一种辅助从石蜡包埋组织中提取RNA的试剂盒的制作方法

一种辅助从石蜡包埋组织中提取rna的试剂盒
技术领域
1.本实用新型涉及核酸提取技术领域，具体地说，是一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒。

背景技术：

2.疾病的发生或进展往往伴随着基因表达的改变，因此石蜡组织中的rna成为了宝贵的回顾性研究的资源。除此以外，石蜡包埋组织是医院和科研机构最常用的病理组织保存方式。但是值得注意的是，标准的福尔马林固定和石蜡包埋程序总是导致明显的核酸碎片和交联，因此从ffpe样品中分离出来的核酸通常比从新鲜或冷冻样品中获得的核酸分子量低，不利于下游的进一步分析。
3.而提取rna时，常常需要将试剂进行混合，现有的试剂盒虽然放置了多种所需的试剂，但混合却需要工作人员手动混合，造成了极大的效率降低和工作强度的提高，确有必要对现有的试剂盒进行改进。

技术实现要素：

4.本实用新型的目的是针对现有技术的不足，提供一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒。
5.为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒，包括试剂盒本体和混合机构，所述试剂盒本体内设置有若干试剂安放槽；所述混合机构包括设置在所述试剂盒外侧的混合仓和设置在所述试剂盒本体内的驱动装置，所述驱动装置与所述混合仓通过间歇传动轴相连接，所述驱动装置紧贴所述试剂盒本体边缘设置，所述混合仓存在有用于放置试剂瓶的放置空间。
6.本实用新型优点在于：
7.当工作人员从试剂盒内拿出相应试剂后，需要进行混合时，将需要混合的溶液放置在混合仓中，通过驱动装置驱动混合仓旋转，从而对需要混合的溶液进行倒置使之混合，从而提高提取rna的效率，同时降低了工作人员的工作强度。
附图说明
8.为了更清楚地说明本实用新型实施例的技术方案，下面将对实施例中涉及的技术方案对应附图加以简单说明，显而易见的，本说明书中所描述的附图仅仅是本实用新型的一些可能的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出任何创造性劳动的基础上，可以依据以下附图获得与本实用新型技术方案相同或相似的其他附图。
9.附图1是本实用新型一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒的立体示意图；
10.附图2是本实用新型一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的图1中a处放大图；
11.附图3是本实用新型一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒的俯视图；
12.附图4是本实用新型一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒的侧视图。
13.附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：
14.1、试剂盒本体；11、试剂安放槽；2、混合机构；21、混合仓；22、放置空间；23、环形滑轨；24、滑块；25、驱动装置。
具体实施方式
15.本实用新型的一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒，通过在装有从石蜡组织切片中提取rna的试剂得试剂盒上设置混合组件，从而对在提取rna时对溶液进行多次混合混合，减轻了工作人员的工作强度。
16.下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型所描述的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，本说明书中所描述的实施例仅是本实用新型的一部分可行技术方案，本领域普通技术人员基于本实用新型的实施例，在没有作出任何创造性劳动的基础上得到的其他实施例，应当视为属于本实用新型保护的范围。
17.需要说明的是，本实用新型实施例中所使用的“第一”“第二”等描述近用于描述目的，不应当理解为其指示或隐含指示所限定的技术特征的数量，由此，本说明书各个实施例中限定有“第一”“第二”的特征可以表明包括至少一个该被限定的技术特征。
18.本说明书中所记载的本实用新型的各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时，应当认为该技术方案的结合不存在。
19.一种辅助从石蜡组织切片中提取rna的试剂盒，包括试剂盒本体1和混合机构2，所述试剂盒本体1内设置有若干试剂安放槽11；所述混合机构2包括设置在所述试剂盒外侧的混合仓21和设置在所述试剂盒本体1内的驱动装置25，所述驱动装置25与所述混合仓21通过间歇传动轴相连接，所述驱动装置25紧贴所述试剂盒本体1边缘设置，所述混合仓21存在有用于放置试剂瓶的放置空间22。
20.具体的，试剂盒内有若干的试剂安放槽11，试剂安放槽11与试剂瓶直径大小相等，用于放置提取rna所需的试剂，混合机构2用于方便试剂之间的混合，在提取rna过程中，混合要尽可能避免接触空气，避免其他rna混入影响实验结果，因此需要对试剂进行密闭混合，通过将试剂瓶放置在混合仓21的放置空间22内，驱动装置25通过间歇传动轴驱动混合仓21倒置旋转，对试剂瓶内的试剂进行混合，减轻了实验人员的工作强度。提高了提取rna的实验效率；间歇传动轴是将驱动装置25的动力间歇性的通过传动轴传递至混合仓21的结构，从而实现对混合仓21转动，间歇性的将试剂倒置混合；混合仓21设置在试剂盒本体1外，避免影响试剂盒内的试剂。
