(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010837731.7
(22)申请日 2020.08.19
(66)本国优先权数据
202010818924.8 2020.08.14 CN
(71)申请人 广东人人康药业有限公司
地址 519060 广东省珠海市南屏科技工业
园屏东五路3号第二层A区、第三层、第
四层
(72)发明人 苏冠荣 尹贝立
(74)专利代理机构 北京中政联科专利代理事务
所(普通合伙) 11489
代理人 尹玮
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
G01N 30/06(2006.01)
G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01)G01N 30/74(2006.01)
(54)发明名称
液相谱法及其应用
(57)摘要
本发明涉及一种高效分离并检测氢醌中对
苯醌的高效液相谱法，所述方法中的谱柱选
自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，
所述流动相由A相和B相组成，其中，A相选自水、
甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲
醇、乙腈中的任一种，检测波长为200‑400nm，进
样量为1‑100μl，柱温为10‑45℃。本发明的检测
方法实现了氢醌与有关物质的有效分离与检测，
显著提高了氢醌的用药安全性，并具有操作简
便、分离度高、专属性好、
灵敏度高等优点。权利要求书1页 说明书19页 附图8页CN 112129846 A 2020.12.25
C N 112129846
A
1.一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相谱法，其特征在于，所述方法中的谱柱选自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，所述流动相由A相和B相组成，其中，A相选自水、甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲醇、乙腈中的任一种，检测波长为200-400nm，进样量为1-100μl，柱温为10-45℃。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述A相中含有浓度为0-0.5％的酸，优选A 相中的酸含量为0.02-0.3％，还优选A相中的酸含量为0.05-0.1％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述A相pH1.0-pH6.0，优选A相pH2.0-pH5.0，更优选A相pH2.5-pH
4.0，还优选A相pH2.7-pH3.85。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述的酸选自甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸、磷酸盐的任一种或其组合，优选磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵的任一种或其组合。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，流动相中的A相:B相的体积比为99:1-70:30，优选
为98:2-80:20，更优选为97:3-90:10。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相洗脱选自等度洗脱、梯度洗脱的任一种。
7.一种高安全性的氢醌组合物，所述氢醌组合物中的氢醌纯度不低于99.0％，氢醌组合物中对苯醌的含量不高于0.1％。
8.根据权利要求7所述的氢醌组合物，所述氢醌组合物中的氢醌纯度不低于99.5％，优选不低于99.9％。
9.根据权利要求7-8任一项所述的氢醌组合物，所述氢醌组合物中对苯醌的含量不高于0.08％，优选不高于0.05％，还优选不高于0.03％。
10.根据权利要求7-9任一项所述的氢醌组合物，所述氢醌组合物中对苯醌或苯胺的任一含量均不高于0.08％，优选不高于0.05％，还优选不高于0.03％。
权 利 要 求 书1/1页CN 112129846 A
一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相谱法及其
应用
[0001]本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种高效分离并检测氢醌中对苯醌含量的高效液相谱法及其应用。
背景技术
[0002]氢醌(又称对苯二酚)为酪氨酸酶抑制剂，主要通过络合作用抑制酪氨酸酶活性，调控黑素细胞代谢过程，使表皮内多巴反应阳性黑素细胞数量显著减少，产生可逆性的皮肤褪。Oettel于1936年首次提出氢醌具有美白皮肤的作用。自20世纪60年代起，许多国家将氢醌用作化妆品的增白剂和皮肤科用于素沉着症、祛斑等外用制剂。但须严格控制氢醌的用量。
[0003]
[0004]氢醌不稳定，易受光照、温度等环境因素的影响而发生氧化降解反应。氢醌在制备过程中引入工艺杂质和副产物外，在其制备及储存中易发生氧化降解反应而生成氧化降解杂质(如对苯醌等)。已有研究表明，对苯醌是光敏感性比氢醌更强的基因毒性物质，且光照将加速氢醌的氧化降解反应。对苯醌为氢醌的主要氧化降解产物，且容易与氢醌形成有复合物，进而影响氢醌及其产品的纯度、质量、稳定性和其性状外观等，需要严格控制其限量在安全范围之内。另有研究表明，氢醌制备储存中生成的杂质(如对苯醌、连苯三酚、间苯二酚、邻苯二酚等)对皮肤、黏膜及中枢神经呼吸系统具有较强的刺激作用，需对其加以质量控制并具有十分重要的临床价值。
[0005]为此，如何科学筛选高效分离并检测氢醌及其有关物质的检测方法，进而有效控制药品质量，以保障药品的有效性和安全性成为迫切需要解决的技术问题。
发明内容
[0006]本发明提供了一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相谱法，该方法通过优化谱条件和洗脱条件，实现氢醌与对苯醌的高效分离与检测，并具有专属性好、灵敏度高等优点，可用于氢醌与对苯醌的高效分离与含量测定，实现药品质量可控，保障用药安全。
[0007]本发明的目的在于提供一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相谱法，所述方法中的谱柱选自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，所述流动相由A相和B 相组成，其中，A相选自
水、甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲醇、乙腈中的任一种，检测波长为200-400nm，进样量为1-100μl，柱温为10-45℃。
[0008]本发明的优选技术方案中，所述A相中含有浓度为0-0.5％的酸，优选A相中的酸含量为0.02-0.3％，还优选A相中的酸含量为0.05-0.1％。 [0009]本发明的优选技术方案中，所述A相pH1.0-pH6.0，优选A相pH2.0-pH5.0，更优选A 相pH2.5-pH4.0，还优选A相pH2.7-pH3.85。
[0010]本发明的优选技术方案中，所述的酸选自甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵的任一种或其组合。
[0011]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相:B相的体积比为99:1-70:30，优选为98:2-80:20，更优选为97:3-90:10。
