(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010283236.6
(22)申请日 2020.04.10
(71)申请人 四川大学华西医院
地址 610000 四川省成都市武侯区国学巷
37号
(72)发明人 商慧芳 陈永平 欧汝威 顾孝静
(74)专利代理机构 成都高远知识产权代理事务
所(普通合伙) 51222
代理人 李高峡 张娟
(51)Int.Cl.
C12N 15/12(2006.01)
C12Q 1/6883(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种检测帕金森病的诊断试
剂盒，属于疾病检测试剂领域。本发明首先公开
因的c.156_157insGCAG突变位点。本发明还公开
了检测前述基因突变的帕金森病筛查试剂盒。本
发明的帕金森病筛查试剂盒能够识别全新的帕
金森病致病基因CHCHD2的c.156_157insGCAG突
变位点，扩大了目前帕金森病致病基因检测的范
围，提高了帕金森病的筛查准确度，降低了假阴
性。
权利要求书1页 说明书11页序列表7页 附图1页CN 111454960 A 2020.07.28
C N 111454960
A
1.一种突变基因，其特征在于：所述突变基因为携带c.156_157insGCAG突变位点的人类CHCHD2基因。
2.检测权利要求1所述突变基因的试剂或检测序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂在制备帕金森病筛查试剂盒中的用途。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。 4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂包括扩增试剂；
所述扩增试剂是扩增权利要求1所述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述扩增试剂包括扩增引物；
所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物；
优选的，所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
6.一种帕金森病筛查试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测权利要求1所述突变基因的试剂或检测序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
8.如权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂包括扩增试剂；
所述扩增试剂是扩增权利要求1所述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述扩增试剂包括扩增引物；
所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：
所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
权 利 要 求 书1/1页CN 111454960 A
一种检测帕金森病的诊断试剂盒
技术领域
[0001]本发明属于疾病检测试剂领域。
背景技术
[0002]帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)又称为震颤性麻痹，是一种以静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常等运动症状为核心症状的神经退行性疾病，其主要的病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元缺失、黑质纹状体退化及残存的神经元胞浆内Lewy小体的形成等。PD好发于中老年人，是第二常见的神经系统退行性疾病(65岁以上人的平均患病率为1.6-1.7％，80岁时其患病率为4％)。目前我国约有200万PD患者。该病起病隐匿，进行性加重，逐渐出现疗效减退、症状波动及异动症，目前仅为对症，不能根治，给患者及其家庭乃至社会带来了极大的负担。
[0003]PD作为一种复杂的神经退行性疾病，研究显示遗传因素在疾病的发生发展中扮演了重要的角。基因检测作为一种重要的临床辅助诊断手段，其不但可以对PD患者进行精准的诊断，同时根据基因检测结果可以判断疾病的预后，指导疾病的，同时对于年轻的患者可以指导其进行遗传咨询，优生优育。
[0004]研究发现，已有超过27个基因与PD的发病相关，对这些基因的突变位点进行检测，可辅助PD的筛查。
[0005]目前，主流的基因检测包括基因靶向测序、全外显子和全基因组测序等高通量检测方法，也包括sanger测序、多重连接依赖探针扩增(MLPA)、限制性片段长度多态性等低通量检测方法。可供PD筛查的技术十分成熟且多样化。然而，这些检测方法各有优劣，且发明人既往的研究及其他的一些研究显示，不同种族PD患者的遗传学特征存在较大的异质性，这些单基因突变可解释的PD患者为5％-10％，容易漏检。目前已知的PD致病基因突变位点的集合还有待持续更新完善，以逐步减少漏检的情形。
发明内容
[0006]本发明要解决的问题是：提供一种PD相关的新的基因突变，及其在制备PD筛查试剂中的应用。
[0007]本发明的技术方案如下：
[0008]一种突变基因，所述突变基因为携带c.156_157insGCAG突变位点的人类CHCHD2基因。
[0009]检测前述突变基因或序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂在制备帕金森病筛查试剂盒中的用途。
[0010]如前述的用途，所述检测突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
[0011]如前述的用途，所述检测突变基因的试剂包括扩增试剂；
[0012]所述扩增试剂是扩增前述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
[0013]如前述的用途，所述扩增试剂包括扩增引物；
[0014]所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物；
[0015]优选的，所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
[0016]一种帕金森病筛查试剂盒，所述试剂盒包括检测前述突变基因的试剂或检测序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂。
[0017]如前述的试剂盒，所述检测突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
[0018]如前述的试剂盒，所述检测突变基因的试剂包括扩增试剂；
[0019]所述扩增试剂是扩增前述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
[0020]如前述的试剂盒，所述扩增试剂包括扩增引物；
[0021]所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物。
[0022]如前述的试剂盒，所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
[0023]
[0024]CHCHD2基因，全称为coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain containing2基因，Ensembl编号：ENSG00000106153，广泛表达于多种器官。既往的研究显示，CHCHD2基因突变导致了常染体显性遗传的帕金森病(autosomal dominant pakinson’disease,ADPD)，认为CHCHD2是帕金森病的致病基因。
[0025]术语c.156_157insGCAG是本领域对基因突变的一种常规表示形式，其中c表示代表编码蛋白的DNA序列，156_157insGCAG表示在第156碱基和157碱基之间插入GCAG碱基。[0026]CHCHD2基因的野生型序列如SEQ ID NO.1所示，翻译得到的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；携带c.156_157insGCAG突变的CHCHD2基因序列如SEQ ID NO.3所示，该突变导致其编码的蛋白质氨基酸序列第53位野生型脯氨酸(P)变为缬氨酸(A)，同时造成了框移突变，导致其在编码37个氨基酸后提前终止翻译蛋白质，表示为(记为p.P53Afs* 37)，其蛋白质氨基酸序列为SEQ ID NO.4。
[0027]本发明首次公开并验证了c.156_157insGCAG突变的CHCHD2基因是帕金森病的致病基因，扩充了帕金森病致病基因CHCHD2的突变谱。
[0028]本发明的帕金森病筛查试剂盒能够识别全新的帕金森病致病基因突变位点，扩大了目前帕金森病基因检测的范围，提高了帕金森病的筛查准确度，一定程度降低了假阴性。[0029]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。[0030]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
[0031]图1：测序信号峰图。
[0032]图2：患者遗传家系图。
具体实施方式
[0033]实施例1本发明的测序试剂盒
[0034]本发明试剂盒中的全部组分、含量和使用方法如下：
[0035] 1.PCR扩增试剂(50人份)：
[0036]PCR扩增试剂用于扩增突变位点所在的一段DNA序列，其组成见表1。
[0037]表1 PCR扩增试剂
[0038]
[0039]表1中PCR混合液包括Taq酶、dNTP、镁离子等常规PCR所需成分；其中引物对信息如表2所示。
[0040]表2 CHCHD2基因扩增所用引物
[0041]
[0042] 2.使用方法：
[0043]1)DNA提取
[0044]取患者全血(EDTA抗凝)2ml，提取其基因组DNA。
[0045]2)通过PCR扩增含有所检测的突变位点的DNA片段，每个样本PCR扩增体系如表3所示：
[0046]表3 PCR扩增体系
[0047]试剂名称试剂量(ul)
2×PCRmix25
引物(10nm)2
模板DNA(50-100ng/ul)1
ddH2O23
总量50
[0048]反应条件如表4所示：
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
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