[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101444439A [43]公开日2009年6月3日
[21]申请号200810238692.8[22]申请日2008.12.22
[21]申请号200810238692.8
[71]申请人山东大学
地址250100山东省济南市历下区山大南路27号
[72]发明人陈忠科 潘正军 王振平 刘文娜 张宁
魏金环 [74]专利代理机构济南金迪知识产权代理有限公司代理人程凌军
[51]Int.CI.A61B 19/00 (2006.01)G09B 23/28 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 6 页
[54]发明名称
[57]摘要
妊娠高血压是妊娠期特有的一种疾病，建立合
适的动物模型模仿人类妊娠高血压征，有助于人们
了解妊娠高血压征的病理发生和发展进程，帮助理
解与妊娠高血压征有关的病因学因素，建立临床上
的诊断指标，对筛选药物具有重大意义，还有
助于详细研究妊娠高血压征对子代发育的影响，为
提前介入提供实验依据。本发明提供一种通过
寒冷刺激制备用于高血压发病机制及方法研究
的动物模型的方法，用于建立一种稳定、便捷、成
本合理的妊娠高血压小鼠模型，以便顺利开展疾病
发病机制及方法的研究。
200810238692.8权 利 要 求 书第1/1页 1.一种高血压小鼠模型的制备方法，其特征在于：将正常成年小鼠按完全随机的方法分为模型组和对照组，每天从常温动物饲养室中取出模型组小鼠，放于2～6℃的环境中进行寒冷刺激，每天进行寒冷刺激的持续时间为2～6小时，结束后立即将小鼠送回常温动物饲养室；对照组小鼠一直在常温动物饲养室中饲养，不进行寒冷刺激；开始对模型组小鼠进行寒冷刺激后的第16～20天测定小鼠血压，评价模型制备效果。
2.一种如权利要求1所述的高血压小鼠模型的制备方法，其特征在于：将所述的模型组小鼠放于4℃的环境中进行寒冷刺激。
3.一种如权利要求1或2所述的高血压小鼠模型的制备方法，其特征在于：所述每天进行寒冷刺激的持续时间为2小时。
4.一种如权利要求1或2所述的高血压小鼠模型的制备方法，其特征在于：所述每天进行寒冷刺激的持续时间为4小时。
5.一种如权利要求1或2所述的高血压小鼠模型的制备方法，其特征在于：所述每天进行寒冷刺激的持续时间为6小时。
200810238692.8说 明 书第1/6页
高血压小鼠模型的制备方法
技术领域
本发明涉及一种高血压小鼠模型的制备方法。具体涉及一种通过寒冷刺激制备用于高血压发病机制及方法研究的动物模型的方法。
背景技术
妊娠高血压是妊娠期特有的一种疾病，主要表现为妊娠20周后出现高血压、水肿、蛋白尿。严重者有头痛、头昏、眼花等自觉症状，甚至出现抽搐及昏迷。一般在妊娠结束后血压恢复正常。在我国的发病率为5～8％，是临床上导致孕、产妇死亡的三大病因之一，也是胎儿宫内发育迟缓、导致婴幼儿死亡的原
因之一。妊娠高血压征的病理学基础至今不明，在过去的50多年中，妊娠高血压征的发生率和都没有根本性的改变，在严重的情形下，唯一有效的手段是提前终止妊娠。
建立合适的动物模型模仿人类妊娠高血压征，有助于人们了解妊娠高血压征的病理发生和发展进程，帮助理解与妊娠高血压征有关的病因学因素，建立临床上的诊断指标，对筛选药物具有重大意义，还有助于详细研究妊娠高血压征对子代发育的影响，为提前介入提供实验依据。
