崔逸;蒋彩云;张翔;何海艳;陶晓琳;王瑞
【摘 要】The optimum extract conditions of the main antioxidant in black wolfberry were studied through sin gle factor test and orthogonal test. The results showed that the primary and secondary factors of extraction effect were as follows: extraction time < extraction temperature < concentration of solvent < the ratio for material and liquid.The best extract conditions with ultrasonic extraction were identified that the ratio of solvent to black wolfberry,temperature, extract solvent, and time were 1:25(g/mL), 50 ℃, 60 % ethanol and 25 min respectively. Theantioxidant activity in black wolfberry was evaluated using vitamin C as the standard substance. In addition, thecontent of anthocyanin in black wolfberry was determined by pH differential method.%通过单因素试验和正交试验,确定黑枸杞中抗氧化物质的最佳提取工艺条件.结果表明影响提取效果的主次因素为:提取时间<提取温度<提取剂<料液比;最佳提取工艺条件为:超声提取、料液比1:25(g/mL)、温度50℃、溶剂60%乙醇、时间25 min.以维生素C作为标准物质,对黑枸杞的总抗氧化性进行评价.采用pH示差法测定黑枸杞中花青素含量.
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2017(038)016
【总页数】5页(P28-32)
【关键词】黑枸杞;花青素;抗氧化;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH);pH示差法
【作 者】水溶性抗氧化剂崔逸;蒋彩云;张翔;何海艳;陶晓琳;王瑞
【作者单位】江苏经贸职业技术学院 工程技术系,江苏省食品安全工程技术研发中心,江苏 南京 210007;江苏经贸职业技术学院 工程技术系,江苏省食品安全工程技术研发中心,江苏 南京 210007;南京视果黑枸杞开发有限公司,江苏 南京 211135;江苏经贸职业技术学院 工程技术系,江苏省食品安全工程技术研发中心,江苏 南京 210007;江苏经贸职业技术学院 工程技术系,江苏省食品安全工程技术研发中心,江苏 南京 210007;江苏经贸职业技术学院 工程技术系,江苏省食品安全工程技术研发中心,江苏 南京 210007 【正文语种】中 文
黑枸杞是枸杞属科[1]，多年生灌木，具棘刺，浆果呈球形，皮薄，成熟后果皮呈紫黑，紫的果皮含有丰富的花青素，能有效清除体内的自由基，由于其长寿的作用而受到人们的追捧，制药和保健价值明显高于红枸杞[2]。花青素，是一类水溶性的类黄酮化合物[3]，在自然界中普遍存在，超过300种。黑枸杞中所含的花青素由16种生物类黄酮组成，不仅是当前大多数植物花青素中功能最优良的，而且比多数植物花青素有更优良的生理活性。花青素从根本上讲是一类强有力的抗氧化剂，它能够清除体内某种自由基对人体的作用[4-6]。
以黑枸杞为原料，具有抗氧化功能的维生素C作为标准参照，对黑枸杞中抗氧化活性物质进行提取，并对黑枸杞中的花青素含量进行测定。
1.1 原料与试剂
黑枸杞：南京视果黑枸杞开发有限公司；1，3-丁二醇、丙酮、醋酸钠（分析纯）：上海凌峰化学试剂有限公司；1，1-二苯基苦基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、无水乙醇、维生素C（分析纯）：国药基团化学试剂有限公司；实验用水均为去离子水。
