(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810078015.8
(22)申请日 2018.01.26
(71)申请人 青岛博恩高科生物技术有限公司
地址 266000 山东省青岛市高新区宝源路
780号联东U谷·青岛高新国际企业港
30号楼101
(72)发明人 邵建华
(74)专利代理机构 青岛清泰联信知识产权代理
有限公司 37256
代理人 张媛媛
(51)Int.Cl.
C12P 13/00(2006.01)
C07C 331/22(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明提出一种萝卜硫素提取工艺，包括以
粉，将干粉与水混合，在水浴中经酶解后加入甲
醇进行超声波提取得到提取液，取提取液经离心
处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。本发明
所提供的方法，仅需要采用水和甲醇，再经合理
分配步骤提取得到较高纯度的萝卜硫素，无需添
加其他有机试剂，避免了其他有毒有害物质残留
并且节约了提取成本提高了效益，缩短了提取时
间，降低了种子中的萝卜硫素在提取中的降解速
度，
操作上也更为简便。权利要求书1页 说明书5页 附图4页CN 108048498 A 2018.05.18
C N 108048498
A
1.一种萝卜硫素提取工艺，其特征在于，包括以西兰花种子为原料，以甲醇为溶剂提取萝卜硫素的步骤。
2.根据权利要求1所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，包括以下步骤，取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水混合，在水浴中经酶解后加入甲醇进行超声波提取得到提取液，所述提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
3.根据权利要求2所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，所述干粉与水的质量体积比为1:2～5。
4.根据权利要求2所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，所述水浴中经酶解的条件为20℃～50℃水浴酶解1～10h。
5.根据权利要求2所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，所述干粉与甲醇的质量体积比为1:5～15。
6.根据权利要求2所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，所述超声波提取的时长为10～60min。
7.根据权利要求2所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，所述超声波提取的温度为25～50℃。
8.根据权利要求1所述的萝卜硫素提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水混合，于20℃～50℃水浴酶解1～10h，酶解后加入甲醇于25～50℃超声波提取10～60min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
权 利 要 求 书1/1页CN 108048498 A
一种萝卜硫素提取工艺
技术领域
[0001]本发明属于天然产物提取技术领域，尤其涉及一种萝卜硫素提取工艺。
背景技术
[0002]萝卜硫素(1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷)(Sulforaphane)，又称"莱菔硫烷"，在西兰花、芥蓝、北方
圆红萝卜等十字花科植物中含量较丰富，是常见抗氧化剂，也是蔬菜中所发现的抗癌效果最好的植物活性物质。大量试验证明，萝卜硫素对食道癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌等有很好的防治效果，尤其是它能够杀灭导致胃溃疡和多数胃癌的螺旋幽门杆菌。YueshengZhang报道，通过给初生6d的小雌鼠喂食萝卜硫素则能够在动物机体的各个组织器官内诱导产生II型解毒酶——谷光甘肽转移酶(GST)和醌还原酶(QR)，并经过上述免疫保护机制对机体产生作用，从而消除化学致癌物的侵害。
[0003]目前现有制备萝卜硫素的方法主要有化学合成法和提取法。化学合成法合成工艺复杂，产物得率低成本较高，并且在合成过程中会使用到有毒或者对环境有较大影响的反应试剂。此外合成的产物也比天然提取的产物安全性低。而现有提取萝卜硫素的方法提取所用的化学试剂较多，得到的产物中会有较多的化学残留，并且提取效率低，不利于大规模生产使用。之前的提取工艺还有酶解法，此方法在提取过程中需添加价格昂贵的外源芥子酶制剂，导致萝卜硫素生产成本过高，因而该方法在实际生产过程中受限。
[0004]另外本领域技术中还常采用有机溶剂萃取法，萃取中采用的有机溶剂有丙酮，二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等有毒试剂，这些有毒试剂在提取过程中难免会在最终产品中有所残留，对人类健康造成危害从而限制产品使用。此外还有的从西兰花嫩芽及西兰花中提取，这不仅操作繁琐而且提取率也没有直接从种子中进行提取的提取率高。
发明内容
[0005]本发明针对上述技术问题，提出一种萝卜硫素提取工艺。
[0006]为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0007]一种萝卜硫素提取工艺，包括以西兰花种子为原料，以甲醇为溶剂提取萝卜硫素的步骤。
[0008]作为优选，取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水混合，在水浴中经酶解后加入甲醇进行超声波提取得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
[0009]作为优选，所述干粉与水的质量体积比为1:2～5。
[0010]作为更有选，所述干粉与水的质量体积比为1：2。
[0011]作为优选，所述水浴中经酶解的条件为20℃～50℃水浴酶解1～10h。
[0012]作为优选，所述酶解后的干粉与甲醇的质量体积比为1:5～15。
[0013]作为更优选，所述酶解后的干粉与甲醇的质量体积比为1:8。
[0014]作为优选，所述超声波提取的时长为10～60min。
[0015]作为优选，所述超声波提取的温度为25～50℃。
[0016]作为优选，包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水混合，于20℃～50℃水浴酶解1～10h，酶解后加入甲醇于25～50℃超声波提取10～60min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