人们已经根据不同目的和手段制备成功多种高血压动物模型。如肾性高血压模型、神经型高血压模型、肾外包扎型高血压模型、肾上腺烫伤型高血压模型、饲喂致高血压、药物诱导致高血压、环境诱导致高血压等。在探讨人类高血压发病机理，设计和开发抗高血压药物，大鼠高血压模型都起了非常重要的作用。
由于妊娠高血压征的最主要特点是高血压，妊娠高血压征建模的首要目的是使动物产生高血压。目前建模方法大致可以分为以下几种：手术形成，药物诱导，遗传改造，环境诱导。手术形成的高血压模型一般选用狗、兔、大鼠，成功率较高，但进行手术较为繁琐，需要施术者有一定技术，获得的动物数量有限。药物诱导形成的高血压模型使用较多的药物有脱氧皮质酮醋酸盐、左旋硝基精氨酸甲酯、胰岛素、阿霉素、链脲霉素等，在研究妊娠高血压征的发病机理和妊娠高血压征对胎儿发育的影响方面都取得了一些成果，但是药物也可能对妊娠产生不利影响。通过遗传改造制备的转基因或基因突变高血压模型，
由于其导致高血压的基因的遗传性，实际上不适用于研究自然妊娠高血压征的病理和妊娠高血压征对胎儿发育的影响。
应该指出，上面提到的每一个妊娠高血压征模型都是以研究高血压为主要特征，还不能完全模拟人类妊娠高血压征的各个方面。因为还不明了妊娠高血压征的病因学原理，使用不同的研究模型，每一种模型都通过不同的机理诱导出相同的结果，这是非常有利的。 因而，目前迫切需要建立一种稳定、便捷、成本合理的妊娠高血压小鼠模型，以便顺利开展疾病发病机制及方法的研究。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种高血压小鼠模型的制备方法。 本发明的技术方案如下：
一种高血压小鼠模型的制备方法，其特征在于：将正常成年鼠按完全随机的方法分为模型组和对照组，每天从常温动物饲养室中取出模型组小鼠，放于2～6℃的环境中进行寒冷刺激，每天进行寒冷刺激的持续时间为2～6小时，结束后立即将小鼠送回常温动物饲养室；对照组小鼠一直在常温动物饲养室中饲养，不进行寒冷刺激；开始对模型组小鼠进行寒冷刺激后的第16～20天测定小鼠血压，收缩压超过110毫米汞柱即为高血压小鼠模型制备成功。
将所述的模型组小鼠放于2℃的环境中进行寒冷刺激。
将所述的模型组小鼠放于4℃的环境中进行寒冷刺激。
将所述的模型组小鼠放于6℃的环境中进行寒冷刺激。
所述每天进行寒冷刺激的持续时间为2小时。
所述每天进行寒冷刺激的持续时间为4小时。
所述每天进行寒冷刺激的持续时间为6小时。
上述高血压小鼠模型的制备方法，具体步骤如下：
将正常成年鼠按完全随机的方法分为四组，即正常对照组、冷激2小时组、冷激4小时组、冷激6小时组。平时四组小鼠都置于25℃环境中正常饲养，每天分别对各组小鼠进行如下处理：
(1)正常对照组：将小鼠置于25℃环境中正常饲养。
(2)冷激2小时组：每天上午8:00～10:00，将小鼠置于2～6℃的寒冷环境进行刺激，寒冷刺激结束后立即送回动物饲养室，反复刺激16～20天。
(3)冷激4小时组：每天上午8:00～12:00，将小鼠置于2～6℃的寒冷环境进行刺激，寒冷刺激结束后立即
送回动物饲养室，反复刺激16～20天。
(4)冷激6小时组：每天上午8:00～14:00，将小鼠置于2～6℃的寒冷环境进行刺激，寒冷刺激结束后立即送回动物饲养室，反复刺激16～20天。
(5)刺激结束，分别对每一组小鼠称量体重，麻醉，测量血压。
本发明方法的特点为采用
本发明制备的高血压小鼠模型的评价方法包括小鼠一般情况的观察、血压的检测等，所有评价方法均为常规方法。评价结果表明，模型组的血压明显高于对照组。 本发明复制的高血压小鼠模型稳定性好、与临床病理相似度高、制备速度快等优点，适合于妊娠高血压发病机制及方法的研究。
具体实施方式
