(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010586231.0
(22)申请日 2020.06.24
(71)申请人 贵州古得宁酒业有限公司
地址 564501 贵州省遵义市仁怀市茅台镇
云柳村漂水塘组
(72)发明人 林国华 刘智 郭军 陈明
(74)专利代理机构 武汉臻诚专利代理事务所
(普通合伙) 42233
代理人 胡星驰
(51)Int.Cl.
C12G 3/055(2019.01)
A61K 38/01(2006.01)
A61P 1/14(2006.01)
A61P 15/00(2006.01)
(54)发明名称一种具有补肾益阳作用的鲟鱼骨肽酒、其制备方法及应用(57)摘要本发明公开了一种具有补肾益阳作用的鲟鱼骨肽酒、其制备方法及应用。所述鲟鱼骨肽酒其为白酒中溶解有质量比例在3％至10％的鲟鱼骨肽；所述白酒酒精度数在40％Vol至60％Vol之间。制备方法包括以下步骤：(1)将水解后的鲟鱼骨肽干粉，按照配方比例加入到白酒中，混匀获得悬浊液；(2)将步骤(1)中获得的悬浊液，浸泡30天以上，获得浸提混合物；(3)将步骤(2)中获得的浸提混合物倒缸，获得上层澄清溶液，即制得所述鲟鱼骨肽酒。本发明提供的鲟鱼骨肽酒能应用于制备预防、或辅助肾阳虚症的保健品、药品、
或食品。权利要求书1页 说明书10页 附图3页CN 111718825 A 2020.09.29
C N 111718825
A
1.一种鲟鱼骨肽酒，其特征在于，其为白酒中溶解有质量比例在3％至10％的鲟鱼骨肽；所述白酒酒精度数在40％Vol至60％Vol之间。
2.如权利要求1所述的鲟鱼骨肽酒，其特征在于，所述鲟鱼骨肽分子量小于或等于250Da的多肽质量分数在80％以上。
3.如权利要求1所述的鲟鱼骨肽酒，其特征在于，所述鲟鱼骨肽硒含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间。
4.如权利要求1所述的鲟鱼骨肽酒，其特征在于，所述白酒为纯酿酿造的酱香型白酒。
5.如权利要求1至4任意一项所述的鲟鱼骨肽酒，其特征在于，所述白酒中溶解有质量比例在6％的鲟鱼骨肽；所述白酒酒精度数在53％Vol。
6.如权利要求1至5任意一项所述的鲟鱼骨肽酒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将水解后的鲟鱼骨肽干粉，按照配方比例加入到白酒中，混匀获得悬浊液；
(2)将步骤(1)中获得的悬浊液，浸泡30天以上，获得浸提混合物；
(3)将步骤(2)中获得的浸提混合物倒缸，获得上层澄清溶液，即制得所述鲟鱼骨肽酒。
7.如权利要求6所述的鲟鱼骨肽酒的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)每静置10～12天将悬浊液容器倒置，倒置混合3次以上获得浸提混合物。
8.如权利要求6所述的鲟鱼骨肽酒的制备方法，其特征在于，所述鲟鱼骨肽按照如下方法制备：
(A1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；
(A2)将步骤(A1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，获得酶解粗产物；
(A3)将步骤(A2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽；具体步骤如下：
将步骤(A2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％至5％的聚乙二醇、以及入鱼骨粉质量0.5％至1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时以上，期间每0.5小时至2小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
(A4)将步骤(A3)中获得的酶解精产物，进行脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物；
(A5)将步骤(A4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
9.如权利要求8所述的鲟鱼骨肽酒的制备方法，其特征在于，步骤(A3)所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合，优选1:
2.5:1。
10.一种如权利要求1至5任意一项所述的鲟鱼骨肽酒的应用，其特征在于，应用于制备预防、或辅助肾阳虚症的保健品、药品、或食品。
权 利 要 求 书1/1页CN 111718825 A
