•1、2002简7#——扫描隧道显微镜
是纳米生物学研究的工具，为何能用来观察活的生物样品？ 答案：扫描式电子显微镜的电子束不穿过样品，仅在样品表面扫描激发出次级电子。放在样品旁的闪烁晶体接收这些次级电子，通过放大后调制显像管的电子束强度，从而改变显像管荧光屏上的亮度。显像管的偏转线圈与样品表面上的电子束保持同步扫描，这样显像管的荧光屏就显示出样品表面的形貌图像，扫描式电子显微镜的分辨率主要决定于样品表面上电子束的直径。扫描式电子显微镜不需要很薄的样品；图像有很强的立体感；能利用电子束与物质相互作用而产生的次级电子、吸收电子和 X射线等信息分析物质成分。扫描隧道显微镜
可以在真空、大气、液体（接近于生理环境的离子强度）等多种条件下工作，因为扫描时不接触样品，又没有高能电子束轰击，基本上可避免样品的变形，属于非破坏性测量，所以可以用来观察活的生物样品。 •2、 2003简6#——以一种荧光染料检验细胞活性的实验方案和原理
答案：碘化丙啶荧光染鉴定细胞活性
1、原理
本地摄像头细胞活性指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性，代谢活性，膜电位等。用碘化丙啶(PI)对细胞进行染,可以区别坏死及正常细胞.
细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜.当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使坏死细胞着,活细胞不着. 荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察复合纸
2、方案
PI染细胞
(1)染:将瓶中的细胞摇匀,取200μl于1.5ml的离心管中,加入PI 20μl,染15分钟.
(2)滴片:取一载玻片,用双面胶围成一小室,从离心管中各取以上染后的细胞悬液10μl,加入小室内盖上盖玻片,荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察
细胞内有荧光的则为坏死细胞，细胞内无荧光的为活细胞。
•3、 2004简1#——细胞生物学的镜检样本制备中为什么必须取材新鲜且迅速固定？透射电镜观察的样品为什么必须事前进行脱水处理
答案：因为离体的细胞处在很低的大气压中，膜结构很不稳定，时间长了之后会导致膜结构破坏，整个细胞就支离破碎了，所以必须取材新鲜且迅速固定。
电镜标本的制作过程是这样的：
戊二醛固定——PBS冲洗——锇酸固定——PBS冲洗——丙酮逐级脱水——树脂（如EPON812）+丙酮渗透——纯树脂渗透——包埋——聚合——修块——超薄切片——柠檬酸铅和醋酸双氧铀染——电镜观察。
因为包埋剂（树脂）是脂溶性的，疏水性的，经历了由水相——油相——水相的过程，必须事前进行脱水处理。
•4、 2004简5#——FDA、DAPI、Cochicine（秋水仙素）等试剂在细胞生物学研究中的主要用途有哪些？简述其原理。
答案：FDA是荧光素2乙酯,研究细胞活性的,活细胞染成BLUE,作用与DAPI,PI相同
DAPI4'-6-Diamidino-2-phenylindole 可以和双链DNA结合发出荧光. 当DAPI和DNA结合时, 其荧光信号增强, 主要用于细胞染(染细胞核)
秋水仙素能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染体停滞在分裂中期 ，被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种的工作中，秋水仙素是诱变多倍体效果最好的药剂之一
•5、 2005简5#——如何检验细胞膜的完整性，简述其原理及操作。
碘化丙啶荧光染检验细胞膜的完整性
1、原理
细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜.当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使细胞着. 荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察
2、方案
PI染细胞
(1)染:将瓶中的细胞摇匀,取200μl于1.5ml的离心管中,加入PI 20μl,染15分钟.