21.进一步的，所述试剂安放槽11分别用于放置rna吸附螺旋柱、红细胞裂解液试剂瓶、逆转甲醛加合物及交联催化剂试剂瓶、蛋白酶k试剂瓶、rnase-free dnase i试剂瓶、rnase-free water试剂瓶、dnase反应缓冲液试剂瓶、洗脱液试剂瓶、样品收集管a和样品收集管b，所述试剂安放槽11矩形阵列排布在所述驱动装置25的一侧。
22.具体的，通过试剂安放槽11矩形阵列排布在所述驱动装置25的一侧，可以使得试剂瓶的取用和溶液的混合互相不受影响，方便了工作人员的使用。
23.进一步的，所述混合仓21还包括对放置空间22进行加热的加热外壳，所述加热外壳内设置有电加热片。
24.具体的，通过加热外壳对放置空间22进行加热，可以将孵育的步骤与混合步骤同步完成，避免了实验人员多次往返于不同仪器之间，降低了实验人员的工作强度，提高了实验效率，由于电加热片加热温度可控，提取rna实验孵育所需温度设置为56℃和80℃，因此在不同的实验步骤中控制电加热片分别将放置空间22的温度控制在56℃和80℃以满足实验需求。
25.作为本实用新型的优选技术方案，驱动装置25包括步进电机，步进电机的输出轴穿过试剂盒本体1的侧壁与混合仓21向连接，输出轴与是试剂盒本体1侧壁之间设置有轴承，通过对步进电机转动的时间和速度进行控制，从而实现混合仓21的间歇倒置。
26.需要说明的是，步进电机与混合仓21之间还可设置减速器进行减速。
27.作为本实用新型的备选技术方案，所述驱动装置25包括驱动电机，所述间歇传动轴包括与所述加热外壳固定连接的传动轴和与所述驱动电机连接的间歇机构，通过间歇机构实现对混合仓21的间歇倒置。间歇机构的具体构造可以参考现有技术中输出端为轴的间歇机构设置。
28.作为本实用新型优选技术方案，主齿轮选用直齿轮，可以通过在上紧发条时就对溶液进行混合，上紧发条后，齿轮反转，再反向对溶液进行混合，提高了溶液的混合效率。
29.需要说明的是，无论是电加热片或驱动装置25，均需要使用外接电源进行供能。
30.进一步的，所述试剂盒本体1靠近所述混合仓21的一侧设置有环形滑轨23，所述环形滑轨23通过滑块24与所述加热外壳连接，所述环形滑轨23与所述混合仓21的转动中心同轴设置。
31.具体的，通过环形滑轨23增强了混合仓21与试剂盒本体1连接的稳定性，避免了混合仓21的脱落以及对倾斜时驱动装置25的损害，滑块24与混合仓21固定连接，滑块24在滑轨上滑动，从而提高了混合仓21转动时的稳定性。
32.利用本实用新型的试剂盒从石蜡组织样本中提取rna的主要步骤如下：
33.1)脱蜡：
34.用刀片将石蜡包埋的组织切为厚度5-20um的切片，立即将1-2片组织切片放入1.5ml离心管中。加入160ul脱蜡液，快速涡旋10s后，56℃孵育3分钟，室温(15-25℃)冷却。
35.2)蛋白消化：
36.向步骤1)所得的样品中加入150ul逆转甲醛加合物及交联催化剂，旋涡混合，11000x g(10,000rpm)离心1分钟。随后加入10ul蛋白酶k，轻轻混合。并在56℃下孵育15分钟，然后在80℃下孵育15分钟。然后将样品转移到新的离心管中，在冰中孵育3分钟，然后用20,000x g(13500rpm)离心15分钟。接着将上清液转移到新的离心管中，注意不要吸附沉淀。加入相当于总样品体积十分之一的dnase i反应缓冲液和10ul dnase i，通过轻轻倒置混合，室温孵育15分钟。
37.3)rna提取：
38.在步骤2)所得样品中加入320ul红细胞裂解液调整结合条件，并充分混合。接着加入720ul乙醇(100％)，混合均匀。立即将700ul的样品，包括任何可能已经形成的沉淀物，转移到一个rna吸附旋转柱置中(旋转柱置于2ml收集管中)。轻轻合上盖子，以≥8000x g(≥10000rpm)离心15秒，弃去收集管中洗脱液。重复上述洗脱步骤，直至所有样品通过旋转柱。
39.4)rna纯化和收集：
40.在rna吸附旋转柱中加入500ul洗脱液。轻轻合上盖子，以≥8000x g(≥10000rpm)离心15秒，弃去收集管中洗脱液。进行相同操作，并离心2分钟，以清洗旋转柱膜，丢弃带有洗脱液的收集管。将rna吸附旋转柱置于新的2ml收集管中，全速离心5分钟，将带有洗脱液的收集管丢弃。接着将rna吸附旋转柱置于新的收集管中，添加14-30ul rnase-free water，轻轻盖上盖子，全速离心1分钟，以洗脱收集rna。
41.对上述步骤中得到的rna样品进行琼脂糖凝胶电泳、完整度、纯度和产量的分析
42.琼脂糖凝胶电泳分析：称取0.5g琼脂糖加入到25ml 1xtae电泳缓冲液中,微波炉加热使琼脂糖溶解均匀,取出,冷却10分钟,加入10pl的10mg/ml eb替代液,混合均匀。倒入预先放置好梳子的配胶槽,等待凝固；将凝固的凝胶放入电泳缓冲液,加1xtae电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。在超净工作台上，用移液器吸取总rna样品于封口膜上与1ul的10x上样缓冲液混匀后，小心加入点样孔(也可以rna样品5ul于封口膜上与1ul的6x上样缓冲液)。打开电源开关，调节电压至100v，使rna由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入凝胶成像仪中观察rna电泳结果。从电泳的结果看出，使用本实用新型试剂盒提取的rna，可见28s、18s小分子rna条带，且28s和18s rna比值约为2：1，表明rna完整性好，无降解。
43.提取的小鼠肺癌石蜡组织中的rna和临床肺癌组织中的rna的纯度和产量分析：使用微量核酸分光光度计进行检测，下表1显示的是代表样品标本的检测结果。根据表1呈现的数据提示，本实用新型试剂盒能够提取到检测合格的rna。
44.表1
[0045][0046][0047]
以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本实用新型原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本实用新型的保护范围。

