沙吉达，施友玲，余丽娘1(福建省药品检验所，福州350001; 1福建中医学院)
摘要: 建立注射用多索茶碱有关物质和含量的H PLC测定方法。采用依利特H YPERSIL C18谱柱。流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液pH=5 8(18 82)，流速1 0ml m in-1，检测波长为273nm。多索茶碱在0 50 g~3 50 g范围内与峰面积成良好的线性关系,r=0 9999。平均回收率为100 7%(RS D为1 1%)。本法简便、快速，结果准确、可靠、重现性好。
关键词: 高效液相谱法；多索茶碱；有关物质；含量
中图分类号:R927 2 文献标识码:A 文章编号:1002-7777(2006)10-0616-03
HPLC Analysis of Doxofylline for Injection and Its Related Substances
Sha Jida,Shi Youling,and Yu liniang1(Fujian Institute for Drug Contr ol,Fuzhou350001; 1Fujian Co llege of T raditional Chinese M edicine)
ABSTRAC T A determination method o f dox ofy lline for injection and its related substances w as established.A H y persil C18column w as used,and the mobile phase w as acetonitril and pho sphate b
uffer (pH5 8)(18 82).T he detective w avelength w as273nm.T he calibr ation rang e w as0 50~3 50 g(r= 0 9999),the aver ag e recov er y w as100 7%(R SD=1 1%).The m ethod is simple,rapid and accurate. KEY WORDS dox ofylline fo r injection;related substances;H PLC
多索茶碱是一种支气管扩张剂，可直接作用于支气管，松弛支气管平滑肌，通过抑制平滑肌细胞内的磷酸二酯酶从而达到抑制哮喘作用。本品是多索茶碱的无菌冻干品，是安全有效地慢性阻塞性肺病和支气管哮喘的药物。本文参照多索茶碱注射液国家标准[1]，多索茶原料国家标准[2]建立了注射用多索茶碱有关物质和含量测定H PLC法[3]。
1 仪器与试药
Agilent-1100型高效液相谱仪(四元泵，自动进样器，二极管矩阵检测器);Ver0801 chemistatio n谱工作站(Ag ilent公司) MILLIPOKE纯水器。
注射用多索茶碱样品与对照品[对照品以滴定法测定含量为99 7%(无水物计)，福建省闽东力捷迅药业有限公司]；乙腈为谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2 1 谱条件与系统适用性试验
谱柱：依利特H YPERSIL C18(4 6! 300m m,5 m)。以乙腈-磷酸盐缓冲液pH=5 8(18 82)为流动相。流速1 0ml m in-1，检测波长为273nm，进样量20 l。样品溶液测定谱图中，理论板数按多索茶碱峰计算为6774，多索茶碱与相邻的杂质峰分离度为2 34。
2 2 有关物质测定
2 2 1 耐用性试验
另换一根谱柱Cartridge250-4RP-18(5 m)进行实验，杂质峰与主峰分离，柱效良好，结果表明该谱系统在两根谱柱上表现无明显差别。
2 2 2 专属性实验
取本品辅料适量，加流动相至100ml，按上述谱条件测定，结果表明辅料对主峰无干扰。
将供试品分别置强光照射(4500lx,10d)、高温(90∀,24h)、高湿条件下进行加速破坏。精密称取本品适量，加流动相稀释成每1m l中含多索茶碱0 5mg作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中含多索茶碱5 g作为对照溶液。按上述谱条件测定，结果表明各杂质峰都能与主峰分开，且无新杂质产生。
2 2
3 定量限
乳酸环丙沙星氯化钠精密量取有关物质项下的对照溶液1ml 置10m l 量瓶中，用流动相稀释至刻度，注入液相谱仪测定，记录图谱，使得按上述谱条件测定，仪器信噪比大于10 1时，多索茶碱的定量限为0 5 g 。
2 2 4 测定方法
精密量取本品加流动相稀释成每1ml 中含多索茶碱0 5mg，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释成每1m l 中含多索茶碱5 g 作为对照溶液，照含量测定项下方法，取对照液20 l 注入液相谱仪，调节测定灵敏度，使主成分谱峰的峰高为满量程的10%以上：分别精密量取对照溶液和供试品溶液20 l 注入液相谱仪记录谱图至主成分峰保留时间的4倍，记录谱图，见图1、表1
。
图1 多索茶碱有关物质H P LC 谱图
a 空白对照;
b 样品溶液;
c 对照品溶液
表1 注射用多索茶碱有关物质测定结果
批号041222041225041228杂质含量(%)
0 28
0 26
0 28
2 3 含量测定
2 3 1 样品溶液的制备
精密称取装量差异项下的内容物适量(约相当于多索茶碱100mg)，置100ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml 置50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。2 3 2 对照品溶液的制备
精密称取多索茶碱对照品适量，用流动相溶解并制成每1m l 约含0 1mg 的溶液。2 3 3 线性关系考察
