魏海军1刘宪彬2赵蒙1赵伟刚1 常忠娟1
压铸机料筒的设计
刘恒良2张桂秋2张传友3张宇1
（1.中国农业科学院特产研究所吉林左家132109；2.吉林省东丰药业股份有限公司东丰
136300；
3.吉林省靖宇县吉林135200）
钢丝螺套标注Embryo transfer experiment of Sika Deer （Cervus Nippon）
WEI Hai-jun1 LIU Xian-bin2 ZHAO Meng1ZHAO Wei-gang1CHANG Zhong-juan1 LIU Heng-liang2ZHANG Gui-qiu2ZHANG Chuan-you3ZHANG Yu1（Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science，CAAS. Jilin 132109;2. Dong-feng Pharmaceutical Group Co.,Ltd of JiLin Dong-feng 136300；3.JingYu City of JinLin JingYu 135200）
胚胎移植技术是20世纪畜牧业生产中继精液冷冻和人工授精之后又重大一大变革，它能够充分发挥优良 母畜的遗传和繁殖潜力，也是其它胚胎生物工程技术的基础。目前，国内外对牛和羊等家养动物的超数排卵和胚胎移植技术的研究比较成功，并已经应用到这些动物的繁育工作中。鹿的家养历史虽然比较短，但是通过借鉴其它家畜的超数排卵和胚胎移植技术，有关专家也对一些家养鹿进行了相应的研究工作。目前，国外已经成功地对赤鹿、黇鹿、斑鹿、麋鹿和白尾鹿等鹿类动物进行了胚胎移植；我国也成功地进行了东北马鹿和塔里木马鹿的超数排卵和胚胎移植技术的研究。我们在梅花鹿的超数排卵研究的基础上，2004年秋季进行了梅花鹿胚胎移植试验，现将结果报告如下。
1 材料和方法
导电碳油墨
1.1供体鹿和受体鹿用于实验的供体鹿和受体鹿为吉林省东丰县东丰药业股份有限公司种鹿场的成年经产健康梅花鹿共12头，其中供体鹿为4头，受体鹿为8头。1.2 药品和用品羊用阴道内孕酮释放装置Ｇ（CIDR-G，每个含孕酮0.3克）为新西兰Carter Holt plastic 公司生产；氯前列醇钠（PG，0.2毫克/支）和兽用注射用促黄体素释放激素A3（LHRH-A3，15毫克/支）均为宁波市激素制品厂生产；促卵泡素（FSH）分别为宁波（100单位/支，批号：010515；简记为NB）、中科院动物研究所（2001年产，10毫克/瓶；简记为ZKY）和新西兰（Ovagen TM，17.6毫克/瓶；简记为NZ）生产；孕马血清促性腺激素（PMSG）为解放军军需大学军事兽医研究所生产；麻醉药“眠乃宁”和解药“苏醒灵”为解放军军需大学军事兽医研究所生产。
用结实的帆布、行李带、海绵和尼龙纱网自制配种标记装置。使用前在海绵和尼龙网间填充兰或绿染料与黄油混合而成的标记。
腹腔镜为上海贝克光电技术有限公司生产，直径7毫米。保定架自制。持卵钳、手术刀片和刀柄等手术器械若干。连续变倍体式显微镜XTL-1为北京泰克仪器有限公司制造。冲卵针自制，用16号采血针将针尖磨平，冲卵液EMCARE TM为新西兰ICPbio公司生产，其中含有低剂量内毒素白蛋白和硫酸卡那霉素（25毫克/ 毫升）。
1.3 超排采用FSH多次减量注射结合氯前列烯醇处理对供体梅花鹿进行超排。2004年9月下旬，用阴道栓放置器将CIDR-G放入供体鹿阴道深部，放置当天记为第0天。在CIDR-G 放置后第9天开始连续4天，每天早晚给实验鹿各肌肉注射一次FSH。注射剂量为第9天早晚各1.2毫克、第10天早晚各1.0毫克、第11天早晚各0.8毫克、第12天早晚各0.6毫克。第10天早晚肌肉注射0.4毫克氯前列烯醇。第11天傍晚取出两个实验组鹿阴道栓，同时肌肉注射300单位PMSG。
1.4 试情与配种所有供体鹿取出阴道栓8小时后放入带配种标记装置的种公鹿，使其完成交配。每隔一小时观察一次供体母鹿臀尖或后背染情况。如实验鹿臀尖或后背被染，则可判定该母鹿已经发情并已被种公鹿爬跨交配。当发现实验鹿发情并已接受交配，立即肌肉注射25微克促排3号，并作好记录。
1.5 胚胎回收方法供体鹿接受交配后第7天，用1支眠乃宁麻醉，麻醉前24小时禁食、12小时禁止饮水。麻醉后使其仰卧保定在特制的手术架上，头斜朝下，使身体与地面成30度角度。剃毛并局部消毒后，在母鹿腹部距乳房10厘米的腹中线一侧，将消毒好的腹腔镜穿刺器连同10厘米套管插入腹腔，注入适量的二氧化碳气体，抽出穿刺器，将医用腹腔镜经套管插入腹腔，打开光源，寻卵巢，观察和统计卵巢表面黄体数。如果单侧卵巢表面存在3个以上的黄体时即采用手术法进行胚胎回收。具体方法是在插入腹腔镜部位的对侧距腹中线10厘米处皮肤，用手术刀做3厘米长的切口，钝性分离皮下组织和肌肉及腹膜。用持卵器将相关子宫角牵引出腹腔，用外套硅胶管的肠钳夹住子宫角分叉处，从子宫角和输卵管结合部向子宫角内灌注冲卵液，用连接硅胶管的采卵针将子宫角内的冲卵液引到集卵杯中。在体视镜下检卵和评定。
内翅片管式换热器1.6 胎移植方法
1.6.1 受体的准备和处理8头受体鹿与前述供体鹿同时放入和取出CIDR。取出阴道栓时肌肉注射330单位PMSG，12小时后每隔1~2小时放入带有试情标记装置并带试情布的试情公鹿试情，一旦发现受体鹿发情即拨入发情受体鹿圈饲养，等待胚胎移植。
纱网1.6.2 胚胎移植方法在供体鹿冲胚的同时，用前述方法腹腔镜观察受体梅花鹿（同期发情后第6天）的两侧卵巢，若发现有黄体存在，就将从供体采集到的可用鲜胚1~2枚移植到有黄体存在的一侧子宫角内。腹壁创口撒布长效消炎粉后缝合1~2针。术后加强护理，不再放入补配公鹿。气浮转台
2 结果与讨论
供体鹿有3只发情，每只鹿的黄体数为7.8个，经过手术冲胚共收集到胚胎14枚，胚胎质量均比较好。本实验同期发情处理8头受体有7头发情，其平均发情时间比供体鹿平均发情时间晚24小时左右。7头受体鹿接受鲜胚移植后有2头获得胚移后代，其中一头产了双胎。
结果表明，用总剂量为7.4毫克中科院动物所的FSH减量注射，结合应用氯前列烯醇获得了比较理想的超排效果，卵巢平均黄体数可达到7.8个，获得的胚胎质量也都比较理想，说明该超排方法是可行的。但是获得的胚胎数量远少于黄体数，可能是与我们冲胚技术尚不熟练有关。受体梅花鹿在同期发情后第6天进行鲜胚移植，2头成功产仔，获得3只胚移后代，这是国内首次获得的梅花鹿胚胎移植后代。胚胎移植率较低的原因可能是供体鹿和受体鹿的发情相差24小时造成的。
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