(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610324485.9
(22)申请日 2016.05.17
(83)生物保藏信息
CGMCC No.11172 2015.08.07
(71)申请人 吉林农业大学
地址 130118 吉林省长春市净月开发区新
城大街2888号
(72)发明人 王玉华 南博 游颖 王雨珊
王心哲 朴春红 刘俊梅 于寒松
(74)专利代理机构 长春市东师专利事务所
22202
代理人 张铁生
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
A23L 33/00(2016.01)
C12R 1/25(2006.01) (54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种植物乳杆菌发酵人参液
方法，它包括：将保藏编号为CGMCC.NO.11172植
物乳杆菌的种子发酵液，按3%接种量接种于人参
液，发酵条件为：30-42℃摇床培养，转速为50-
150r/min，发酵24-72h；所述的人参液为人参加
水打浆。与普通植物乳杆菌相比，人参发酵液的
抗氧化能力以及Rg3、
F2含量都有很大的提高。权利要求书1页 说明书3页序列表1页 附图4页CN 105861381 A 2016.08.17
C N 105861381
A
1.植物乳杆菌LP1046株，它的保藏编号为：CGMCC No.11172。
2.植物乳杆菌LP1046株，其特征在于：提高发酵人参液抗氧化水平中的应用。
3.植物乳杆菌LP1046株，其特征在于：
提高发酵人参液稀有皂苷的含量中的应用。4.一种植物乳杆菌发酵人参液方法，其特征在于：它包括：将保藏编号为CGMCC.NO.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按2-5%接种量接种于人参液，发酵条件为：30-42℃摇床培养，转速为50-150r/min，发酵24-72h；所述的人参液为人参加水打浆。 权 利 要 求 书1/1页CN 105861381 A
一种植物乳杆菌发酵人参液方法
技术领域
[0001]本发明属于发酵食品技术领域，尤其涉及植物乳杆菌LP1046及一种植物乳杆菌发酵人参液方法。
背景技术
[0002]作为百草之王的人参在中国已有至少3000年的历史，人参一直作为名贵中草药，其营养价值丰富，具有补益元气，生津止渴，安神健脑的特点。现代医学研究进一步证明，人参具有抗癌、抗肿瘤、强心、补肾、健体、安神、心脑血管疾病和糖尿病、抗心脑缺血、抗疲劳、抗辐射、抗衰老、美容等多种功效。在人参的化学成分方面，人参皂苷、人参多糖、人参多肽是人参中的主要有效成分，除此之外，它还含有多种氨基酸、微量元素、脂肪酸和维生素等营养成分。
[0003]其中，人参皂苷具有良好的药理活性和保健功效，特别是一些含量甚微的稀有人参皂苷，具有极高的药用价值。
[0004]生物氧化是机体新陈代谢的重要生理过程，但此过程中会产生自由基等各种活性氧分子 (ROS)。尽管正常情况下，机体存在着自由基清除系统，但如果机体受到某些因素影响，自由基清除系统出现故障导致体内自由基过度产生，则会作用于机体内的蛋白质、核酸等分子，造成细胞损伤，给机体健康带来很大威胁。通过膳食中补充抗氧化物质可以增强机体的抗氧化能力，但许多化学合成的抗氧化剂存在安全问题。而人参本身具有抗氧化能力，很利用人参这个特点，也研制出了一些抗衰老的美容产品，但由于人参本身表现的抗氧化水平不高，抗氧化效果不显著。
发明内容
[0005]本发明的目的是提高人参的抗氧化水平和稀有皂苷的含量，而提供一种植物乳杆菌发酵人参液方法。
[0006]植物乳杆菌LP1046株，它的保藏编号为：CGMCC No.11172。
[0007]植物乳杆菌LP1046株在提高发酵人参液抗氧化水平中的应用。
[0008]植物乳杆菌LP1046株在提高发酵人参液稀有皂苷的含量中的应用。
[0009]一种植物乳杆菌发酵人参液方法，它包括：将保藏编号为CGMCC.NO.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按2-5%接种量接种于人参液，发酵条件为：30-42℃摇床培养，转速为50-150r/min，发酵24-72h；所述的人参液为人参加水打浆。
[0010]本发明提供了一种植物乳杆菌发酵人参液方法，它包括：将保藏编号为CGMCC.NO.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按3%接种量接种于人参液，发酵条件为：30-42℃摇床培养，转速为50-150r/min，发酵24-72h；所述的人参液为人参加水打浆。与普通植物乳杆菌相比，人参发酵液的抗氧化能力以及Rg3、F2含量都有很大的提高。
附图说明
[0011]图1 LP1046菌株的革兰氏染形态；
图2 LP1046菌株的PCR 扩增片段图谱；
图3 LP1046菌株的同源性比对数据分析；
图4 人参皂苷的薄层鉴别；
图5 人参总皂苷中Rg3含量比较；
图6 人参总皂苷中F2含量比较；