一种具有补肾益阳作用的鲟鱼骨肽酒、其制备方法及应用
技术领域
[0001]本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种具有补肾益阳作用的鲟鱼骨肽酒、其制备方法及应用。
背景技术
[0002]中华鲟形态威猛，个体硕大，寿命较长，最长命者可达40岁，是淡水鱼类中个体最大、寿命最长的鱼。它们既是介于软骨鱼类(鲨鱼等)与硬骨鱼类之间的类，又是硬骨鱼类中较原始的类，其鱼骨的成分构造几位独特。
[0003]中华鲟为高蛋白、多脂肪性鱼类。其鱼皮可制革，鱼卵可制酱，鱼胆可入药，鱼肉、鱼肠、鱼膘、鱼骨等均是上等佳肴，鳔和脊索可制作鱼胶。肌肉中蛋白质含量为16.42-20.41％，脂肪为3.05-4.32％；肝脏中蛋白质含量为10.31-16.26％，脂肪为16.63-27.58％；卵粒中蛋白质的含量为24.90-29.70％，脂肪为18.06-24.00。肌肉和卵粒中均含有可以测定的17种常见的氨基酸。其中含有人体必需的8种氨基酸(除因酸水解被破坏的氨基酸外，尚有异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸和缬氨酸)；半必需的氨基酸两种(精氨酸及组氨酸，均为婴儿必需)；非必需的氨基酸8种(丙氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酩氨酸)。在肌肉中高含量的氨基酸有谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸；低含量的氨基酸有组氨酸、蛋氨酸及胱氨酸；其余氨基酸含量的高低排列各有异同。雌性个体肌肉含必需及半必需氨基酸的含量占氨基酸含量的48.54％，卵粒占48.80％；雄性肌肉占49％。《本草纲目》记载：“其肝主治疮疥，其肉补虚益气，浴血淋，其鼻肉作脯补虚下气，其籽如小豆，食之健美，杀腹内小虫。”
[0004]中华鲟的综合利用有着广阔的前景，而目前对于中华鲟鱼鱼骨的应用技术十分有限。
发明内容
[0005]针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种具有补肾益阳作用的鲟鱼骨肽酒、其制备方法及应用，其目的在于通过小鼠灌胃实验证实，本发明提供的鲟鱼骨肽酒，按照其独特的工艺制备，能有效的提高肾阳虚证小鼠的抗疲劳能力、耐寒能力，解剖实验显示灌胃本发明提供的鲟鱼骨肽酒的肾阳虚证小鼠体重、免疫器官重量有明显的增加，由此提供一种用于制备用预防、或辅助肾阳虚症的保健品、药品、或食品。[0006]为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种鲟鱼骨肽酒，其为白酒中溶解有质量比例在3％至10％的鲟鱼骨肽；所述白酒酒精度数在40％Vol至60％Vol之间。[0007]优选地，所述鲟鱼骨肽酒，其所述鲟鱼骨肽分子量小于或等于250Da的多肽质量分数在80％以上。
[0008]优选地，所述鲟鱼骨肽酒，其所述鲟鱼骨肽硒含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间[0009]优选地，所述鲟鱼骨肽酒，其所述白酒为纯酿酿造的酱香型白酒。
[0010]优选地，所述鲟鱼骨肽酒，其所述白酒中溶解有质量比例在6％的鲟鱼骨肽；所述
白酒酒精度数在53％Vol。
[0011]按照本发明的另一个方面，提供了本发明所述的鲟鱼骨肽酒的制备方法，其包括以下步骤：
[0012](1)将水解后的鲟鱼骨肽干粉，按照配方比例加入到白酒中，混匀获得悬浊液；[0013](2)将步骤(1)中获得的悬浊液，浸泡30天以上，获得浸提混合物；
[0014](3)将步骤(2)中获得的浸提混合物倒缸，获得上层澄清溶液，即制得所述鲟鱼骨肽酒。
[0015]优选地，所述鲟鱼骨肽酒的制备方法，其所述步骤(2)每静置10～12天将悬浊液容器倒置，倒置混合3次以上获得浸提混合物。
[0016]优选地，所述鲟鱼骨肽酒的制备方法，其所述鲟鱼骨肽按照如下方法制备：[0017](A1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；
[0018](A2)将步骤(A1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，获得酶解粗产物；
[0019](A3)将步骤(A2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽；具体步骤如下：
[0020]将步骤(A2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％至5％的聚乙二醇、以及入鱼骨粉质量0.5％至1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时以上，期间每0.5小时至2小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