实施例一
1.实验动物
小鼠(Mus Musculus)，中国昆明种(KUNMING，C-1)。由山东中医药大学实验动物中心提供。体重26-28g，购买饲养一周，待其适应新环境后用于实验，自由取食和饮水。
2.实验器材
2℃的冷藏室，PcLab生物医学信号采集处理系统，水银检压计，压力换能器。解剖刀，解剖剪，解剖盘，止血钳，动物固定板，棉线，固定钉，玻璃分针，动脉夹，2ml注射器，离心机。扭力天平(T N型，精确度0.01g)，电子天平(B S124S，精确度0.0001g)。
3.药品、试剂
3.8％柠檬酸三钠溶液，20％脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9％生理盐水。
4.实验步骤
将正常成年鼠按完全随机的方法分为模型组和对照组，每天从常温动物饲养室中取出模型组小鼠，放于2℃的环境中进行寒冷刺激，每天进行寒冷刺激的持续时间为2小时，结束后立即将小鼠送回常温动物饲养室；对照组小鼠一直在常温动物饲养室中饲养，不进行寒冷
刺激；开始对模型组小鼠进行寒冷刺激后的第16天测定小鼠血压，收缩压超过110毫米汞柱即为高血压小鼠模型制备成功。
实施例二
1.实验动物
小鼠(Mus Musculus)，中国昆明种(KUNMING，C-1)。由山东中医药大学实验动物中心提供。体重26-28g，购买饲养一周，待其适应新环境后用于实验，自由取食和饮水。
2.实验器材
2℃的冷藏室，PcLab生物医学信号采集处理系统，水银检压计，压力换能器。解剖刀，解剖剪，解剖盘，止血钳，动物固定板，棉线，固定钉，玻璃分针，动脉夹，2ml注射器，离心机。扭力天平(T N型，精确度0.01g)，电子天平(B S124S，精确度0.0001g)。
3.药品、试剂
3.8％柠檬酸三钠溶液，20％脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9％生理盐水。
4.实验步骤
将正常成年鼠按完全随机的方法分为模型组和对照组，每天从常温动物饲养室中取出模型组小鼠，放于4℃的环境中进行寒冷刺激，每天进行寒冷刺激的持续时间为2小时，结束后立即将小鼠送回常温动物饲养室；对照组小鼠一直在常温动物饲养室中饲养，不进行寒冷刺激；开始对模型组小鼠进行寒冷刺激后的第18天测定小鼠血压，收缩压超过110毫米汞柱即为高血压小鼠模型制备成功。
实施例三
1.实验动物
小鼠(Mus Musculus)，中国昆明种(KUNMING，C-1)。由山东中医药大学实验动物中心提供。体重26-28g，购买饲养一周，待其适应新环境后用于实验，自由取食和饮水。
2.实验器材
2℃的冷藏室，PcLab生物医学信号采集处理系统，水银检压计，压力换能器。解剖刀，解剖剪，解剖盘，止血钳，动物固定板，棉线，固定钉，玻璃分针，动脉夹，2ml注射器，离心机。扭力天平(T N型，精确度0.01g)，电子天平(B S124S，精确度0.0001g)。
3.药品、试剂
3.8％柠檬酸三钠溶液，20％脲酯(氨基甲酸乙酯)溶液，0.9％生理盐水。
4.实验步骤
将正常成年鼠按完全随机的方法分为模型组和对照组，每天从常温动物饲养室中取出模型组小鼠，放于
6℃的环境中进行寒冷刺激，每天进行寒冷刺激的持续时间为2小时，结束后立即将小鼠送回常温动物饲养室；对照组小鼠一直在常温动物饲养室中饲养，不进行寒冷刺激；开始对模型组小鼠进行寒冷刺激后的第20天测定小鼠血压，收缩压超过110毫米汞柱
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