[0017]作为更优选，离心处理后得到的萝卜硫素纯化方法包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水按照质量体积比为1：2混合，于35℃水浴酶解8h，酶解后按西蓝花种子干粉与甲醇比1:8加入甲醇，于35℃超声波提取45min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
[0018]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：
[0019]本发明所提供的方法，仅需要采用水和甲醇，经合理分配步骤提取得到较高提取率的萝卜硫素，无需添加其他有机试剂，避免了其他有毒有害物质残留并且节约了提取成本提高效益。并且本发明操作上较之前研究方法更为简便，使提取时间更短，降低了种子中的萝卜硫素在提取中的降解速度，提高了萝卜硫素得率。并且本方法在提取过程中未加入外源芥子酶等酶制剂，节约了生产成本。与本领域常规使用的方法相比，本发明打破常规思路，对于本领域技术来说作出革命性贡献。
附图说明
[0020]图1为本发明实施例所提供的萝卜硫素标准品高效液相谱图；
[0021]图2为本发明实施例所述实验组1所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
[0022]图3为本发明实施例所述实验组2所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
[0023]图4为本发明实施例所述实验组3所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
[0024]图5为本发明实施例所述实验组4所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
[0025]图6为本发明实施例所述实验组5所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
[0026]图7为本发明实施例所述实验组6所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
[0027]图8为本发明实施例所述实验组7所提取的产物中检测萝卜硫素含量的高效液相谱图；
具体实施方式
[0028]下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0029]一种萝卜硫素提取工艺，包括以西兰花种子为原料，以甲醇为溶剂提取萝卜硫素的
步骤。
[0030]在一可选实施例中，取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水混合，在水浴中经酶解后加入甲醇进行超声波提取得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
[0031]在本领域中，通常是采用丙酮、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等有机试剂来萃取萝卜硫素，同时未揭示将水和甲醇相配伍以达到萝卜硫素提取的目的。本发明的方法步骤上看似简单，但是其获取的结果并非是显而易见也不代表是容易得到的。本领域中已知的技术，均与本技术产生相反性的教导，本发明经自主创新，并经过大量的创造性实验，到本发明步骤最为简便，原料最易的，且提取效率最高的方法。
[0032]在一可选实施例中，其特征在于，所述干粉与水的质量比为1:2-5。
[0033]在一可选实施例中，所述水浴中经酶解的条件为20℃～50℃水浴酶解1～10h。[0034]在一优选实施例中，所述水浴中经酶解的条件为35℃水浴酶解8h。
[0035]在一可选实施例中，所述种子干粉与甲醇的质量体积比为1:5～15。
[0036]在一可选实施例中，所述超声波提取的时长为10～60min。
[0037]在一可选实施例中，所述超声波提取的温度为25～50℃。
[0038]在一可选实施例中，包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将干粉与水混合，于20℃～50℃水浴酶解1～10h，酶解后加入甲醇于25～50℃超声波提取10～60min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。
[0039]在一可选实施例中，离心处理后得到的萝卜硫素纯化方法包括以下步骤：[0040]为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的一种萝卜硫素提取工艺，下面将结合具体实施例进行描述。
[0041]实施例1：一种萝卜硫素提取工艺，包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将10g干粉与20ml水混合，于40℃水浴酶解1h，酶解后加入甲醇100ml于25℃超声波提取60min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。[0042]该处的产物萝卜硫素为粗品，获取的产物质量为1.5g，其中取干燥的西兰花种子质量为10g；取产物萝卜硫素的粗品采用高效液相谱检测提取物中萝卜硫素含量在20.8％。[0043]取产物萝卜硫素粗品，经常规的纯化方法，例如硅胶柱层析，获取到1.3g纯化后的萝卜硫素，且经检验其中的萝卜硫素含量为30.1％。
[0044]实施例2：一种萝卜硫素提取工艺，包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将10g干粉与35ml水混合，于35℃水浴酶解8h，酶解后加入甲醇80ml于35℃经超声波提取30min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。[0045]该处的产物萝卜硫素为粗品，获取的产物质量为1.2g，其中取干燥的西兰花种子质量为10g；取产物萝卜硫素的粗品采用高效液相谱检
测提取物中萝卜硫素含量在39.4％。[0046]取产物萝卜硫素粗品，经常规的纯化方法，例如硅胶柱层析，获取到1g纯化后的萝卜硫素，且经检验其中的萝卜硫素含量为45.1％。
[0047]实施例3：一种萝卜硫素提取工艺，包括以下步骤：取干燥的西蓝花种子去皮后磨粉得到干粉，将10g干粉与30ml水混合，于30℃水浴酶解10h，酶解后加入甲醇70ml于50℃经超声波提取20min得到提取液，取提取液经离心处理取上清液经冷冻干燥得到萝卜硫素。[0048]该处的产物萝卜硫素为粗品，获取的产物质量为2g，其中取干燥的西兰花种子质量
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