所述渗透压调节剂调节溶血剂的渗透压为200～400mOsm/kg。
9. 根据权利要求8所述的溶血剂，其特征在于：所述渗透压调节剂为碱金属氯化物，并且所述渗透压调节剂调节溶血剂的渗透压为250～350mOsm/kg。
10. 根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述溶血剂中还含
200710073144.X权 利 要 求 书 第2/2页有稳定剂，所述稳定剂为乙二胺四乙酸或其钠盐或钾盐。
11. 根据权利要求10所述的溶血剂，其特征在于：所述稳定剂的浓度为5～20mM。
12. 根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述溶血剂中还含有防腐剂，防腐剂的使用浓度为0.02～0.4％，所述为重量百分浓度。
13. 一种白细胞分类试剂体系，所述试剂体系包括：
a、权利要求1～12任意一项所述的溶血剂；
b、用于抑制溶血剂对血液中的白细胞进一步损害的抑制剂。
14. 根据权利要求13所述的白细胞分类试剂体系，其特征在于：所述抑制剂中含有缓冲剂，该缓冲剂调节抑制剂的p H值为3～7。
15. 根据权利要求14所述的白细胞分类试剂体系，其特征在于：所述抑制剂中的缓冲剂调节抑制剂的pH值为3～5。
16. 根据权利要求14所述的白细胞分类试剂体系，其特征在于：所述抑制剂中还含有碱金属氯化物作为渗透压调节剂，该碱金属氯化物调节抑制剂的渗透压为200～400mOsm/kg。
17. 一种采用权利要求13所述的白细胞分类试剂体系对白细胞进行分类的方法，所述方法包括步骤：
A、将血液标本与足量的所述溶血剂混合适当时间，使红细胞完全裂解；
B、在步骤A得到的混合液中加入所述抑制剂，阻止溶血剂对白细胞的进一步损害；
C、将步骤B得到的产物在血液分析装置上进行分析。
18. 根据权利要求17所述的方法，其特征在于：所述步骤A中，血液标本与所述溶血剂混合的比例为1∶40～60，混合时间为5～20秒。
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溶血剂、白细胞分类试剂体系及分类方法
技术领域
本发明涉及一种血液细胞分析用试剂及分析方法，特别是涉及一种可用于血红蛋白浓度测定的溶血剂、一种用于白细胞分类的试剂体系以及使用该试剂对白细胞进行分类的方法。
背景技术
在临床检验领域中，对患者血液进行血红蛋白浓度测定和白细胞分类在多种血液疾病的诊断和中具
有重要意义。
在全自动血液分析装置上进行血红蛋白浓度测定和白细胞分类都涉及到溶血剂的使用。一方面溶血剂可以溶解红细胞，使细胞内的血红蛋白释放，用于血红蛋白的测定。另一方面，溶血剂破坏红细胞后可以消除红细胞以及红细胞碎片对白细胞分析的干扰，方便后续的白细胞计数和分类。 血红蛋白的测定方法很多，其中氰化高铁血红蛋白(H i C N)法为国际血液标准化委员会推荐使用的参考性方法。在这一方法中使用了非离子表面活性剂Triton X-100作为溶血剂。红细胞被破坏后，释放出的血红蛋白被高铁氧化成高铁血红蛋白，再与氰(C N-)离子结合形成稳定的氰化高铁血红蛋白(H i C N)。H i C N在波长540n m处有吸收峰，可用分光光度计进行直接测定或用HiCN参考液进行比法测定。但是HiCN法中使用了剧，试剂常温下不稳定，易受多种因素的干扰，并且由于反应时间过长(约5分钟)，因此并不适用于全自动血液分析装置。
由于测定血红蛋白的H i C N法中的有剧毒，因此一些无氰血红蛋白测定的方法陆续被公布出来。例如，O s h i r o等(C l i n B i o c h e m.1982 Apr；15(2)：83-8.)介绍了一种无氰血红蛋白测定的方法。在这一方法中使用了阴离子表面活性剂月桂基硫酸钠(S L S，又称十二烷基硫酸钠，S D S)和非离子表面活性剂Triton X-100。SLS不仅可以与Triton X-100一同起到溶血剂作用，还可以与血红蛋白结合形成S L S-血红蛋白复合物。此复合物在535n m左右有吸收峰，但由于其摩尔消光系数还未确定，不能直接用吸光度值直接计算血红蛋白浓度，需用H i C N法定值的血液标本绘制标准曲线后间接计算血红蛋白浓
度。另外，Z a n d e r等(C l i n C h i m A c t a.1984 J a n
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16；136(1)：83-93)介绍了一种无氰血红蛋白测定的方法。这一方法中使用了非离子表面活性剂Triton X-100作为溶血剂。反应的最终产物为碱性高铁血红蛋白D-575(alkaline haematin D-575，AHD-575)，其在575nm有吸收峰，可用分光光度计进行直接测定。此外，B e n a z r a等(美国专利4,853, 338)也公开了一种无氰血红蛋白测定法。在这一方法中使用了季铵盐类阳离子表面活性剂作为溶血剂。
不过，由于表面活性剂的浓度过高或由于试剂体系的p H值过于极端，以上三种方法在溶解红细胞的同时也会对白细胞产生强烈的破坏作用。因此，虽然这些溶血剂可用于血红蛋白浓度的测定，但并不适用于对白细胞进行分类分析。
近年来，一些能同时测定血红蛋白浓度和对白细胞进行分类的方法被陆续公布出来。如美国专利6632676、2002/0098589、2004/0241769、RE38131、5958781、5882934、5866428、5834315、5612223、5242832、5250437等应用一种或多种季铵盐类、吡啶盐类阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和两性离子表面活性剂作为溶血剂，对血红蛋白浓度和白细胞分类进行分析。此类试剂仅能裂解红细胞，对白细胞有损伤但不严重。同时，由于表面活性剂对各类白细胞的损伤程度不同，因此会造成细胞的大小出现差异，从而通过细胞大小这个参数对白细胞进行两类或三类细胞分。不过，这些方法
中表面活性剂的使用浓度仍然偏高(几克到几十克)，并且有些方法中试剂体系的p H过于极端，可能会对自动血液分析装置的管路和器件造成损害。
然而，随着医学的不断进步，对白细胞进行两类或三类细胞分已有些不能适应临床的需要，一些对白细胞进行四类或五类分的方法已经被公布出来。
例如，S a k a t a等(美国专利5618733)公开了用于白细胞四分类的测定方法。方法中同样采用了季胺盐类阳离子表面活性剂作为溶血剂。溶血剂对各类白细胞的损伤不同，会使各类细胞皱缩的情况产生差异，从而使各类白细胞低角度散射光强度产生差异。同时，试剂中还使用芳香族有机酸或酸性素对各类白细胞进行染，从而使各类白细胞的高角度散射光强度也产生差异。通过高、低角度散射光的组合，可以对白细胞进行四类细胞分。不过化学染料的使用不仅会增加试剂的成本，而且增加了仪器和试剂的复杂性。
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