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得出现“假阳性”的结果。一旦实验室出现“假阳性”“假阴性”“与参考值范围不符”等情况时，实验室的负责人员应该针对整个实验室进行溯源。从人员、环境、设备、培养基和试剂等各个方面进行详细地追溯和分析，从而纠正不利因素，确保检验结果的科学性和准确性。
我院于2020年5月底参加了由中国食品药品检定研究院组织的“NIFDC-PT-248 食品中单增李斯特氏菌检出能力验证”试验，按照后期返回的结果来看，检验结果为“满意”，现将具体试验情况汇报如下。 1.材料与方法
实验室共收到2份单增李斯特氏菌样品，样品为白球状、真空包装于西林瓶，样品编号分别为FC02220011、FC02220030；2袋奶粉样品，每袋重量为25g ，编码与菌球编码对应。
1.2仪器与材料
A C 2-6S 1型E S C O 生物安全柜（新加坡艺思高公司）；GR-85致微高压灭菌器（厦门致微公司）；MJ-250-Ⅲ型霉菌培养箱（上海跃进）；HH.B11.600BY 型恒温培养箱（上海跃进）；VITEK2 Compact 30型全自动微生物鉴定及药敏分析系统（法国梅里
引言
单核细胞增生李斯特氏菌是普遍存在于自然环境中的革兰氏阳性、嗜冷、兼性厌氧细菌。同时，也是一种食源性的人畜共患病的病原菌，欧美国家曾多次暴发由于食用了受单增李斯特氏菌污染的肉制品、奶制品、蔬菜及水果等而引发的严重的食物中毒事件。在《GB 29921-2021 食品安全国家标准 食品中致病菌限量》中，对乳制品、肉制品（包括熟肉制品和即食生肉制品）、水产制品、即食果蔬制品、冷冻饮品均有五份样品中均不得检出单增李斯特氏菌（n=5，c=0，m=0）的规定；同样，在2022年3月7日实施的《GB 31607-2021 食品安全国家标准 散装即食食品中致病菌限量》中“部分或未经热处理散装即食食品”：单核细胞增生李斯特氏菌限量为0/25g （mL ）。由此类标准可见，国家对于食品中“单核细胞增生李斯特氏菌”的管理是十分严格的。
目前，国内单核增生李斯特氏菌的检验方法主要有：分子生物学检测技术（结合等温扩增技术、结合聚合酶链式反应技术）、免疫学检测技术、生物传感器检测技术、光谱学检测技术、其它检测技术（除了基于核酸检测、特有蛋白检测之外，还可以与谱、核磁等多项技术技术相结合对单增李斯特氏菌进行检测）。《GB 划线引小球
4789. 30-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌》与旧版标准相比较，主要增加了“第二法 单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法”和“第三法 单核细胞增生李斯特氏菌MPN 计数法”。目前，对单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法是比较成熟的。而且，随着检验检测技术日新月异的发展，使得较短时间内完成精准检测成为可能。
另外，对于实验室而言，质量控制具有十分重要的意义。质量控制的工作包括很多方面。比如，实验室内部控制和实验室间控制等等。实验室内部控制工作可通过多种工作方式来展开。比如，内部质量监督以及通过购买质控样品开展相关检验检测工作等等。但是，由于其实施的环境和主观等多种因素受限，仅有内部控制是远远达不到质量控制的要求。这时候，实验室可以通过多种方式来达到实验室间控制的目的。比如，参加外部能力验证就是一种十分常见且有效的形式。尤其针对微生物实验室，此项工作十分重要。微生物实验室可以通过参加能力验证、盲样测定以及比对试验等等。一方面，可以较大程度针对新入职人员提高其检验检测能力；另一方面，在一定程度上也反应了该实验室对“阳性样品”的检出能力。即保证“阳性”不漏检、阴性不
