微生物检验工作的基本要求
试验室技术操作要求
一、无菌操作要求
食品微生物试验室工作人员，必需有严格的无菌观念，很多试验要求在无菌条件下进行，主要缘由：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员平安，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。
2.进行接种食品样品时，必需穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦洁净。
4.进行接种所用的吸管，平皿及培育基等必需经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.接种样品、转种细菌必需在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求
1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随便打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与试验无关的物品。
3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采纳室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照耀时间不少于30min，使用紫外灯，应留意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以削减紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随便出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求
微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培育基、被污染和接种的培育物等，必需经灭菌后方能使用。
1．灭菌前预备
①全部需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
②装培育基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
2．装放
①干热灭菌器：装放物品不行过挤，且不能接触箱的四壁。
②大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。
3．设备检查
①检查门的开关是否敏捷，橡皮圈有无损坏，是否平整。
②压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观看是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。
③对有自动电子程序掌握装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。
4．灭菌处理
①干热灭菌法：此法适应于在干热忱况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。
工作台面 a.器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。
b.灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。
c.灭菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排解灭菌器中的冷空气，温度升至160℃调整指示灯，维持1.5 2h。
d.灭菌完毕后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。
②手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：
a.手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）。
b.手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀裂开的灭菌器不得使用）。
c.盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）。
d.关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关状况而定）。
e.达到规定时间后，对需干燥的物品，马上打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应马上将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体猛烈沸腾或容器爆破。
③卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：
a.关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。
b.夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。
c.待锅室达到规定的压力与温度时，调整进气阀，使保持恒定至规定时间。
d.自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体猛烈沸腾或容器爆破。
e.使用自动程序掌握式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应依据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行灭菌，灭菌时必需利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格根据厂家说明书进行。
5．灭菌温度与时间
①干热灭菌器灭菌温度160℃，1.5-2h。
②压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见表34-1。
表34-1
物品 | 灭菌时间，min | | |
含糖类等不耐热培育基 | 15-20 | 115℃ | |
染菌培育物 | 30 | 121℃ | |
器械器皿 | 30 | | |
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（二）间歇灭菌方法
1．灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌简单破坏，可用此法灭菌。
①将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。
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