图7 人参液在发酵后pH的变化示意图；
图8 人参液在发酵后的DPPH自由基清除率；
图 9 人参液在发酵后 T-AOC总抗氧化活性示意图；
图10 人参液在发酵后超氧离子自由基能力变化示意图；
图11 人参液在发酵后羟自由基能力变化示意图。
具体实施方式
[0012]实施例1 乳酸菌的分离与鉴定
（1）乳酸菌的分离
将朝鲜族泡菜，浸泡于液体灭菌MRS培养基中，37℃恒温培养20-24h，将菌液用划线法涂于MRS固体培养基，37℃恒温培养2d，挑选出疑似乳酸菌的单独菌落，经筛选得到LP1046株，经生理生化鉴定及16srRNA鉴定，确定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），于2015年8月7日，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，：100101，编号为CGMCC No.11172；将植物乳杆菌CGMCC No.11172接种于灭菌的液体MRS培养基，在37℃温度下培养20-24h，活化后继续传代两次，每次接种量为3%，待菌种充分活化后，4℃冷藏待用。[0013]（2）乳酸菌的鉴定
从泡菜中筛选的菌株革兰氏染结果为革兰氏阳性菌，如图1所示形态为短杆状；通过上海申工公司对菌液进行PCR，扩增后的产物经过琼脂糖凝胶电泳，如图2所示，在1200bp至1500处存在特异性条带。然后对扩增、纯化后的16S rDNA进行测序鉴定，测定该序列长为1488bp（见序列表1 ），该菌株的16S rDNA序列在核糖体数据库su.edu/ index.jsp上进行同源性比对，结果如图3所示，该菌株的16S rDNA 与Lactobacillus plantarum strain P215(EF204952)的16S rDNA具有较高的同源性，证实
该LP1046株为植物乳杆菌。
[0014]实施例2 利用菌株发酵提取人参皂苷
（1）鲜人参液的制备
选取新鲜人参清洗后晾干，置于高压灭菌锅内，121℃维持40min，打开灭菌锅取出人参；按人参：水=1：1打浆，121℃，20min灭菌冷藏。
[0015]（2） 利用植物乳杆菌发酵人参液
将实施例1中获取的植物乳杆菌CGMCC.NO.11172种子发酵液按3%接种量接种于人参液，进行发酵。发酵条件为：30-42℃摇床培养，转速为50-150r/min，时间为24-72h。人参发酵液冻干成粉末，待用。
[0016]（3）人参皂苷的提取
取发酵人参粉末约1g，精密称定，置索氏提取装置中，加加热回流3小时，弃去溶液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50Hz）30分钟，过滤，精密称取滤液25ml，置于蒸发皿中蒸干，残渣加95%甲醇溶液4ml，溶解并转移至5ml容量瓶中，加入95%甲醇稀释至刻度，摇匀，既得人参皂苷样品。
[0017]（4）人参皂苷含量测定
利用上述方法，对未发酵的人参液和利用植物乳杆菌ATCC8014发酵的人参液进行皂苷提取，将提取的皂苷与上述植物乳杆菌CGMCC.NO.11172种子发酵液提取的皂苷样品一起点于薄层层析板。点样步骤：点样位置为距薄层板底端1cm处，间距为7-8mm，吹干后置于展开剂中使其上行展层，展开剂是体积比为：甲醇：水=10:5:1溶液，展层完毕后用10%硫酸溶液喷洒染，并在烘箱中于105℃加热5min使皂苷显，实验结果如图4所示，植物乳杆菌CGMCC.NO.11172发酵人参液后，其稀有皂苷Rg3和F2的含量显著增加。上述三种人参皂苷中Rg3的含量，如图5所示，植物乳杆菌CGMCC.NO.11172发酵人参液中Rg3含量较原人参液中含量提高了1倍，标准株ATCC8014发酵后人参液中Rg3含量没有显著变化。同样用上述方法测量上述三种人参皂苷中F2的含量，如图6所示，植物乳杆菌CGMCC.NO.11172发酵人参液中F2含量达高到5.4mg/g，原人参液中没有检测到，标准株ATCC8014发酵后人参液中Rg3含量仅为0.53mg/g。
[0018]实施例3 菌株发酵人参产品抗氧化能力测定
（1）人参液的制备：方法采用实施例2中（1）的制备方法制得，4℃保存备用。
[0019]植物乳杆菌CGMCC.NO.11172人参发酵液的制备：采用实施例2中（2）的制备方法；标准株植物乳杆菌ATCC8014人参发酵液的制备方法同上，得到的发酵液，4℃保存备用。[0020]（2）采用pH计直
接测定pH值。实验结果如图7所示。
[0021]（3）采用DPPH法测定人参提取液与发酵液对DPPH自由基的清除能力，实验结果如图8所示。
[0022]（4）按照T-AOC总抗氧化能力试剂盒的测定步骤，对人参提取液与发酵液的总抗氧化活性测定，结果如图9所示。
[0023]（5）采用抑制与产生超氧阴离子自由基能力试剂盒的测定步骤，对人参提取液与发酵液超氧离子的清除能力测定，结果如图10所示。
[0024]（6）采用羟自由基试剂盒的测定步骤，对人参提取液与发酵液羟自由基的清除能力测定，结果如图11所示。
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