[0012]本发明的优选技术方案中，所述流动相洗脱选自等度洗脱、梯度洗脱的任一种。[0013]本发明的优选技术方案中，所述流动相的流速为0.6-1.5ml/min，优选为0.8-1.2ml/min，更优选为0.9-1.0ml/min。
[0014]本发明的优选技术方案中，所述检测波长为210nm-290nm，优选为210-230nm。[0015]本发明
的优选技术方案中，稀释溶剂用于配置、溶解、稀释供试品溶液、对照溶液、对照品溶液的任一种，优选稀释溶剂选自水、甲醇、乙腈、流动相的任一种。
[0016]本发明的优选技术方案中，所述柱温为20-40℃，优选为20℃、25℃、30℃、35℃的任一种。
[0017]本发明的优选技术方案中，所述进样量为5-50μl，优选为10μl、15μl、20μl、30μl、40μl的任一种。
[0018]本发明的优选技术方案中，所述的谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种。
[0019]本发明的优选技术方案中，所述的谱柱选自GL-science、WondaSil、TSKgel、Agela Venusil、Inertsil ODS-P、XBridge HPLC谱柱的任一种或其组合。
[0020]本发明的优选技术方案中，所述谱柱的直径为3-5mm，谱柱的长度100-300mm，谱柱中的填料粒径为3-5μm。
[0021]本发明的优选技术方案中，所述的谱柱选自GL-science C18 WondaSil C18 Superb 4.6×250mm 5μm、Inertsil ODS-P 4.6×250mm 5μm、TOSOH TSKgel C18 4.6×250mm 5μm、Agela
Venusil C18 4.6×250mm 5μm的任一种或其组合。
[0022]本发明的优选技术方案中，供试品浓度为0.5μg/ml-3mg/ml，优选为1μg/ml-2mg/ ml，更优选为2μg/ml-1mg/ml。
[0023]本发明的优选技术方案中，氢醌中的有关物质选自对苯醌、苯胺、偏苯三酚、间苯三酚、连苯三酚、间苯二酚、邻苯二酚、苯酚、对苯二酚硫酸钾中的任一种或其组合。[0024]本发明的优选技术方案中，所述谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相中的A相：B相的体积比为80:20-95：5，其中，A相为0.03-0.50％的冰乙酸溶液，B相为甲醇，等度洗脱，检测波长为210-290nm，进样量为5-50μl，柱温为25-35℃，流速为0.6-1.5ml/min。
[0025]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为85:15-92：8，其中，A相为0.05-0.25％冰乙酸溶液，B相为甲醇，等度洗脱，检测波长为210-230nm，进样量为5-20μl，柱温为28-32℃，流速为0.8-1.2ml/min。
[0026]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为90:10，其中，A相为
0.1％冰乙酸溶液，B相为甲醇，等度洗脱，检测波长为210nm、220nm、230nm的任一种或其组合，进样量为10-15μl，柱温为30℃，流速为0.9-1ml/min。
[0027]本发明的优选技术方案中，所述谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相中的A相：B相的体积比为90:10-99：1，其中，A相为0.03-0.50％冰乙酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210-290nm，进样量为5-50μl，柱温为25-35℃，流速为0.6-1.5ml/min。
[0028]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为95:5-98：2，其中，A相为0.05-0.25％冰乙酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210-230nm，进样量为5-20μl，柱温为28-32℃，流速为0.8-1.2ml/min。
[0029]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为97:3-94:6，其中，A相为0.1％冰乙酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210nm、220nm、230nm的任一种或其组合，进样量为5-10μl，柱温为30℃，流速为0.9-1.0ml/min。
[0030]本发明的优选技术方案中，所述谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相中的A相：B相的体积比为85:15-98：2，其中，A相为0.015-0.035％磷酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210-290nm，进样量为5-50μl，柱温为25-35℃，流速为0.6-1.5ml/min。
[0031]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为90:10-97：3，其中，A相为0.020-0.030％磷酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210-230nm，进样量为5-30μl，柱温为28-32℃，流速为0.8-1.2ml/min。
[0032]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为95:5，其中，A相为0.025％的磷酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210nm、220nm、230nm的任一种或其组合，进样量为10μl-20μl，柱温为30℃，流速为0.9-1.1ml/min。
[0033]本发明的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为94:6，其中，A相为0.02％的磷酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210nm、220nm、230nm，进样量10μl-20μl，柱温为30℃，流速：0.8-1.2ml/min。
[0034]本发明的优选技术方案中，所述谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相为0.005-0.05mol/L磷酸水溶液，等度洗脱，检测波长为210-290nm，进样量5μl-50μl，柱温为25-35℃，流速：0.6-1.2ml/min。
[0035]本发明的优选技术方案中，流动相为0.01-0.03mol/L磷酸水溶液，等度洗脱，检测波长为210-230nm，进样量5μl-30μl，柱温为28-32℃，流速：0.6-1.0ml/min。
[0036]本发明的优选技术方案中，流动相为0.02mol/L磷酸水溶液，等度洗脱，检测波长选自210nm、220nm、230nm的任一种或其组合，进样量为10μl-20μl，柱温为30℃，流速：0.6-0.8ml/min。
[0037]本发明的优选技术方案中，所述谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相中的A相：B相的体积比为85:15-98：2，其中，A相
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