文 白雯静*1 王艳炜1 王海峰2 1. 兰州市食品药品检验检测研究院；2.甘肃省陇神戎发医药股份有限公司
解读
INTERPRETATION
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解读INTERPRETATION
埃）；mini VIDAS（全自动荧光免疫分析仪）（法国梅里埃）。
李斯特氏菌显培养基（批号：200309）、李氏增菌肉汤（批号：190401）、PALCAM培养基基础（批号：180425）均购于北京陆桥股份有限公司，所使用培养基均按照《GB 4789.28-2013 食品安全国家标准食品微生物检验培养基和试剂的质量要求》以及内部质控的要求进行验收与质控，并符合相关要求。VIDAS 单增李斯特试剂盒（法国梅里埃）；VITEK2革兰氏阴性细菌鉴定卡（20卡）（法国梅里埃）。
李斯特氏菌Listeria monocytogenes ［ATCC 19115］购买于美国菌种保藏中心，并定期采用国标的方法进行菌种鉴定和确认。
1.3试验方法
在生物安全柜内分别开启西林瓶，将225 mL LB1增菌液加入到无菌均质袋中，并将西林瓶内小球加入
到LB1增菌液中，充分溶解。然后将与西林瓶相同编码的奶粉样品加入到上述LB1增菌液中，充分均质混匀。依此方法，分别对2件样品进行平行处理。上述稀释液，于30℃培养24h后，移取0.1mL，转种于10mL LB2增菌液中，于30℃培养24h。取LB2二次增菌液划线接种于PALCAM琼脂平板和李斯特氏菌显培养基上，于36℃培养48h后，观察各个平板上生长的菌落；如有可疑菌落（典型菌落在PALCAM 琼脂平板上为小的圆形灰绿菌落，周围有棕黑水解圈，有些菌落有黑凹陷），自选择性琼脂平板上分别挑取3-5个典型或可疑菌落，进行初筛试验和鉴定试验。取LB1增菌液按
照miniVIDAS（全自动荧光免疫分析
仪）仪器操作规程和试剂盒说明书进
行相关试验。
2.结果与分析
2.1mini VIDAS（全自动荧光免疫
分析仪）快筛结果
按照V I D A S仪器要求：质控1
（control 1）的示值须在0.71-1.07的范围
内，质控2（Control 2）的示值须≤0.04；
标准（standard）的示值须在2201-4801的
范围内，方可进行后续样品试验，根据
表1的试验数值，满足仪器要求，故可
进行下部分样品的试验。
取LB1增菌液按照mini VIDAS仪
器操作规程和试剂盒说明书进行相
关试验。结果如表2所示，根据表2结
果，初步可判断样品FC02220030为阳
性（检出单核增生李斯特氏菌），样
品FC02220011为阴性（未检出单核增
生李斯特氏菌）。
2.2 PALCAM培养基和李斯特显
培养基培养结果
根据PALCAM培养结果和李斯
特显培养基培养结果来看，进一步
确定样品FC02220030为阳性，样品
FC02220011为阴性，结果如表3所示。
表1 VIDAS质控结果
编号示值
Control 10.85
Control 20.00
Standard4181
表2 VIDAS试验结果
样品编号示值
FC022200110.00
FC022200300.92
ATCC 19115（阳性对照）0.87
阴性对照0.00
表3 PALCAM培养基和李斯特显培养基培养结果
样品编号PALCAM培养结果李斯特显培养基培养结果FC02220011无可疑菌落生长无可疑菌落生长
FC02220030小的圆形灰绿菌落，周围有棕黑
水解圈，部分菌落有黑凹陷。
蓝绿菌落，周围有一不透
明白晕圈。ATCC 19115
（阳性对照）
小的圆形灰绿菌落，周围有棕黑
水解圈，部分菌落有黑凹陷。
蓝绿菌落，周围有一不透
明白晕圈。
阴性对照无菌落生长无菌落生长Copyright©博看网. All Rights Reserved.