1.2 试验仪器
超声波清洗器（KQ-500E）：昆山市超声仪器有限公司；电子分析天平（FA2104N）：上海菁华科技仪器有限公司；万能高速粉碎机（FW100）、电热恒温干燥箱（DGF 30/23-mA）：天津市泰斯特仪器有限公司；循环水式多用真空泵（SHB-Ⅲ）：郑州长城科工贸有限公司；可见分光光度计（UV-6300）：上海美谱达仪器有限公司。
1.3 试验方法
1.3.1 配制DPPH·标准溶液及清除率的计算
以无水乙醇作为溶剂，配制浓度为0.4 mmol/L的DPPH·标准溶液，置于暗处备用。
反应溶液（A反应液）：提取液2 mL和DPPH·标准溶液2 mL混合；空样溶液（A空样液）：提取溶剂2 mL和 DPPH·标准溶液2 mL混合；空白溶液（A空白）：2 mL无水乙醇和2 mL提取液混合。将上述溶液置于避光处反应30 min后，于517 nm波长处测定吸光度值。按（1）计算清除率。
1.3.2 维生素C标准溶液的配制及标准曲线的制作
以纯净水作为溶剂，配制浓度为0.10 mg/mL的维生素C标准溶液。采用逐级稀释的方法，得到浓度梯度分别为0.008、0.010、0.012、0.014、0.016、0.018、0.020 mg/mL的维生素C标准溶液。
参照1.3.1中的操作方法，将提取液换成不同浓度的维生素C标准溶液，于517 nm波长下测定相应的吸光度值，得出对应的DPPH·清除率，制作标准曲线。
1.3.3 总抗氧化能力的测定
根据得到的最佳工艺条件处理黑枸杞粉，取提取液1 mL稀释到100 mL容量瓶中，测出其DPPH·溶液的清除率，再根据标准曲线计算出每克黑枸杞样品的维生素C当量。
1.3.4 pH示差法测定黑枸杞中花青素含量
取黑枸杞提取液28.8 mL，稀释至1 000 mL后，准确量取20 mL（两份），分别用pH=1、pH=4.5的缓冲溶液定容至100 mL，在波长517 nm处测定其吸光值，平行测定6次。根据T Fuleki的研究[7]结合比尔定律公式A=ebc（A：吸光度，e：摩尔吸收系数，c：吸光物质的浓度，b：吸收层厚度），得到黑枸杞花青素含量的计算公式如下：
式中：X为花青素含量；ΔT为提取液在pH=1和pH=4.5缓冲溶液中的吸光度之差；F为稀释度；V为稀释的体积，mL；M1为矢车菊素-3-葡萄糖苷的相对分子质量值为449.2；M2为样品的质量，g；e为矢车菊素-3-葡萄糖苷的消光系数值为26 900[8]。
DPPH·是一种稳定的脂性自由基，其乙醇溶液呈紫，在517 nm处有明显吸收峰。在有自由基清除剂存在时，会导致吸收峰减弱，从而使其褪[9-10]。
通过可见分光光度计法，检测DPPH·标准溶液与提取液反应后的吸光度值的变化，测定样品清除自由基的能力。建立提取液清除率的评价体系，以该标准体系为判断依据，进行单因素试验和正交试验，确定最佳提取工艺。
2.1 单因素试验
2.1.1 提取溶剂对黑枸杞中抗氧化活性成分提取效果的影响
称取1.0 g黑枸杞粉末于25 mL溶剂中，溶剂分别采用纯水、无水乙醇、70%乙醇、1，3-丁二醇、丙酮，在室温下静置30 min，抽滤得到样品的提取液。提取剂对提取效果影响见图1。
由图1可知，用70%乙醇提取时，得到的提取物抗氧化能力最强。
在考虑到节约的前提下，又分别采用50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、无水乙醇作为溶剂，在室温下浸提30 min，抽滤得到样品的提取液。乙醇浓度对提取效果影响见图2。
由图2可知，70%乙醇提取效果最佳。
2.1.2 提取方式对黑枸杞中抗氧化活性成分提取效果的影响
称取1.0 g黑枸杞粉末于25 mL70%乙醇中，提取温度为40℃，提取方式分别为：超声、振荡、水浴、搅拌、静置，提取时间为30 min，抽滤得到样品的提取液。提取方式对提取效果影响见图3。
由图3可知，超声波辅助方式（超声频率40 kHz）提取效果最好。这是由于超声波辅助是利用超声波的热效应、空化作用、机械作用使得胞外溶剂更容易进入细胞，加速细胞壁的破碎，从而促进胞内物质溶出，提高提取效率。
2.1.3 提取时间对黑枸杞中抗氧化活性成分提取效果的影响
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