2019年钦州市
一、监测目的
规范白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养方法，抗药性监测方法，为卫生杀虫剂、器械杀灭效果提供依据。 二、监测范围
白纹伊蚊/埃及伊蚊
三、监测内容与方法
1.白纹伊蚊/埃及伊蚊的饲养
1.1目的
规范白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养方法，为卫生杀虫剂、器械杀天效果测定提供标准试虫。
1.2适用范围
适用于白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养的操作
1.3职责
1.3.1蚊虫饲养人员必须掌握蚊虫饲养技术。带式输送机传动滚筒
1.3.2与饲养无关的人员木经许可不得进入饲养室，不允许饲养纱网人员在饲养室干与饲养无关的事，饲养室内严禁吸烟。
1.4饲养
1.4.1器材:方形塑料盆(或搪瓷盆)、蚊笼、饲养架、吸管、平皿、烧杯等。
1.4.2环境条件:温度26+1C,相对湿度75%+5%，光照时间14小时。
1.4.3饲料:猪肝和馒头晒干后按1:1的质量比用粉碎机磨碎后，过60目或者80目网筛。
1.4.4饲养方法
1.4.4.1成虫饲养
成蚊在蚊笼中饲养，每笼密度为200-300只蚊虫，蚊笼上部放置10%糖水浸透的海绵作为饲料，每天更换一次。成蚊在大量羽化后第2天多数可完成交配，此时即可供雌蚊吸血。供血时，将小白鼠腹部朝上固定在塑料板上，放入笼内喂血24-48小时，雌蚊吸血后2-3天可产卵，产卵期间笼内放入1个250mL的烧杯，内放三分之二水，将圆形滤纸对折2次后，成一
圆筒状放入烧杯内，滤纸筒外缘高于烧杯外缘，且下部接触水面，使滤纸筒润湿便于伊蚊在滤纸上产卵。经常观察烧杯内水是否不足，及时补水。每日观察产卵量，如产卵量大可一天一换滤纸，如卵量少可以两天一-换。一学生证制作次供血可以连续产卵3天。十二水磷酸氢二钠1.4.4.2卵纸的保存:将产有伊蚊卵的滤纸筒拿出，自然晾干后放于实验室环境内，可保存2个月。真空加热炉1.4.4.3幼虫饲养:在方形塑料盆(或搪瓷盆)内盛脱氯水，饲养幼虫200-300条，每日加饲料1-2次，1-2龄幼虫加料要少，如水面有膜:需要及时去膜。幼虫化蛹后，用吸管将蛹移入盛有脱氯水的烧杯中，置于蚊笼内待其羽化。1.4.5注意事项1.4.5.1控制环境条件:温度、湿度、光照。1.4.5.2幼虫饲养盆需每天观察水面是否起膜、添加饲料;成蚊饲养需每天换糖水。1.4.5.3饲养幼虫的方形塑料盆(或搪瓷盆)应保持清洁，饲养用的自来水必须放置一夜以脱氯。1总线上的音频设备
.4.5.4饲养室要严格密闭，进出要随手关门，严防饲养昆虫外逃。1.4.5.5幼虫饲养容器需罩纱网防止逃逸成蚊产卵。 1.4.5.6对死亡和要废弃的蚊虫以及被污染的工作衣物等必须进行消毒杀菌、无害化处理。
1.4.5.7卵纸应标明蚊虫种类、产卵日期，分类存放。
1.5.记录表格（见附表1.2）
1.蚊虫饲养记录表
2环境监控记录表
2.成蚊接触筒法
2.1实验目的
依据杀虫剂对敏感品系的毒力回归线，确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。一般用2倍敏感品系的LC99值作为诊断剂量。根据待检测蚊虫种在诊断剂量下的死亡率作为抗性判定标准。
2.2试虫
羽化后3d~5d未吸血健康雌蚊
2.3试剂
丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药。
2.4设施和器材
蚊笼、滤纸、 接触筒、吸蚊器、 电子天平(感量为0.1毫克)、容量瓶、微量移液器、光照培养箱、通风橱等
2.5测试条件
温度:25℃±1℃，光周期:14L:10D.相对湿度:60%~80%。
2.6步骤
2.6.1接触筒和恢复筒的准备
组装接触筒和恢复筒
恢复筒:在恢复简的底端安装层纱布，纱布要平整、严密(防止蚊虫逸出)，然后把恢复简安装到隔板上，编好号，放置-边备用。
接触筒:先在接触筒内放置一张滤纸，然后放入药膜纸，纸的放入应迅速，放入完毕用玻璃棒或其他没有药的东西，沿接触筒内侧转一圈(保证药膜纸与接触筒接触紧密)。然后再在接触筒的两端各固定一铁圈。最后在接触筒底部固定一层纱布(纱布应平整严密)
2.6.2实验过程
2.6.2.1先把恢复筒接装在放隔板的一面，用吸蚊器吸20-30只雌蚊，轻轻吹入筒内，然后瞬
间关闭隔板(防止速度过慢导致蚊虫从隔板夹缝逸出)，平行放置15分钟，剔除不健康蚊虫。
1.6.2.2在隔板另一面装上已衬贴药纸的接触筒，让恢复筒与接触筒竖直放置，轻轻拍打恢复筒让蚊虫聚集于恢复筒底部，然后瞬间把隔板抽开，旋转接触筒与恢复筒180度，让接触筒底部在下端，将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒，迅速关上隔板。将筒平放，即开始计算接触时间。不同的杀虫剂接触时间参考WHO推荐的几种杀虫剂对蚊虫成蚊的区分剂量表。
1.6.2.3接触完毕后将蚊虫转移至恢复筒，关上隔板，将筒垂直放直，用浸有10%葡萄糖水的棉花团置于尼龙网上(棉团含水不可过多，避免水珠落入恢复筒底部或者粘附于蚊虫身上,增加其死亡率。棉团蘸水后，用手轻轻挤压一.下即可)。对照组药纸为白油和乙醚的混合物，试验重复三次，从接触完毕后24小时计算死亡率。
2.7记录表格（见附表3）
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