双波长比法羊毛纸
1
范围
定型布
本文件描述了双波长比法测定薯类中直链淀粉和支链淀粉含量的方法。本文件适用于薯类中直链淀粉和支链淀粉含量的测定。2
双面电路板
规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
茶浴炉薯类Tubers
薯类作物的简称，又称根茎类作物，主要包括甘薯、马铃薯、山药、芋类等。4
原理
根据双波长比原理，若试样溶液在两个波长处均有吸收，则两个波长的吸光差值，与溶液中待测物质的浓度成正比。从待测样品液中的支链淀粉，直链淀粉分别与碘生成络合物的吸收图谱中，可以确定测定波长和参比波长。淀粉与碘能形成螺旋状结构的碘-淀粉复合物，具有特效的颜反应，其中支链淀粉与碘依其分枝程度生成棕红复合物，直链淀粉与碘生成深蓝复合物。因此两种淀粉与碘作用时会产生不同的光学特性，从而表现出特定的吸收谱及吸收峰，通过标准物质建立标准曲线，而确定样品支链淀粉、直链淀粉的含量。5 试剂
5.1除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T 6682中规定的三级水。5.2乙醇（CH 3CH 2OH）∶95％。5.3冰乙酸（CH 3COOH）。氢氧化钾（5.45.KOH）。5碘（I 2）。
5.6碘化钾（KI）。5.7支链淀粉标准品。5.8
薯类淀粉机
直链淀粉标准品。
5.9氢氧化钾溶液[c（KOH）=1mol/L]∶称取5
6.1g 氢氧化钾加水溶解并定容至1000mL。
5.10氢氧化钾工作液[c（KOH）=0.09mol/L]∶称取5.05g 氢氧化钾加水溶解并定容至1000mL。5.11乙酸溶液[c（CH 3COOH）=1mol/L]∶量取57.8mL 冰乙酸，定容至1000mL。
5.12碘试剂：称取2.0g 碘化钾，溶于少量蒸馏水，再加0.2g 碘，待溶解后用蒸馏水定容至100mL。现配现用，避光保存。6
仪器和设备
6.1实验室用粉碎机：可将样品粉碎，并过0.15mm 筛。6.2鼓风干燥箱。
家庭系统6.3双光束分光光度计：带波段扫描。6.46.5分析天平：感量为0.0001g。索氏抽提器。6.6恒温水浴锅。
6.7容量瓶：50mL、100mL 和1000mL。6.8移液器。
7
分析步骤7.1
试样制备
取薯类成熟样品洗净切片（丝），置于105℃鼓风干燥箱中杀青，再置于65℃鼓风干燥箱中烘干至恒重。将干燥后的样品粉碎后过0.15mm试样筛，储存于密封样品袋中，备用。7.2
样品溶液制备
称取0.1000g样品于100mL烧杯，加入1mL无水乙醇湿润样品，再加入9mL1mol/L氢氧化钾溶液至于沸水浴中加热10min，冷却后用蒸馏水定容至100mL容量瓶，混匀备用。7.3
标准曲线绘制
称取直链淀粉、支链淀粉标准物质各0.1000g于2个100mL烧杯，分别加入1mL无水乙醇湿润样品，再加入9mL1mol/L氢氧化钾溶液至于沸水浴中加热10min，冷却后用蒸馏水定容至100mL容量瓶，分别得到1mg/ml的直链淀粉标准溶液、支链淀粉标准溶液。吸取24mL支链淀粉标准溶液(1mg/ml)和6mL(1mg/mg)直链淀粉标准溶液，混合均匀，形成4:1的混合标准溶液。分别吸取混合标准溶液0mL、
0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、8.0mL，置于50mL容量瓶中，分别加入0.09moL/L氢氧化钾溶液8.0mL、7.5mL、7.0mL、6.0mL、4.0mL、0mL及1mol/L乙酸溶液2mL，碘试剂1mL，用蒸馏水定容至50mL，配制成支链淀粉标准溶液浓度：0μg /mL、8μg /mL、16μg /mL、32μg /mL、64μg /mL、128μg /mL；直链淀粉标准溶液浓度：0μg /mL、2μg /mL、4μg /mL、8μg /mL、16μg /mL、32μg /mL，静置30min。紫外分光光度计以试剂空白调零，在波长427nm(λ1)、535nm(λ2)、630nm(λ3),757nm(λ4)处测定混合标准溶液的吸光值，分别记为A λ1、A λ2、A λ3、A λ4，即得ΔA 支=A λ2-A λ4、ΔA 直=A λ3-A λ1。分别以ΔA 支和ΔA 直为纵坐标，支链淀μg /mL）为横坐标，分别绘制双波长支链淀粉、直链淀粉标准曲线，并计粉和直链淀粉标准溶液浓度（算出支链淀粉、直链淀粉回归方程。
7.4显和吸光度测定
吸取样品溶液2mL，置于50mL容量瓶中，加入0.09moL/LK0H溶液6mL，及1moL/L乙酸溶液2mL，碘试剂1mL，用蒸馏水定容至50mL，静置30min。紫外分光光度计以蒸馏水为空白调零，在波长427nm(λ1)、535nm(λ2)、630nm(λ3),757nm(λ4)处测定样品溶液的吸光值，分别记为A λ1、A λ2、A λ3、A λ4，即得ΔA 支=A λ2-A λ4、ΔA 直=A λ3-A λ1。将ΔB 支和ΔA 直分别代入支链淀粉、直链淀粉标准曲线回归方程中，得出样品溶液支链淀粉、直链淀粉的浓度。8
计算及结果表示
8.1
试样中支链淀粉、直链淀粉和总淀粉含量分别按式（1）、式（2）和式（3）计算：
X 1=C 1×50×D m 1000
·······················································(1)X 2=
C ×2×50×D m×1000 (2)
X =X 1+X 2 (3)
式中：
X 1——试样中支链淀粉的量，单位为百分比（％）；X 2——试样中直链淀粉的量，单位为百分比（％）；X——试样中总淀粉的量，单位为百分比（％）；C 1——查双波长支链淀粉、直链淀粉标准曲线得样品中支链淀粉的浓度，单位为微克每毫升（C 2——查双波长支链淀粉、直链淀粉标准曲线得样品中直链淀粉的浓度，单位为微克每毫升（D——分取倍数μg /mL）；μg /mL）；；
m——称取的样品质量，单位为克（g）；
50——混合标准溶液定容体积，单位为毫升（mL）；
μg /g）转化为单位百分比（％）的换算系数。10000——单位微克每克（8.2计算结果保留至小数点后2位。9
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10％。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议