76 I FOOD INDUSTRY I
FOOD INDUSTRY I INTERPRETA TION
2.3初筛/鉴定试验结果
参照《GB 4789. 30-2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌》，对样品FC02220030进行初筛（接种木糖、鼠李糖发酵管）和鉴定试验（包括染镜检、动力试验、过氧化氢酶试验等生化鉴定项目），确定FC02220030为阳性，具体结果如表4所示。
单增李斯特氏菌（ATCC 19115）为阳性对照，其初筛和鉴定试验结果如表5所示。
2.4 VITEK2（全自动微生物鉴定
及药敏分析系统）鉴定结果
表6为FC02220030 VITEK2鉴定
结果：Listeria monocytogenes（99%概
率），其置信度为极好的鉴定。
3.讨论
通过对不同检验方法的分析，
mini VIDAS在第一步增菌培养（即
LB 1增菌液培养24h）后，便可进行试
验，与常规检验方法结果一致，而且
所需检验周期短，可在较短时间内得
到结果。因此，该方法可用于大批量
检品致病菌的快速筛查。另外，在李
斯特氏菌显培养基的制备过程中，
应注意要将添加剂进行充分混匀，混
匀后在加入培养基（培养基在高压灭
菌121℃、15min后冷却至50℃备用）
时，应注意边混匀边加入，以保证添加
剂均匀地混合在培养基中，从而确保显
培养基质量的稳定性。另外，在配制
操作时应注意无菌操作，否则容易导致
没有白晕圈或白晕圈不明显，从而
影响判定结果，造成假阴性的出现。另
外，为确保试验结果，在配置显培养
基时，可以选择多个品牌的培养基进行
对照和综合判断。最后，在试验的同时
应注重阳性对照与阴性对照的使用，从
而确保结果的可靠性与可追溯性。
在日常检验检测工作中，实验室
应该制定详细的年度质量控制计划，
通过能力验证、人员比对、质控样测
定等多种方式，确保整个实验室正
常、稳定地运行。另外，在涉及微生
物致病菌的检验时，应采用多种仪器
设备对结果进行比对和印证，进而确
保实验结果的准确和可靠性。
基金项目：
甘肃省陇原青年创新创业人才项目—
甘肃省大宗药材微生物污染菌数据库
的建立与防治技术研究（甘组通字
〔2022〕77号）；甘肃省药品产业技术
扶持项目（2019KF006）。
*通信作者：
白雯静（1987-），女，甘肃兰州人，
主管药师；主要从事食品、药品微生
物检验。
表4 FC02220030初筛/鉴定试验结果初筛鉴定
木糖鼠
李
糖
染镜检
动力
试验
过氧化氢酶
试验
MR VP
葡
萄
糖
麦
芽
糖
鼠
李
糖
木
糖
甘
露
醇
七
叶
苷
—
+革兰氏阳
性短杆菌
+++++++——+表5 ATCC 19115（阳性对照）初筛/鉴定试验结果
初筛鉴定
木糖鼠
李
糖
染镜检
动力
试验
过氧化氢酶
试验
MR VP
葡
萄
糖
麦
芽
糖
鼠
李
糖
木
糖
甘
露
醇
七
叶
苷
—+革兰氏阳
性短杆菌
+++++++——+
表6 FC02220030 VITEK2鉴定结果
生化试验详情
2AMY+4PIPLC+5dXYL-8ADH1-9BGAL-11AGLU+
13APPA-14CDEX+15AspA-16BGAR-17AMAN+19PHOS-
20LeuA-23ProA-24BGURr-25AGAL-26PyrA-27BGUR-
28AlaA-29TyrA+30dSOR-31URE-32POLYB+37dGAL-
38dRIB-39ILATk-42LAC+44NAG+45dMAL+46BACI+
47NOVO+50NC6.5+52dMAN-53dMNE+54MBdG+56PUL-
57dRAF-58O129R+59SAL+60SAC-62dTRE+63ADH2s-
64OPTO+
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