・45•黑龙江医药科学2021年2月第44卷第1期丁香精油对黑素细胞抗氧化特性及黑素生成的影响① 刘玉荣1，曹雅菲1，雒洋洋1，高怡1，刘景源1，刘君星2
（12!木斯大学临床&学-，黑龙江住木斯154067；2.!木斯大学基铀&学-，黑龙江住木斯150929）
摘要：目的：考察丁香精油对体外培养的黑素细胞抗氧化特性的变化及对黑素生成抑制作用，为精油在食V、化妆品等领域的应用提供理论支撑。方法：通过测定精油作用后细胞增殖活力，选择合适的药物浓度。然后用不同浓度精油作用细胞，测定细胞内T-SOD、ROS的含量、黑素含量和酪氨酸酶相对活性。结果：MTT法可知丁香精油最大无毒浓度为0.084my/mL，用于后续试验，可显著抑制黑素细胞生长，抑制率与药物浓度正相关。细胞经药物作用48h后，细胞内T-SOD增加，ROS下降，黑素含量和酪氨酸酶活性下降。结论：丁香精油具有抗氧化性及抑制黑素细胞黑素生成的功效。 关键词：丁香精油；黑素细胞；抗氧化；黑素生成
中图分类号:R285.7文献标识码:A文章编号：108-014（2021）01-0048-02
丁香（FlosCaryophyl/）系桃金娘科蕃樱桃属植物丁香（Euaecia Camo/hyllata Thunb.6的干燥花蕾，又称公丁香。实验结果表明丁香精油具有良好的抗氧化活性和抑菌4~5］。目前国内外对丁香的研究与应用主要集中在食品的抗氧化抑菌、化妆品和医药卫生方面+7］。自科学家们开始对精油的研究，精油的
各种功效逐渐显露，但是精油对皮肤美白的作用研究的时间并不久［7］。随着提取工艺的不断提升，各种提取方法之间的对比，我们可以得到含抗氧化物质更多的精油4］。植物精油作为一种天然的酪氨酸酶抑制剂，具有显著的促透皮吸收能力和酪氨酸酶抑制活性，而且具有独特的芳香气味，应用前景广阔54］。本实验基于黑素细胞评价体系探索了丁香精油对黑素细胞活力的影响、抗氧化损伤作用及对其生成黑素的抑制作用，为进一步扩大丁香精油在食品、药品和化妆品等领域的应用提供数据支撑。
1实验材料
主要试剂及仪器：丁香精油（北京华迈科生物技术有限责任公司）；人造黑素（Siymp公司）；左旋多巴（成都普瑞法科技开发有限公司）；总SOD检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；活性氧检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；BCA总蛋白定量测试盒（上海碧云天生物技术有限公司）；普通倒置显微镜（日本Olympus公司）。
2实验方法
2.1丁香精油对黑素细胞的毒性
MTT法检测细胞活性：当细胞排列较紧密、84%左右融合后制作细胞密度为1X105个/mL的细胞悬液，
每孔290piL接种于97孔细胞培养板。培养24h细胞贴壁后吸出原培养液，实验组加入浓度分别为10.45my/mL、2.09my/mL、0.918my/mL、0.084my/mL、0.21my/mL、2.023my/mL丁香精油的培养基稀释液，每种浓度的药物设置2个复孔，另设一组对照组和空白组，加入等量的不含药物的培养液。继续培养24h、48h后，取出培养板，吸出培养液，每孔加入102p L培养基和29p L的MTS, 37七条件下继续孵育1h o放入酶标仪中，在456nm 波长下测定各孔吸光值，记录数据，进行统计学分。
9.0抗氧化损伤
9.0.1细胞内sod活性测定
取适量细胞接种于2孔板，第二天细胞贴壁后加入常规培养液或上述最佳作用浓度的药物共同处理48h后，按试剂盒说明书通过多功能酶标仪测定。
9.0.0细胞内ros测定
