(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810358318.5
(22)申请日 2018.04.20
(71)申请人 上海中翊日化有限公司
地址 201414 上海市奉贤区肖业路385号
(72)发明人 廖筝筝 聂菁 李维 孙培文
(74)专利代理机构 杭州天昊专利代理事务所
(特殊普通合伙) 33283
代理人 向庆宁
(51)Int.Cl.
A61K 8/99(2017.01)
A61K 8/9728(2017.01)
A61K 8/67(2006.01)
A61K 8/66(2006.01)
A61Q 19/00(2006.01)
A61Q 19/02(2006.01)
A61P 29/00(2006.01)C12N 1/20(2006.01)C12N 1/18(2006.01)C12R 1/865(2006.01)C12R 1/01(2006.01)
(54)发明名称
用途
(57)摘要
本发明公开了一种嗜热菌和酵母菌共同发
酵培养的发酵产物在制作消炎、皮肤保湿或者皮
肤祛黄试剂上的用途，其中，所述的嗜热菌和酵
条件下的液体一次或者多次增菌发酵，让其处于
指数生长期，然后让发酵液的温度从低温变为高
温后，添加嗜热栖热菌进行二次发酵，发酵的条
件为碱性条件。
可以显著提高嗜热栖热菌的一些活性成分，特别是一些运用到皮肤护理制剂的活 性成分的含量得到增加或者活性得以提高，尤其
是对于温和消炎、
保湿和皮肤祛黄上效果显著。权利要求书2页 说明书18页 附图1页CN 108553403 A 2018.09.21
C N 108553403
A
1.嗜热菌和酵母菌共同发酵培养的发酵产物在制作消炎、皮肤保湿或者皮肤祛黄试剂上的用途，其中，所述的嗜热菌和酵母共同发酵方法包括：先对酵母进行低温，酸性条件下的液体一次或者多次增菌发酵，让其处于指数生长期，然后让发酵液的温度从低温变为高温后，添加嗜热栖热菌进行二次发酵，发酵的条件为碱性条件。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，嗜热栖热菌和酵母菌组合发酵的方法，该方法包括如下步骤：(1)先将酿酒酵母菌在低温，酸性条件下进行一次或多次发酵，对酵母菌进行增菌；(2)等酵母菌处于对数生长期后期再将温度升高，接种嗜热栖热菌并在碱性条件下进行第二次发酵，获得发酵产物。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，在步骤(1)中，对酵母进行至少两以上的增菌培养，从而让酵母处于对数生长期；在步骤(2)中，向酵母培养液中接种嗜热栖热菌前，对嗜热栖热菌进行一次或者多次增菌培养。
4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述的酿酒酵母的菌株为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CICC1596；所使用嗜热栖热菌HB27购于美国模式菌种收集中心(ATCC)，保藏号是BAA-163。
5.根据权利要求3所述的用途，其中，对酵母进行低温培养，所述的温度为20℃-30℃；对酵母进行酸性培养，所述的PH值为4.0-5.0；酵母菌处于对数生长期后期0-1天开始升高温度；其中，升高温度到55℃-70℃。
6.根据权利要求3所述的用途，其中，升高温度0天后开始接种嗜热菌，同时或者接种后1天开始调节培养的PH值为碱性，PH值为
7.0-
8.5。
7.根据权利要求3所述的用途，其中，所述的消炎包括对炎症因子的减少的作用，所述的炎症因子包括IL-1α、IL-6、IL-8或TNF-α。
8.根据权利要求1所述的用途，其中，所述的试剂为皮肤护理制剂，可以以任何一种形态存在，可以为溶液、水剂、悬浮液、面膜、乳液、霜剂、膏状、凝胶、干粉、湿粉、喷剂中的一种。
9.嗜热菌和酵母菌共同发酵培养的发酵产物在制作消炎或者皮肤保湿试剂上的用途，其中，所述的嗜热菌和酵母共同发酵方法包括：
步骤1：分别对酿酒酵母菌和嗜热栖热菌进行增菌培养；
其中，酿酒酵母菌增菌方法如下：