技术特征：

1.一种辅助从石蜡包埋组织中提取rna的试剂盒，其特征在于：包括试剂盒本体和混合机构，所述试剂盒本体内设置有若干试剂安放槽；所述混合机构包括设置在所述试剂盒外侧的混合仓和设置在所述试剂盒本体内的驱动装置，所述驱动装置与所述混合仓通过传动连接，所述驱动装置紧贴所述试剂盒本体边缘设置，所述混合仓内存在有用于放置试剂瓶的放置空间。2.根据权利要求1所述的一种辅助从石蜡包埋组织中提取rna的试剂盒，其特征在于：所述试剂安放槽分别用于放置rna吸附螺旋柱、红细胞裂解液试剂瓶、逆转甲醛加合物及交联催化剂试剂瓶、蛋白酶k试剂瓶、rnase-free dnasei试剂瓶、rnase-free water试剂瓶、dnase反应缓冲液试剂瓶、洗脱液试剂瓶、样品收集管a和样品收集管b，所述试剂安放槽矩形阵列排布在所述驱动装置的一侧。3.根据权利要求2所述的一种辅助从石蜡包埋组织中提取rna的试剂盒，其特征在于：所述混合仓还包括对放置空间进行加热的加热外壳，所述加热外壳内设置有电加热片。4.根据权利要求3所述的一种辅助从石蜡包埋组织中提取rna的试剂盒，其特征在于：所述驱动装置包括步进电机，所述步进电机输出轴与所述加热外壳固定连接。5.根据权利要求4所述的一种辅助从石蜡包埋组织中提取rna的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒本体靠近所述混合仓的一侧设置有环形滑轨，所述环形滑轨通过滑块与所述加热外壳连接，所述环形滑轨与所述混合仓的转动中心同轴设置。

技术总结

本实用新型涉及一种辅助从石蜡组织切片中提取RNA的试剂盒，包括试剂盒本体和混合机构，所述试剂盒本体内设置有若干试剂安放槽；所述混合机构包括设置在所述试剂盒外侧的混合仓和设置在所述试剂盒本体内的驱动装置，所述驱动装置与所述混合仓通过间歇传动轴相连接，所述驱动装置紧贴所述试剂盒本体边缘设置，所述混合仓存在有用于放置试剂瓶的放置空间，将需要混合的溶液放置在混合仓中，通过驱动装置驱动混合仓旋转，从而对需要混合的溶液进行倒置使之混合，从而提高提取RNA的效率，同时降低了工作人员的工作强度。时降低了工作人员的工作强度。时降低了工作人员的工作强度。