取适量细胞接种于99孔板，第二天细胞贴壁后加入常规培养液或上述最佳作用浓度的药物共同处理48h后，按试剂盒说明书通过多功能酶标仪测定。
9.3丁香精油对黑素生成的影响
9.3.1细胞内黑素含量的测定：取对数生长期细胞，用胰酶消化，制成1.0X105个/mL，按每孔2mL接种于6孔培养板,CO c培养箱培养249o加药后继续培养48h，用PBS（pH7.4）洗2次，每孔加102pL细胞裂解液，冰上裂解34Imn畐2002r/min离心lmio，弃上清，沉淀物中加156pL含10%DMSO lmoiL的NaOH溶液畐6。C恒温水浴保温32071。酶标仪405nm测定吸光度值，以人造黑素为黑素标准品设置的标准曲线计算黑素含量。黑素抑制率=加药组黑素含量/对照组黑素含量xl02%o
9.3.0细胞内酪氨酸酶活性测定：采用多巴氧化法，取对数生长期细胞，用胰酶消化，制成1-0X125个/mL，按每孔2mL接种于6孔培养板,CO c培养箱培养24ho加药后继续培养48h，去上清液，用PBS（pH7.4）洗2次每孔加102pL细胞裂解液，冰上裂解34min,12202r/min离心12min，取上清99p L，加入2.1%L-多巴溶液10p L,37°C反应37mio，测定499nm吸光度值。酪氨酸酶相对活性
①基金项目：佳木斯大学创新创业训练项目资助项目，编号：221812222784。
作者简介：刘玉荣（198~）女，甘肃靖远人，在读本科生。
通讯作者：刘君星（172-）男，黑龙江佳木斯人，博士，副教授，硕士研究生导师。E-mail:liujuuxing0982@15 。
HEILONGJIANG MEDICIAE AND PHARMACY Feb. 2421, Vol. 40 No. 1
• 49・
=加药组0D 值/对照组0D 值x 72% o 2.2 统计学方法
用SPSS 27 2统 进
，数据
以 土 ，采用 素P < 2. 05为 具有 性。
3 结果
3.1不同浓度丁香精油对黑素细胞活力的影响
4.95ma/mL 组精油 大沉淀 底,
影响吸光度，不计入在内。与空白组(2mg/mL )比 ,2. 49ma/mL 、2. 415ma/mL >2. 934ma/mL 组的细 活 弱(P < 2. 05或P < 2.01)，且抑制率与药物 相关。由 2.284my/mL 作用48h 为后续实验的作用剂量o 见图1o 3.2 浓度丁香精油对黑素细胞内T-SOD 、
ROS 的 响
对照组相比，加药组各组 T - SOD 活力有不 的增加，当精油 >2.418my/mL 以后SOD 逐 ，差异有统计学 (P<2.25)。阳性对照组ROS ； 高，加药组 ROS 有不同
的下降，差异有统计学 (P <2.03)o 见图2
~3。
3.3不同浓度丁香精油对黑素细胞黑素含量、
酪 酶活性的影响各组黑素含 ，精油 制率比，差异有统计学 (P<2.25)，且有明显 (P<2.21)。各组酪氨酸酶活 有不 度 , 有统 学 ( P < 0005) 且有(P < 2. 21)。见图 4o
.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
浓度(mg/ml)
5 0 5 0 5 O O
1
图
《X E 0E 5
》Q O
W .H
图
不同浓度丁香精油对黑素细胞的抑制率
丁香精油对黑素 T -SOD 的影响
《
％)
S O X
%。
0.1 02 03 04 05
浓度(mg/ml)
丁香精油对黑素细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响
图4
0讨论
精油具有、止痛、抗病毒、抗癌、抗氧化
药理活性，同时具有很强的抑菌活性，是优良的天 然 腐 源77]o 以 年 精油在
