陈峥嵘;石浩;何小娥;王文龙;黄卫文
【摘 要】为了探讨植物源杀虫剂(植物提取物)对鱼类指环虫的杀虫活性,以鱼鳃中型指环虫为供试虫,选择具有杀虫抑菌作用的52种药用植物的丙酮提取物进行了离体、活体杀虫活性测定,同时对杀虫效果较好的植物进行不同溶剂提取物杀虫试验,并对杀虫效果好的提取物进行理化检测.结果表明:在提取物供试药材(生药)质量浓度为10 mg/mL条件下离体初筛,得到18种具有较强杀虫效果的植物品种,其中经川楝、博落回、油茶饼、大黄、黄连、牵牛子、苦楝、藜芦、烟草等植物的提取物处理后指环虫能在10 h内死亡,且最低杀虫浓度均低于10 mg/mL(植物质量浓度).其中博落回、川楝活体杀虫率达85％ 以上,其余植物提取物达75％ 以上.川楝乙醇提取物处理杀虫效果最好,浓度在700 mg/L(提取物质量浓度)时,指环虫已全部死亡,此时鱼死亡率仅为4％.同时分析得出乙醇提取物的主要成分是黄酮类、生物碱和萜类,这些物质对指环虫的灭杀起到了关键性作用. 【期刊名称】《湖南农业科学》
【年(卷),期】2019(000)003
【总页数】5页(P68-72)
【关键词】艾叶提取物鱼类;指环虫;植物源杀菌剂;筛选
暖脐贴【作 者】陈峥嵘;石浩;何小娥;王文龙;黄卫文
【作者单位】湖南应用技术学院农林科技学院,湖南 常德 415100;湖南应用技术学院农林科技学院,湖南 常德 415100;湖南应用技术学院农林科技学院,湖南 常德 415100;湖南应用技术学院农林科技学院,湖南 常德 415100;湖南应用技术学院农林科技学院,湖南 常德 415100
【正文语种】中 文
【中图分类】S943
鱼类指环虫（Dactylogyrus）是对水产养殖行业危害最为严重的害虫之一，指环虫主要寄生在鱼体鳃部，如寄生数量达到一定规模将会导致鱼的大量死亡，给广大养殖户带来巨大的经济损失[1-2]。目前养殖户对指环虫灭杀的药物主要是一些化学药剂，如福尔马林、甲苯咪唑、敌敌畏、吡喹酮等，这些物质虽然对指环虫具有一定的杀灭作用，但长期使用，
会使指环虫产生一定的抗药性，效果逐步下降，杀虫成本逐渐提升[3-4]。同时，化学药剂具有一定的毒性，不容易降解，在毒死指环虫的同时将会污染水源，使得有毒物质沉积在鱼的体内，这将导致消费者的慢性中毒，从而对人体健康构成严重的威胁[5]。这些都不符合我国目前正在大力提倡和推广的绿环保养殖方式。因此，寻一种能够替代现有毒性农药，生产出具有环保、无公害型天然植物源及其配合物的杀虫剂尤为重要。中草药具有毒副作用小、药材易得、价格低廉、不易产生抗药性等优点，且药材中的某些次生代谢产物不仅有杀虫、抗菌作用，同时还能改善鱼体的免疫状态，提高机体自身的抗虫防病能力[6-7]。所以，进一步开展中草药在水产养殖上的应用研究将成为必然趋势。在水产养殖行业中，养殖户运用能够杀灭人和畜禽体内外寄生虫的中草药进行杀灭鱼类病虫害，鱼病的方法由来已久，如利用烟草、博落回、大蒜、洋金花、狼毒等中草药防治水产动物的害虫[8-9]。但这种做法缺乏实验和理论依据，具有一定的盲目性。且会造成中药材的浪费，并且杀虫效果不一定很好。笔者选取52种具有杀虫抑菌的中药材进行指环虫离体灭杀的药材筛选试验，以及对杀虫效果好的中药材进行指环虫活体杀虫试验，以期得到对指环虫杀灭效果好、对鱼生长影响小的中药材。同时由于天然植物不同溶剂提取物的有效成分含量和种类不一样，杀虫效果也具有非常大的差异[10-11]，进而研究不同提取溶剂所对
应提取物的杀虫效果，提高植物的利用率和相应鱼药工业化生产的效率。为水产养殖研发安全、高效、无污染、无残留的绿环保型农药提供理论依据。
1 材料与方法钢框胶合板模板
1.1 试验材料
