Harris苏木素染液的新配制

Harris苏木染液的新配制
苏木素染液,是病理实验室常规的细胞核染剂。现用的苏木素染液配方很多,但仍以Harris配方最经典,最常用。而且,经过改良,解决了该液实际工作中的不尽如意之处。
1.材料与方法
1.1 按500mlHarris苏木素液用量计算,取:苏木素2.5g、无水乙醇25ml、硫酸铝钾22g、蒸馏水500ml、1.25g、柠檬酸2g、摄氏温度计1支。
1.2 将2.5g苏木素放入25ml无水乙醇中,搅拌至完全溶解。
1.3 将22g硫酸铝钾加入500ml蒸馏水内,加热溶解,然后加入苏木素无水乙醇液,使溶液尽快沸腾后,移离开火焰。
1.4 搅拌溶液,待温度下降至91℃左右时,将缓缓加入。此时,烧瓶内液体变成紫红,但不会沸腾溅出。继续搅拌至看不到的黄颜为止,迅速将烧瓶放置于冷水中,用纱布置于瓶口处盖之。注意,瓶口不能用橡皮塞,否则会有氢氧化铝凝胶形成。
1.5 次日晨,将配制的苏木素液进行过滤。加入2g柠檬酸搅匀,此时的 Harris液为绛红。
2.结果
配制好的染液即可使用。切片染1′—3′,涂片30″—1′,然后入水、分化、蓝化,胞核呈鲜蓝。
3.讨论
3.1 Harris苏木素染液,有很多优点,所用试剂较少,操作步骤简单。但在实际运用中也有些缺点,如染周期短,有沉淀现象和氧化膜等。我们根据文献报道反复摸索,对Harris苏木素染液进行了一些调整。
3.2 氧化剂添加要适时。Harris苏木素染周期短,我们发现与氧化剂的添加时间有关。Harris苏木素原配方是在近100℃时加入后,继续用小火加温。而实际工作中,根据观察配制过程,当苏木素染液温度在91℃左右时,添加,即能使完全分解于苏木素液中,又不会很快完全氧化,使染液一直处于染力最强的三氧化苏木素状态,达到Harris苏木素染液长期最佳使用效果。
3.3 媒染剂剂量减少。苏木红要对细胞具有强的亲和力,必须加入媒染剂——硫酸铝钾。从苏木精分子的结构式来看不可能结合很多的铝离子,故Harris苏木素原配方常用1g苏木素配20g硫酸铝钾为媒染液,在实际应用中,当冷却和久置后有大量沉淀生成,甚至有明矾结晶析出。以上不良现象主要是因为媒染剂用量过大。我们根据文献报道,用1g苏木素配8.8g硫酸铝钾,不但节约试剂,而且减轻了媒染剂副作用的影响。
3.4 促染剂用柠檬酸代替冰醋酸。Harris苏木素原配方用冰醋酸作促染剂有效期短,柠檬酸对胞核选择性着能力强,背景清晰。
3.5 经过以上几个步骤的调整,使Harris染液存在的不良现象大为改观,取得很好的效果。

本文发布于:2024-09-22 15:48:04,感谢您对本站的认可!

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