保鲜，抗菌 面有很多研究。因皮肤对脂溶性物 高，所以精油有较高的透皮吸收率72]。而且传统的皮肤美 2 导致皮敏、腐蚀 ，因此从天然植物中提取功效 延
缓皮 ，已成为目前护肤产 发的 趋势,
产 费 g 71。皮 、雀斑、褐
斑和老年斑的出现，都与体 氨酸酶和过氧化氢酶的活性增高密切相关75]o 皮肤美 的美 ，
在 制新的黑素生成，加速已有黑素
的分解。皮肤美 是：(1)抑制有 素生成的相关酶。与黑素生 相关的是以下三种酶：酪氨酸酶(TYR )、5,6-二/基 竣酸氧酶(TRP _1)、多巴素异构酶(TRP-2)，因此研 究药物的美 效可以研究 对这三种
酶的抑
制 o (男抑制黑素 。(3)抑制黑素转移。(4)抑制黑素 相关基因的表达。 (5)黑素的分解与代谢72]o
文 精油的抗氧化活性并研究了丁精油对对小鼠表皮黑素 素生成的影响及酪氨酸酶活性的抑制作用，但 精油抑制黑素生成的作用机制尚未 ，希望在之后的
中 素生成密切相关的酶的mR-NA 、DNA ，使得丁香精油的皮肤美白作用
(下转第52
页/
-52•黑龙江医药科学20/年2月第44卷第]期
患牙咀嚼功能恢复时间短于对照组(P<0.05)，表明Vita/ec根管充填可缩短根管充填时间，促进充填后牙周恢复，提高效果,Vita/ec根管充填借助输送器加压充填，可缩短临床根管充填时间;Vita/ec 糊剂作为优良充填材料，可通过氢氧化钙增强根管封闭性、碱性磷酸酶活性，消灭致病菌，然后借助碘仿成分增加灭菌效果，聚硅氧烷油防止根管内糊剂吸收，整体提高Vita/ec糊剂杀菌效果、组织相容性性，缩短、咀嚼
时间，提高临床效果。应用Vita/ec根管充填后还发现，后ld、3d、7d研究组VAS评分均较对照组降低(P<0.05)，说明此充填方法可减轻痿道型CAP患者后疼痛程度，主要是Vita/ec糊剂可促进根尖周炎症快速消退，且碘仿成分抑制细菌代谢酶产生，减轻组织刺激，从而缓解患者后疼。
痿道型CAP作为慢性炎症浸润性疾病，本身由定植于感染根管内的致病菌刺激机体产生多种炎性因子，如A-10、IL-6、hs-CRP等促炎因子在痿道型CAP患者外周血中呈现高表达状态，可抑制骨钙素合成，造成牙周损伤；在此类患者牙周炎症反应中，有许多未知细胞因子参与炎症性骨质吸收，改变机体破骨细胞生成，如白介素家庭，影响机体免疫，造成骨密度下降，本研究将Vita/ec根管充填应用于痿道型CAP患者后发现，研究组后2周血清A
-10、A-6、hs-CRP水平均低于对照组(P<0.05)，说明本充填方法可减轻患者炎症反应，提高牙周组织修复能力,Vita/ec根管充填本身更具有杀菌效果与稳定性，可促进病变组织修复，从炎症反应与骨质破坏方面来看，其能明显降低A-10、A_2、hs-CRP等炎性因子浸润牙周组织，促进牙周组织改建，利于疾病转归。
综上，VPacec根管充填应用于痿道型CAP患者，可缓解患者术后疼痛，明显减轻机体炎症反应，从而进组建，缩短，提高
床疗效。
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(收稿日期：2221-01-05)
(上接第49页)
机制研究更加完善。随着精油提取工艺、成分分析及护肤品制作工艺的提升，了解更多含香组分或其它可用于化妆品领域的天然成分，调配与化妆品香水等产品中，相信丁香精油在皮肤美白等领域的应用会更加广泛。
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(收稿日期：2026-1-27)
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