供试植物共有52种，购置于湖南九芝堂医药有限公司和湖南养天和大药房，部分常见植物自行采摘。药材名称及药用部位列于表1。金鱼（Carassius auratus）购自湖南长沙某金鱼养殖场，体长（3.0±0.6）cm，体质量（4.0±0.5）g。指环虫实验室自行分离培养所得。葡萄糖、琼脂粉、丙酮（中国医药集团上海化学试剂公司），试剂为分析纯。主要仪器设备：HVA-85全自动高压蒸汽灭菌锅（上海天呈医流科技股份有限公司）；DSZ2000X倒置生物显微镜（北京中显恒业仪器仪表有限公司）；TGCXZ-5B超声循环提取机(北京弘祥隆公司)；Buchi R3旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；DHG-9146A 电热恒温鼓风干燥箱（无锡建仪实验器材有限公司）；SR-A10N-50冷冻干燥机（上海舍岩仪器有限公司）。pH计（METTLER TOLEDO公司）；DH5000B 电热恒温培养箱（西安禾普生物科技有限公司）；LX-600P冷却水循环机（北京长流科学仪器公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 植物提取物的制备 药材用烘箱50℃烘干至恒重，打粉过60～80目筛，装袋、编号。取各植物粉末10.0 g于大试管中、编号，加入25 ml丙酮溶剂，保鲜膜封口试管，采用700 W超声仪，70℃超声1.5 h，超声2次，抽滤合并滤液，滤液浓缩后蒸干，蒸馏水定容至10 mL容量瓶中，1.0 g/mL提取原液保藏在4℃冰箱中备用。
1.2.2 不同植物提取物离体杀虫活性测定 随机选取52条指环虫，置于64孔板中，1孔1虫，孔内先分别加入10 mg/mL的中草药提取物1 mL，在23℃培养箱中培养，重复3次，同时设置1个空白对照组（曝气地下水）。每隔2 h将板取出，在解剖镜下观察，记录虫体的存活情况。当虫体在一定的时间内没有活动或虫体表面出现自解现象时说明虫体已经死亡[12]。记录全部虫体死亡的时间，如少于24 h，说明这种提取物有效。
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表1 供试植物名称?
1.2.3 不同植物提取物最低杀虫浓度值的测定 取64孔板编号，将最终浓度为1、3、5、7、10、15 mg/mL植物提取液倒入孔中，1孔5虫。置于23℃的培养箱中培养，每隔2 h将板取出，在解剖镜下观察，记录虫体的存活情况。记录12 h内全部虫体死亡时提取物浓度。
1.2.4 不同植物提取物活体杀虫活性测定 （1）鱼感染虫处理。与感染有中型指环虫的金鱼以10∶1的比例进行混养20 d左右，每隔1 d投饵一次，混养期间水温恒定在23±2℃，每隔3 d换水一次。20 d后从中随机抽取10尾金鱼，镜检其全鳃，观察指环虫的感染情况，当每尾金鱼的感染有25条指环虫以上，所有被检金鱼的感染率达到100%时，进行药效测定。（2）提取物杀虫实验。把20条感染有坏鳃指环虫的金鱼盛有5 L曝气地下水，共5个盆，每盆中草药提取物最终浓度10 mg/mL。另外设立一试剂空白对照组。实验中不喂食、不换水，记录鱼的死亡情况，试验时间为2 d。实验结束后取下鳃片，记录每条鳃片上坏鳃指环虫的数量，并计算杀虫率。
杀虫率（%）=（对照组存活数量－试验组存活数量）/对照组存活数量×100
鱼死亡率(%)=(投放的鱼数量－镜检时的鱼存活数量)/投放的鱼数量×100
1.2.5 川楝不同溶剂提取物活体杀虫活性测定 （1）提取物的制备。植物粉碎后过60目筛备用。称100.0 g，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、水分别进行加热超声提取，每次1.5 h，共2次，料液比为1∶20。提取液过滤，合并相同溶剂，减压浓缩得到各极性浸膏，冷冻至恒重，备用。溶解不同溶剂川楝提取物，与蒸馏水混合定容至1.0 g/L，待测母液置
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于4℃冰箱保存待用。（2）杀虫实验。按照1.2.4的方法进行。
1.2.6 川楝不同溶剂提取物成分测定 （1）检查生物碱类，硅钨酸试验。（2）检查黄酮类化合物，盐酸-镁粉反应。（3）检查甾体及三萜类化合物，氯仿-浓硫酸反应。（4）检查酚类化合物和鞣质类，三氯化铁-铁反应。（5）检查氨基酸、多肽和蛋白质类，双缩脲试验。（6）检查还原糖、多糖和苷类，α-萘酚试验。（7）检查有机酸类，溴甲酚绿试验。（8）检查挥发油、油脂类，斑试验。
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