(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010495772.2
(22)申请日 2020.06.03
(71)申请人 广州赛库生物技术有限公司
地址 510000 广东省广州市国际生物岛螺
旋三路6号第四层401单元
(72)发明人 梁轩毅 秦庆添 黄唯屹 江婉婷
陈雅欣
(74)专利代理机构 广州骏思知识产权代理有限
公司 44425
代理人 卢娟 杨金保
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6888(2018.01)
C12Q 1/6844(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
测试剂盒
(57)摘要
本发明公开了一种小鼠短串联重复序列的
多重扩增体系，该多重扩增体系中包含18对引
物，可同时扩增18个小鼠的STR位点。
本发明还包括由所述多重扩增体系构成的检测试剂盒。本发 明所述多重扩增体系通过一次扩增即可获得大
量信息；扩增产物带有荧光，可直接在测序仪上
进行检测，结果准确，重复性高，数据可建立标准
参考数据库；操作简便，需时短，易于规模化及自
动化。
权利要求书3页 说明书13页序列表8页 附图8页CN 111718999 A 2020.09.29
C N 111718999
A
1.小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，其特征在于，该多重扩增体系中包含18对引物，可同时扩增1
8个小鼠的STR位点Mmus-1、Mmus-2、Mmus-3、Mmus-4、Mmus-5、Mmus-6、Mmus-7、Mmus-8、Mmus-9、Mmus-10、Mmus-11、Mmus-12、Mmus-13、Mmus-14、Mmus-15、Mmus-16、Mmus-17、Mmus-18；
所述扩增Mmus-1的上游引物序列SEQ ID NO:1所示；
所述扩增Mmus-1的下游引物序列SEQ ID NO:2所示；
所述扩增Mmus-2的上游引物序列SEQ ID NO:3所示；
所述扩增Mmus-2的下游引物序列SEQ ID NO:4所示；
所述扩增Mmus-3的上游引物序列SEQ ID NO:5所示；
所述扩增Mmus-3的下游引物序列SEQ ID NO:6所示；
所述扩增Mmus-4的上游引物序列SEQ ID NO:7所示；
所述扩增Mmus-4的下游引物序列SEQ ID NO:8所示；
所述扩增Mmus-5的上游引物序列SEQ ID NO:9所示；
所述扩增Mmus-5的下游引物序列SEQ ID NO:10所示；
所述扩增Mmus-6的上游引物序列SEQ ID NO:11所示；
所述扩增Mmus-6的下游引物序列SEQ ID NO:12所示；
所述扩增Mmus-7的上游引物序列SEQ ID NO:13所示；
所述扩增Mmus-7的下游引物序列SEQ ID NO:14所示；
所述扩增Mmus-8的上游引物序列SEQ ID NO:15所示；
所述扩增Mmus-8的下游引物序列SEQ ID NO:16所示；
所述扩增Mmus-9的上游引物序列SEQ ID NO:17所示；
所述扩增Mmus-9的下游引物序列SEQ ID NO:18所示；
所述扩增Mmus-10的上游引物序列SEQ ID NO:19所示；
所述扩增Mmus-10的下游引物序列SEQ ID NO:20所示；
所述扩增Mmus-11的上游引物序列SEQ ID NO:21所示；
所述扩增Mmus-11的下游引物序列SEQ ID NO:22所示；
所述扩增Mmus-12的上游引物序列SEQ ID NO:23所示；
所述扩增Mmus-12的下游引物序列SEQ ID NO:24所示；
所述扩增Mmus-13的上游引物序列SEQ ID NO:25所示；
所述扩增Mmus-13的下游引物序列SEQ ID NO:26所示；
所述扩增Mmus-14的上游引物序列SEQ ID NO:27所示；
所述扩增Mmus-14的下游引物序列SEQ ID NO:28所示；
所述扩增Mmus-15的上游引物序列SEQ ID NO:29所示；
所述扩增Mmus-15的下游引物序列SEQ ID NO:30所示；
所述扩增Mmus-16的上游引物序列SEQ ID NO:31所示；
所述扩增Mmus-16的下游引物序列SEQ ID NO:32所示；
所述扩增Mmus-17的上游引物序列SEQ ID NO:33所示；
所述扩增Mmus-17的下游引物序列SEQ ID NO:34所示；
所述扩增Mmus-18的上游引物序列SEQ ID NO:35所示；
所述扩增Mmus-18的下游引物序列SEQ ID NO:36所示。
2.根据权利要求1所述的小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，其特征在于，还包括一对能扩增小鼠性别判定位点Kdm5的引物，分别为：
扩增Kdm5的上游引物序列如SEQ ID NO:37所示；
扩增Kdm5的下游引物序列如SEQ ID NO:38所示。
3.根据权利要求2所述的小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，其特征在于，所述的19对引物被分为四组，每组引物带有不同的荧光标记物，且四组引物分别在每一对引物的上游引物5’末端添加相应颜的荧光标记物；所述第一组为Mmus-16、Mmus-5、Kdm5、Mmus-8和Mmus-17；第二组为Mmus-2
