Tris盐酸缓冲液用于蛋白质SDS-PAGE电泳

Tris盐酸缓冲液⽤于蛋⽩质SDS-PAGE电泳
Tris盐酸即三羟甲基甲胺-盐酸盐Tris-HCl缓冲液,适⽤于⼤多数蛋⽩质、核酸相关的研究实验,通常⽤它作为缓冲液应⽤在蛋⽩质SDS-PAGE电泳实验中,电泳效果好分辨率⾼。
由Tris组成的⽣物缓冲液,常配成pH值为6.8,7.4,8.0,8.8。其pH值随温度变化相对较⼤。⼀般来说,温度每升⾼⼀度,PH值下降0.03。1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是SDS-PAGE最常⽤的试剂。Tris可溶解核酸和蛋⽩质。
Tris盐酸缓冲液原料
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE是相当普遍的聚丙烯酰胺凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为⽀持介质的电泳技术,适合蛋⽩质以及寡核苷酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶呈微观⽹状结构,具有分⼦筛效应,分为⾮变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)两种形式。
在蛋⽩质SDS-PAGE不连续电泳实验中,制胶缓冲液使⽤的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH值6.7,分离胶pH为8.9;⽽电泳缓冲液使⽤的Tris-⽢氨酸缓冲系统。在浓缩电泳凝胶中,其pH值呈弱酸性,因此⽢氨酸只有很少量的会解离,其在电场的作⽤下,泳动效率低;⽽氯离⼦却很⾼,两者之间形成导电性较低的区带,蛋⽩分⼦就介于⼆者之间泳动。由于导电性与电场强度成反⽐,这⼀区带便形成了较⾼的电压梯度,压着蛋⽩质分⼦聚集到⼀起,浓缩为⼀狭窄的区带。
当样品进⼊分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,⽢氨酸⼤量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离⼦之后,同时由于分离胶孔径的缩⼩,在电场的作⽤下,蛋⽩分⼦根据其固有的带电性和分⼦⼤⼩进⾏分离。
所以,pH对整个反应体系的影响是⾄关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应⾸要考虑该因素,当然其他的因素也可以从多⽅⾯考虑。
Tris盐酸由Tris与盐酸混合制得,像氨基丁三醇、缓⾎酸胺、2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙⼆醇等都是指的Tris,是德晟⽣产的重要原料,还可以⽤于其它各种缓冲液体系。

本文发布于:2024-09-21 19:37:33,感谢您对本站的认可!

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