(完整版)SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方

SDS-PAGE
1、SDS-PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳
2、Acr:丙烯酰胺;配胶时用30%Acr(质量比Acr:Bis=29:1)
3、Bis:甲叉双丙烯酰胺
4、DDW:超轻水
5、SDS:十二烷基硫酸/磺酸钠,阴离子去污剂(配胶时用10%)
6、APS:过硫酸铵NH4S2O4配胶时用10%
7、TEMED:四甲基乙二胺,促凝剂
8、Tris-Hcl:3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液,配胶时(分离胶ph=8.8,浓缩胶ph=6.8)
9、DTT:二硫苏糖醇,DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的
半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
10、IMA:碘乙酰胺,碘代乙酰胺用于有机合成,在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷
基化试剂,用于多肽测序以及酶抑制剂等,蛋白组学级试剂。CH>2ICONH>2,是和碘乙酸一样,可通过下列反应不可逆地抑制SH酶类的物质。
1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的
分离胶(即下层胶):
注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
1)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶):
TBST 缓冲液
每2L体积中含:
1)抗体去除液
每50mL抗体去除液中含:
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS-PAGE电泳的基本原理:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,每克多肽可与1.4g去污剂结合。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已
知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

本文发布于:2024-09-21 13:29:57,感谢您对本站的认可!

本文链接:https://www.17tex.com/tex/1/372435.html

版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系,我们将在24小时内删除。

标签:分子量   蛋白质   迁移率   配胶
留言与评论(共有 0 条评论)
   
验证码:
Copyright ©2019-2024 Comsenz Inc.Powered by © 易纺专利技术学习网 豫ICP备2022007602号 豫公网安备41160202000603 站长QQ:729038198 关于我们 投诉建议