、Mmus-9、Mmus-1、Mmus-4和Mmus-10；第三组为Mmus-3、Mmus-14、Mmus-7和Mmus-11；第四组为Mmus-15、Mmus-12、Mmus-6、Mmus-18和Mmus-13。
4.根据权利要求3所述的小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，其特征在于，所述第一组、第二组、第三组和第四组引物分别采用不同的荧光标记，所述四组引物的荧光标记可以从6-FAM、VIC、NED、PET随机组合，或从FL、JOE、TMR、CXR随机组合。
5.根据权利要求4所述的小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，其特征在于，所述多重扩增体系还包括：PCR反应缓冲液、模板DNA和Taq酶。
6.根据权利要求5所述的小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，其特征在于，所述Taq 酶为热启动适合多重位点扩增用Taq酶。
7.小鼠短串联重复序列的多重扩增检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-6任一项所述的多重扩增体系。
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述引物有19对，其用量体积比为：
9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述多重扩增体系具体如下：
无核酸酶纯水8.5μl
2x PCR反应缓冲液12.5μl
引物混合物(PrimerMix) 2.5μl
Taq酶0.5μl
模板DNA1μl
总计25μl
。
小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒技术领域
[0001]本发明涉及生物技术检测领域，尤其涉及小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒。
背景技术
[0002]从第一株实验室培养的细胞系诞生后不久，就一直有关于细胞系交叉污染问题的文章及报道。曾有文献作者根据检测结果估算，全球在用的细胞系有高达20％至33％是被错误标记或辨识。从2015年开始，多家科学界权威杂志社陆续要求撰稿人需要对所使用的细胞系提供鉴定报告，以证明所使用的细胞系没有交叉污染或被错误标记。之后，细胞系交叉污染问题才得到广大科研工作人员的重视。近来，使用错误细胞系的情况虽有所改善，但仅仅是对于人源细胞系而言；对于其他种属的细胞，因为没有统一的数据库或没有稳定的检测体系等，情况一直没有很大的改善。而大量的未经鉴定的非人源细胞系的使用，同样会造成科研时间和经费的浪费，同时也会导致错误结论或误导其他科研人员。 [0003]短串联重复序列(STR)检测已广泛应用于亲缘鉴定、法医鉴定等检测中；而且在人源细胞系的鉴定中也非常成熟，并已建立起了统一的STR位点信息数据库，可供广大科研人员查询和比对。
[0004]小鼠细胞系是除人源细胞系外使用最多的一类细胞系。虽然小鼠已有全基因组序列，但仍没有一个标准的STR Marker组合和标准数据库可以检索。
[0005]在2016年，专利CN105648100A，更新了小鼠短串联重复序列的复合扩增体系及检测试剂盒，包含9个位点和一个性别判定位点。但9个位点所能提供的分辨率对于数量庞大的小鼠个体来说是远远不够的，并不确保能把每只小鼠个体区分开来。这对小鼠细胞系及小鼠个体的鉴定来说都是不利的，亟需开发针对更多位点的小鼠短串联重复序列多重扩增体系及检测试剂盒。
发明内容
[0006]本发明的目的是为了解决上述现有技术的缺点和不足，提供一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒，通过鉴定小鼠的STR位点来鉴定小鼠细胞系。
[0007]本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0008]一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，包含18对引物，可同时扩增18个小鼠的STR位点Mmus -1、Mmus -2、Mmus -3、Mmus -4、Mmus -5、Mmus -6、Mmus -7、Mmus -8、Mmus -9、Mmus -
10、Mmus -11、Mmus -12、Mmus -13、Mmus -14、Mmus -15、Mmus -16、Mmus -17、Mmus -18；所述引物分别为:
[0009]扩增Mmus -1的上游引物：AGCTATCAGAGATGCCCCCT(SEQ ID NO:1)；
[0010]扩增Mmus -1的下游引物：GACAGATAGTGAACTCTAGG(SEQ ID NO:2)；
[0011]扩增Mmus -2的上游引物：CTACAGTCTTTCTGTCTTT(SEQ ID NO:3)；
[0012]扩增Mmus -2的下游引物：GGACTTTGGGGGGGAGGTT(SEQ ID NO:4)；
说 明 书
1/13页CN 111718999 A
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