精密称取多索茶碱对照品100 25mg 置100ml 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml 置50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。以5、10、15、20、25、30、35 l 进样。按上述选定的条件测定。以对照品浓度C( g m l -1
)为横坐标，以峰面积A 为纵坐标，进行线性回归，回
归方程为:A=2017C-4 0576,r=0 9999。说明注射用多索茶碱在0 50 g ~3 50 g 范围内与峰面积成良好的线性关系。2 3 4 重复性试验
取同批号041222样品6份
[3]
，按含量测定方
法测定，结果平均含量99 7%。RSD 为0 7%。2 3 5 稳定性试验
精密称取批号为041222的样品适量，用流动相溶解并制成每1m l 约含多索茶碱0 1mg 的溶液，按上述选定的谱条件，分别于0、1、2、4、6、8h 测定[3]，以平均峰面积计RSD 为0 19%。说明样品溶液在8小时内稳定。
2 3 6 回收率试验
分别精密称取多索茶碱约20m g 、25mg 、30mg 置50ml 量瓶中，并按处方比例加入空白辅料
[4]
，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量
取5ml 置25m l 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述谱条件进样20 l，记录谱图，计算，结果见表2。
表2 多索茶碱回收率试验
加入量(mg)
测得量(m g)回收率(%)平均回收率
(%)
RS D (%)
20 2720 40100 6420 4720 62100 7320 0120 21100 9824 9224 94101 0025 9626 39101 66100 7
1 1
25 06
24 6398 2831 3931 88101 5631 0731 60101 7130 20
30 24
100 13
2 3 7 样品含量测定
精密量取2 3 1项的样品溶液和2 3 2项的对照品溶液各20 l 注入液相谱仪，按上述选定的谱条件测定，按外标法以峰面积计算，结果见图2，表3
。
图2 多索茶碱H PL C 谱图
a 对照品;
b 样品;
c 空白,1 多索茶碱;2 对氨基水杨酸钠
表3 含量测定结果
批号含量
(%)
平均含量
(%)
041222100 00,99 4299 7
041225100 32,100 40100 4
041228101 84,102 05101 9
3 讨论
由专属性实验可知各杂质峰均可与主峰分开，且各分解物与周围杂质的分离度良好。主峰保留时间的4倍之后无杂质峰。辅料空白试验证明辅料不影响本品的有关物质检查，因而本谱条件可用于注射用多索茶碱有关物质的检查。
多索茶碱原料标准WS#497-(X-438)-99中已制定有关物质的检查方法(薄层谱法)。多索茶碱注射液未
制定有关物质的检查，本品为多索茶碱的注射用制剂，需要严格控制本品的有关物质，考虑到高效液相谱法较薄层谱法精确，稳定，可准确定量的特点，故采用高效液相法检测本品的有关物质。
参考文献:
[1]国家药品监督管理局国家药品标准[S] W SI-(X-130)
-2003Z
[2]国家药品监督管理局国家药品标准[S] W S-497(X-
438)-99
[3]中国药典[S]，二部,2000：附录191,32,197
[4]安富荣，王平全 反相高效液相谱法同时测定气喘片中4
组分的含量[J] 中国医院药学杂志,2001,21(6):336
动态浊度法(KT A)检测乳酸环丙沙星氯化钠注射液中的细菌内毒素
巴力吉，韩斯琴(内蒙古自治区通辽市药品检验所,028000)
中图分类号:R927 12 文献标识码:A 文章编号:1002-7777(2006)10-0618-03
乳酸环丙沙星氯化钠注射液属喹诺酮类抗菌药。用于敏感菌引起的泌尿生殖系统感染，呼吸道感染，胃肠道感染等。乳酸环丙沙星氯化钠注射液的热原∃中国药典%2005年版二部规定仍为家兔法，家兔法操作不便，费时费力，不经济，为了克服上述缺点，笔者采用了动态浊度法检测乳酸环丙沙星氯化钠注射液中的细菌内毒素。动态浊度法需在特定的仪器中(37∀&1∀)检测反应混合物的浊度达到某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。本法操作简便，灵敏度高，重现性好，实用性强。现将检测结果报告如下:
1 试验材料及仪器
细菌内毒素检查用水[批号:050404，规格: 5ml(Amp)-1，湛江博康海洋生物有限公司]；动态浊度法鲎试剂[批号:0503011, =0 03EU m l-1，规格:0 6ml(Am p)-1，湛江博康海洋生物有限公司]；细菌内毒素国家标准品[批号: 981，规格:9000EU(Amp)-1，中国药品生物制品检定所]；乳酸环丙沙星注射液(批号: 041125-02、050601-03、050717-06，规格: 200mg100ml-1，黑龙江科伦制药有限公司); BET-32M细菌内毒素检测仪(天津大学无线电厂);U V-240型紫外分光光计度(日本岛津); M ETT LER TOLEDO型pH计(瑞士);ZH-2型自动旋涡混合器(天津药典标准仪器厂)；试管(10ml)、反应试管(10!75mm)、吸头(均经250∀烘烤2小时以上除热原)。
2 方法与结果
2 1 供试品细菌内毒素限制(L)和最大有效稀释倍数(M VD)的确定
供试品的细菌内毒素限制L=K M-1,M为人每公斤体重每小时的最大供试品剂量3 3mg (kg h)-1;K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量5EU(kg h)-1;L=1 5EU
m g-1；最大有效稀释倍数MVD=cL -1，动态浊度法试验中 为标准曲线上最低的内毒素浓度，本实验中 =0 0312EU m l-1,c为供试品溶液的
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