[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101628907A [43]公开日2010年1月20日
[21]申请号200910041443.4[22]申请日2009.07.28
[21]申请号200910041443.4
[71]申请人广州白云山明兴制药有限公司
地址510000广东省广州市海珠区工业大道北48
号
[72]发明人许小春 段敏丽 司徒少金 高建胜 王莎
周小琴 [74]专利代理机构广州创颖专利事务所代理人曹可芬
[51]Int.CI.C07D 311/82 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 4 页
[54]发明名称
[57]摘要
荧光素钠的精制方法，涉及用试剂级荧光素钠
为原料制备高纯度的荧光素钠的方法。它是取试剂
级荧光素钠，加入极性溶剂，加入活性炭，回流10
～60分钟后过滤，取滤液搅拌下加盐酸，降至室温，
放置，使荧光素钠完全析出，过滤，用极性溶剂洗
涤后再用纯水洗涤，将荧光素置于水中，用氢氧化
钠或碳酸钠调节pH值至8.5～9.0，过滤，滤液浓缩
成稠状物，干燥，即得重量含量在99.5％以上的荧
光素钠。本方法操作简单，易实现工业化批量生产；
整个工艺是一次酸碱精制工序，废水量少，利于环
度，便于注射剂产品的质量控制和降低临床用药的
风险。
200910041443.4权 利 要 求 书第1/1页 1、一种荧光素钠的精制方法，其特征在于取重量含量为90.0～95.0％的荧光素钠，加入荧光素钠重量的2～12倍体积的极性溶剂，加热回流至荧光素钠溶解后加入荧光素钠重量的1～10％的活性碳，继续回流10～60分钟后过滤，取滤液搅拌下加计算量的盐酸，以100g的荧光素钠加56ml的浓盐酸，并使其降温至室温，放置，使荧光素钠完全析出，过滤，用极性溶剂洗涤沉淀后再用纯水洗涤，将荧光素置于2～5倍量的水中，用氢氧化钠或碳酸钠调节pH 值至8.5～9.0，过滤，滤液浓缩成稠状物，干燥，即得重量含量在99.5％以上的荧光素钠。
2、根据权利要求1所述的荧光素钠的精制方法，其特征在于所述的极性溶剂为水、无水乙醇、50～99％的乙醇溶液、甲醇、二甲基甲酰胺、丙酮、正丁醇或氯仿∶异丁醇体积比为1∶1的溶液。
200910041443.4说 明 书第1/6页
荧光素钠的精制方法
技术领域
本发明涉及一种仅含氧原子的杂环有机化合物的精制方法，具体是用试剂级荧光素钠为原料制备药用级高纯度的荧光素钠的方法。
背景技术
荧光素钠的化学名为9-(邻羧基苯基)-6-羟基-3H-呫吨-3-酮二钠盐，英文名为fluorescein sodium，可用于眼角膜损伤、眼底血管造影诊断及血液循环时间的测定。高纯度的药用级的荧光素钠用于制备造影用的注射剂。目前用于制备注射剂的荧光素钠原料虽符合药典要求，荧光素钠的重量含量可达到98.5％，但是用高效液相谱法分析即可发现仍有较多个杂质存在，因有杂质干扰，用分光光度法测定时，即使浓度稀释为1.0％时，在600nm波长处其吸收度值均大于4.0，仪器无法准确读数；对于装在安瓿瓶内的10％或20％浓度的荧光素钠注射液，在自然光下检视，液体颜极深，无法进行可见异物检查。据文献报道荧光素钠中主要杂质是苯二甲酸酐，间苯二酚，6-羟基-7-磺酸基-9-(邻羧基苯基)-3H-呫吨-3-酮，6-羟基-9-(邻乙氧基羰基苯基)-3H-呫吨-3-酮或2-(2，4-二羟基苯甲酰基)苯甲酸等。由于这些杂质的存在，其荧光素钠注射液注射入人体还会带来一定的副作用，如恶心呕吐、皮肤荨麻疹、咳嗽等过敏反应，严重时可产生过敏性休克，无法保证用药的安全。由于这些杂质与荧光素钠结构相似，分离操作难度较大，杂质在碱性条件下易溶于水，此时，活性碳对其吸附明显低，而在酸性
条件下这些杂质和荧光素共沉淀，所以本技术领域的技术人员认为用传统的方法去除这些杂质制备高纯度的荧光素钠是很难实现的。有机制备化学手册(中)P280页，介绍了用荧光素钠重结晶的方法加以提纯。由于荧光素钠有两种变体-不溶于醇醚的红变体和溶于甲醇和乙醇的黄变体，黄变体受热易转变为稳定的红变体。在制备荧光素时，低温酸化析出的为黄变体，此种变体可溶于甲醇或乙醇。但从水中析出的黄变体含有大量水分，不容易过滤，也不容易干燥，而且在加热干燥或加热溶解过程中，黄变体以转变为不溶解的红变体，实际操作中非常困难，并且产率低、废水产生量大。CN101270124A专利公开了一种制备高纯度荧光素及荧光素钠的新方法，它是将荧光素或荧光素钠与乙酰化试剂反应生成双乙酰荧