[0021](A4)将步骤(A3)中获得的酶解精产物，进行脱盐处理，获得脱盐后的酶解精产物；[0022](A5)将步骤(A4)中获得的脱盐后的酶解精产物固液分离后，取液相干燥，即制得所述鲟鱼骨肽。
[0023]优选地，所述鲟鱼骨肽酒的制备方法，其步骤(A3)所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合，优选1:2.5:1。[0024]按照本发明的另一个方面，提供了所述鲟鱼骨肽酒的应用，其应用于制备预防、或辅助肾阳虚症的保健品、药品、或食品中的应用。
[0025]总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，由于本发明通过多次水解的手段将鲟鱼鱼骨中的蛋白质降解为醇溶性好的小分子肽，同时验证了其对肾阳虚证的作用，从而提供了一种应用于制备预防、或辅助肾阳虚症的保健品、药品、或食品。
附图说明
[0026]图1是实施例4提供的正常组体重测试实验记录；
[0027]图2是实施例4提供的肾阳虚证模型组体重测试实验记录；
[0028]图3是实施例4提供的飞天茅台组体重测试实验记录；
[0029]图4是实施例4提供的鲟鱼骨肽酒组体重测试实验记录；
[0030]图5是实施例4提供的鲟鱼骨肽酒组脾脏解剖实验记录；
[0031]图6是实施例4提供的鲟鱼骨肽酒组胸腺解剖实验记录。
具体实施方式
[0032]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0033]本发明提供了一种鲟鱼骨肽酒，其为白酒中溶解有质量比例在3％至10％的鲟鱼骨肽；所述白酒酒精度数在40％Vol至60％Vol之间。优选所述白酒中溶解有质量比例在6％的鲟鱼骨肽；所述白酒酒精度数在53％Vol，优选为纯粮酿造的酱香型白酒。
[0034]所述鲟鱼骨肽分子量小于或等于250Da的多肽质量分数在80％以上，硒含量在0.7mg/kg至0.9mg/kg之间；按照以下方法制备：
[0035](A1)将鲟鱼鱼骨原料，进行粉碎过160至300目筛，得到鱼骨粉；实验显示对于鱼骨原料的粉碎细度，影响提取过程的整体效果，细度过细导致最终得到的产品多肽活性不佳，而细度过粗导致酶解不完全，导致有机硒的溶出率、吸收率以及酶解后肽的分子量较大，整体营养价值下降。
[0036](A2)将步骤(A1)中获得的鱼骨粉进行第一次酶解，降解鱼骨胶原蛋白骨架，暴露富硒糖蛋白，获得酶解粗产物；
[0037]具体步骤如下：
[0038]将步骤(A1)中获得的鱼骨粉按照固液比(质量比)1:1至1:2加水制成悬浊液，再加入胶原酶和纤维素酶进行酶解，其中胶原酶质量为鱼骨粉质量的0.3％至0.5％，纤维素酶质量为鱼骨粉质量的0.1％至0.4％，酶解0.5小时至1.5小时，期间持续搅拌维持温度在25至30℃；加热至90℃以上，维持30分钟灭酶。
[0039](A3)将步骤(A2)中获得的酶解粗产物进行第二次酶解，获得酶解精产物，使得富硒糖蛋白降解为小分子多肽，其中分子量小于250Da的多肽质量比例超过80％，成为富硒多肽，从而提高硒元素的吸收率。
[0040]具体步骤如下：
[0041]将步骤(A2)中获得的酶解粗产物，加入碱液调节pH值在7.5至8.0，加入质量分数在3％至5％的聚乙二醇、以及入鱼骨粉质量0.5％至1.0％的混合蛋白酶，酶解2小时以上，期间每0.5小时至2小时搅拌一次维持体系均匀，并监测pH值，使得pH值维持在7.5至8.0之间；
[0042]所述混合蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5: 0.8～1.2的混合，优选1:2.5:1。
[0043]其中混合蛋白酶的选择、配比、以及酶解环境，决定了酶切的位点和效率，从而决定了肽段的活性不同，不同配比的混合蛋白酶对于鱼骨中复杂蛋白的酶切结果差异很大。同时酶切结果还决定着硒元素的吸收利用程度，不同的含硒肽段抗衰活性差异明显。因此混合蛋白酶的选择及相应酶解条件具有不可预知性，即使是相同的蛋白酶，由于酶解环境的不同，包括酶解体系的pH值以及溶剂极性的不同，会导致酶构象发生变化，而使得特异性的酶切位点产生不确定性。优选方案，采用枯草杆菌蛋白酶、胰酶、以及菠萝蛋白酶按照质量比1:1～2.5:0.8～1.2的混合进行混合酶解，添加聚乙二醇改变了溶液极性和固液接触面，酶解产物小于243道尔顿的多肽含量超过80％且具备卓越的活性。
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