(1)在超净工作台上取试管斜面上的酿酒酵母CICC1596一环，接入装有50mL培养液(pH 为4.8±0.2)的250mL三角瓶中，200rpm(每分钟转200转)，30℃培养10h左右，菌体处于对数生长期；
(2)将处于对数生长期的菌体接种到装有2L(pH为4.8±0.2)的2.5L三角瓶中，接种量为10％(体积百分数，200毫升步骤(1)的处于对数生长期的酵母培养液)，200rpm，30℃培养10h左右；
(3)将步骤(2)培养后的3L菌种接种到装有30L发酵液(pH为4.8±0.2)的一级种子50L 罐中，通气量维持在5m3/h/50L,200rpm，30℃培养10h左右；
(4)将30L菌液转移到装有300L的二级种子500L罐中。通气量维持在5m3/h/50L,200rpm，30℃培养10h左右；
其中，嗜热栖热菌增菌方法如下：在超净工作台上取嗜热栖热菌HB27冻存液2mL接入装
有2L培养液(pH为7.8±0.2)的2.5L三角瓶中，通气量维持在5m3/h/50L,150rpm，65℃培养12h左右，菌体处于对数生长期后，将30L菌液接种到300L培养液的500L二级500L种子罐中；
步骤2：对酵母的一次发酵方法如下：
对酵母的一次发酵方法如下：将300L的二级种子罐中(经过步骤(4)后的)的酵母菌培养液转移到装有2400L培养液(pH为4.8±0.2)的5000L发酵罐中，通气量维持在5m3/h/50L, 200rpm，30℃培养14h左右；
步骤3：二次发酵
将一次发酵培养液温度从30℃提升到65℃后0-1天内，将300L嗜热栖热菌增菌液转移到此发酵罐中，通气量维持在5m3/h/50L,150rpm搅拌，用碱液将pH值调节到7.8±0.2，150rpm，65℃培养18h左右；
其中，培养液的配方为：20L培养液的配比为60g蛋白胨、4g麦芽汁、7g无水硫酸镁、2.4g 磷酸二氢钾、40g硫酸铵、1g无水氯化铁、5g氯化钠，pH值用酸或碱进行调节控制，其余为水。
10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述的酿酒酵母的菌株为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CICC1596；所使用嗜热栖热菌HB27购于美国模式菌种收集中心(ATCC)，保藏号是BAA-163。
一种嗜热栖热菌和酵母菌组合发酵产物的用途
技术领域
[0001]本发明属于用于皮肤护理的发酵原料领域，特别涉及嗜热栖热菌和酵母菌组合发酵的方法以及应用。
背景技术
[0002]生物发酵原料在皮肤护理制剂包括化妆品领域的应用越来越多，近两年酵素化妆品受到了消费者的追捧。发酵是纯生物的过程，中间没有任何化工成分的添加。发酵让活性物质更加容易溶出，通过发酵将全部活性成分提取出来，会产生新的营养素，让营养成分更加均衡，使营养成分小分子化，活性更强，可被皮肤快速吸收。发酵微生物中本身含有很多酶类和微量元素，有补充增效作用。符合消费者对于“天然、健康、高效”护肤品的期待。[0003]酵母菌是目前应用在化妆品发酵原料领域最多的菌株，酵母提取物具有天然、安全、强效的保湿功效。酵母细胞中含有丰富的天然保湿因子(NMF)，如氨基酸、肽类、钠、钾、镁等矿物元素。其中，氨基酸占天然保湿因子(NMF)的40％，钠、钾、镁等矿物元素占天然保湿因子(NMF)的12％。酵母细胞壁主要成分包括酵母β-(1,3)/(1,6)-葡聚糖和甘露聚糖。酵母β-(1,3)/(1,6)-葡聚糖含有大量的亲水基团，可以吸收水分或锁住皮肤角质层水分。酵母甘露聚糖特有的分子结构能锁住水分子，达到长效保湿的作用。例如中国专利申请公开CN105434319A，CN107184411A，CN10655182A的中国专利公开了采用酵母发酵产物作为化妆品的原料进行制作化妆品。