光素，从而利用杂质和双乙酰荧光素的不同化学极性，使杂质分离，再经过皂化、酸化、成盐得到高纯度的荧光素钠，荧光素钠的重量含量可达到99.2％以上。该方法尽管是可行的，但是，双乙酰荧光素作为一种放射性毒性物质，在加热或遇火条件下，能分解出放射性毒性物质，具有较强的危害性。同时，工艺步骤多而烦琐，成本高。所以我们为了解决制备高纯度的药用荧光素钠而寻一种简便可行的方法。
发明内容
本发明的目的是用简便可行的方法用试剂级荧光素钠(重量含量为90.0～95.0％)制备重量含量99.5％以上的药用高纯度荧光素钠。
为达到本发明的目的，本发明所采用的技术方案是重量含量为90.0～95.0％的荧光素钠，加荧光素钠重量的2～12倍体积的极性溶剂为溶剂，加热回流至荧光素钠溶解后加入荧光素钠重量的1～10％的活性碳，继续回流10～60分钟后过滤，取滤液加入计算量(100g的荧光素钠加入56ml的浓盐酸)的盐酸，搅拌，并使其降温至室温，放置，使荧光素钠完全析出，过滤，滤液用极性溶剂洗涤沉淀后用纯水洗涤至氯离子符合规定(Cl≤0.35％)为止，将荧光素置于2～5倍量的水中，用氢氧化钠或碳酸氢钠调节pH值至8.5～9.0，过滤，滤液浓缩成稠状物，在105℃以下干燥，即得重量含量为99.5％以上，杂质含量为0.5％以下，配成10％(W/V)溶液时600n m处吸光度小于0.5的荧光素钠。
所说的极性溶剂有许多，在本发明中优选水、无水乙醇、50～99％的乙醇溶液、甲醇、二甲基甲酰胺、丙酮、正丁醇或氯仿∶异丁醇体积比为1∶1的溶液。
本发明中荧光素钠重量含量的测定方法：采用高效液相谱法 谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.1mol/ml的磷酸二氢钠溶液体积比为50∶50的溶液作流动相；检测波长为235nm；流速为1ml/分钟。理论板数按荧光素钠峰计算应不低于2000，荧光素钠峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
标准液的制备：精密称取一定量的双乙酰荧光素(USP Diacetylfluorescein RS)(110.7mg无水双乙酰荧光素相当于100mg的荧光素钠)，溶于10ml的乙醇中，置100ml容量瓶中，加入2ml 2.5mol的氢氧化钠溶液，沸水蒸汽中旋
转加热20分钟，放冷，用水稀释至刻度，混匀，制成每1ml含荧光素钠1mg 的对照品溶液。
样品的制备：精密称取干燥至恒重的荧光素钠100mg，置100ml的容量瓶内，加水稀释至刻度，制成供试品溶液。
测定方法：取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪中，记录谱图，按外标法计算供试品中荧光素钠的含量。
本发明中有关物质的检测方法：采用高效液相谱法
谱条件与系统适用性用辛烷基硅烷键合硅胶为填充柱(5μm，4.6mm×250m m)，柱温为30℃，流动相A为磷酸二氢钾1.22g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH至2.0；流动相B为乙腈；检测波长为220nm；按下表进行线性梯度洗脱。
时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)
08515
252080
342080
358515
458515
供试品溶液的制备：取荧光素钠适量，加乙腈∶水体积比为15∶85的溶液作溶剂制成每1m l中含0.5m g荧光素钠的溶液，作为供试品溶液。 对照溶液及对照品溶液的制备：精密量取供试品溶液1m l置100m l量瓶中，用溶剂乙腈∶水体积比为15∶85的溶液稀释至刻度，作为对照溶液。另各取邻苯二甲酸(杂质A)和间苯二酚(杂质B)对照品适量，精密称定，加乙腈∶水体积比为15∶85的溶液制成每1ml中含2.5μg的溶液，作为邻苯二甲酸对照品溶液和间苯二酚对照品溶液。
测定方法：各取对照品溶液20μl，注入液相谱仪，调节检测灵敏度，使主成分谱峰的峰高约为满量程的20％；再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相谱仪，记录谱图。供试品溶液谱图中主峰与相邻各杂质峰的分离度应符合要求。供试品溶液谱图中如有与对照品溶液谱图中杂质A与B相应的峰，其峰面积不得大于对照品溶液谱图中杂质A与B的面积；如有其他杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主
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