[0004]嗜热栖热菌(Thermus Thermophilus)是一种耐热菌，能产生热稳定性的超氧化物歧化酶(SOD)和B族维生素。超氧化物歧化酶可以将02－氧化成H202，避免生物体被氧化损伤，起到皮肤抵抗自由基侵害，延缓衰老的功效。B族维生素可以减轻皮肤炎症反应，抵抗日光的损害，促进细胞再生，B族维生素还是很多酶和辅助酶分子结构的一部分，可促进氨基酸的代谢以保持皮肤健康。在中国专利申请号:2017107329367中也揭示了采用嗜热栖热菌的发酵产物作为护肤基质，但是该护肤基质除了嗜热栖热菌的发酵产物外，还包括重组人源胶原蛋白，但是该申请仅仅提到嗜热栖热菌的发酵产物，但是没有披露如何发酵。再例如，在中国专利申请，申请号200710031387中也披露了生物酶防晒组合物，其中该组合物中包括嗜热栖热菌生物酶而且提供了比例。但是，一般嗜热栖热菌都是通过发酵而生产的，酶的活性或者酶的产量并没有披露，而且这种酶在和其它成分组合的时候，稳定性也是一个重要因素，毕竟防晒产品中含有酶，酶在紫外光下是否失活，是否具有酶的活性也不确定。[0005]现有传统技术中，都是单菌种进行分别完成发酵后，再进行两种发酵液进行勾兑。不同的菌和酶类，溶解到一起发生的抵消反应，会损失大量的菌和酶活性，往往实际效果并不理想。这就需要对现有发酵方法和产物进行改进，希望获得更多活性物质，而且减少单独发酵产物混合相互效果抵消效果。
发明内容
[0006]为解决上述问题，本发明提出嗜热栖热菌和酵母菌组合发酵工艺，以达到提高嗜
热栖热菌发酵产物的生物活性，丰富嗜热栖热菌发酵产物的应用功效，特别是提高嗜热栖热菌发酵产物在温和消炎、保湿和屏障修复、以及祛黄方面的功效，满足人们对化妆品“天然、健康、高效”的追求。
[0007]本发明小组意外发现，多菌共生发酵将多种菌进行可控性发酵，不仅可以发酵出种类更多的有益酶，还能使每类酶产出的数量是普通单菌种发酵数量的多倍，酶越多，对人体的催化保健功能越强，尽管市场上已经出现了酵母提取物和嗜热栖热菌发酵产物，但是都是作为单一产品添加到化妆品中，开拓酵母菌和嗜热栖热菌进行组合发酵使用于化妆品是一个新课题。
[0008]本发明小组意外的发现，让酵母和嗜热菌共同培养，经过特殊的培养工艺，可以让酵母对嗜热菌的培养起到诱导活化的作用，比单独培养嗜热菌所得的产物的活性有显著的提高，而酵母本身的培养产品的活性没有太大的影响。这样就增强了嗜热菌的活性物质的释放，或者活性物质的活性增强。
[0009]虽然嗜热菌单独培养可以产生一些有益的活性物质，但是这种活性物质的量很少，而且活性不高。如果让酵母和嗜热菌共同培养，经过特殊的培养方法，发现，可以显著提高嗜热菌的活性物质的产品，特别是一些活性物质的活性显著增强。
[0010]一方面，本发明提供培养嗜热菌的发酵产物的方法，该方法包括如下步骤：[0011](1)先将酿酒酵母菌在中温，酸性条件下进行一次或多次发酵，对酵母菌进行增菌；
[0012](2)等酵母菌处于对数生长期后期再将温度升高后的0天或者1天后，接种嗜热栖热菌并在碱性条件下进行第二次发酵，获得发酵产物。
[0013]在一些优选的方式中，对酵母进行至少两次增菌培养，或者至少3次或者至少4次、5次、6次的增菌培养，从而让酵母处于对数生长期。
[0014]在一些优选的方式中，对嗜热栖热菌在进行混合发酵前也进行一次或者多次增菌培养。
[0015]在一些优选的方式中，该方法还包括步骤(3)，对步骤(2)发酵液进行除菌，脱祛味，过滤去杂，得到嗜热栖热菌和酵母菌组合发酵产物。
[0016]在一些优选的方式中，所述的酿酒酵母的菌株为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CICC1596。
[0017]在一些优选的方式中，本发明所使用嗜热栖热菌HB27购于美国模式菌种收集中心(ATCC)，保藏号是BAA-163。
[0018]在一些方式中，对酵母进行低温培养，所述的温度为20℃-30℃。
[0019]在一些方式中，对酵母进行酸性培养，所述的PH值为4.0-5.0。
[0020]在一些方式中，酵母菌处于对数生长期后期0天或1天后开始升高温度。优选的，升高温度到55℃-75℃，或者60℃-65℃。或者60℃，65℃，70℃，58℃，61℃。从低温升高到高温的时间一般通过几分钟就可以达到，例如采用电加热的方法进行升温。
[0021]在一些方式中，升高温度0天或者1天后，后开始接种嗜热菌，同时或者接种后1天开始调节培养的PH值为碱性，PH值为7.0-8.5。
[0022]在一些方式中，二次发酵的条件是通气量维持在5m3/h/50L-10m3/h/50L,100rpm-200rpm，发酵的天数是1-3天。
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