(2)滴片:取一载玻片,用双面胶围成一小室,从离心管中各取以上染后的细胞悬液10μl,加入小室内盖上盖玻片,荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察
细胞内有荧光的则为细胞膜不完整，细胞内无荧光的为细胞膜完整。
•6、 2005简6#——请简单谈谈下列仪器的主要用途和特点（1）干涉差显微镜ICM（2）激光共聚焦扫描显微镜Confocal（3）电荷偶联以CCD（4）流式细胞仪（Flow cytometry)
•干涉差显微镜（ICM，interference contrast microscope）其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。ICM使细胞的结构，特别是一些较大的细胞器，如核、线粒体等，立体感特别强，适合于显微操作。目前像基因注入、核移植、转基因等的显微操作常在这种显微镜下进行。
•激光共聚焦扫描显微镜（Confocal) 激光共聚焦显微镜有如下优越性：
1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描，可获得精细的细胞骨架、染体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。
2、 可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、同时具有高灵敏度、杰出样品保护。
3、多维图象的获得，如7 维图象(XYZaλIt): xyt 、xzt 和xt 扫描,时间序列扫描旋转扫描、区域扫描、光谱扫描、同时方便进行图像处理。
4、细胞内离子荧光标记，单标记或多标记，检测细胞内如PH和钠、钙、镁等离子浓度的比率测定及动态变化。
5、荧光标记探头标记的活细胞或切片标本的活细胞生物物质，膜标记、免疫物质、免疫反应、受体或配体，核酸等观察；可以在同一张样品上进行同时多重物质标记，同时观察；
6、对细胞检测无损伤、精确、准确、可靠和优良重复性；数据图像可及时输出或长期储存。
适用于细胞生物学、细胞生理学、神经生物学和神经生理学等几乎所有涉及细胞研究领域。电荷偶联仪（CCD）（Charge Coupled Device）电荷藕合器件图像传感器,它使用一种高感光度的半导体材料制成。CCD的结构为三层，第一层是“微型镜头”，第二层是“分滤片”以及第三层“感光层”。可用于捕捉清晰动态的信号。
•流式细胞仪（Flow CytoMeter, FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
•7、 2006简6#——简述常用的荧光标记与观察技术，列出其主要技术流程摄像机三角支架
1、胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染后也能在荧光显微镜下进行观察。活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。
2、荧光染鉴定细胞活性
用碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行染,可以区别坏死及正常细胞.
细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜.当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使坏死细胞着,活细胞不着. 荧光镜下
用紫外激发光,高倍镜下观察
方案
PI染细胞
(1)染:将瓶中的细胞摇匀,取200μl于1.5ml的离心管中,加入仙台病毒PI 20μl,染15分钟.
(2)滴片:取一载玻片,用双面胶围成一小室,从离心管中各取以上染后的细胞悬液10μl,加入小室内盖上盖玻片,荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察
3、探针的荧光标记
探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析
•8、 2006简7#——相差显微镜、扫描电子显微镜，透射射电子显微镜在细胞生物学研究中各有何用途及特点
1、相差显微镜
特点： 相差显微镜是一种将光线通过透明标本细节时所产生的光程差（即相位差）转化为光强差的特种显微镜。
光线通过比较透明的标本时，光的波长（颜）和振幅（亮度）都没有明显的变化。因此，用普通光学显微镜观察未经染的标本（如活的细胞）时，其形态和内部结构往往难以分辨。然而，由于细胞各部分的折射率和厚度的不同，光线通过这种标本时，直射光和衍射光的光程就会有差别。随着光程的增加或减少，加快连续铸造机或落后的光波的相位会发生改变（产生相位差）。光的相位差人的肉眼感觉不到，但相差显微镜能通过其特殊装置——环状光阑和相板，利用光的干涉现象，将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差（明暗差），从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强，使我们能比较清楚的观察到普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构。
用途：相差显微镜能观察到透明样品的细节，适用于对活体细胞生活状态下的生长、运动、增殖情况及细微结构的观察。因此，是微生物学、细胞生物学、细胞和组织培养、细小环钗
胞工程、杂交瘤技术等现代生物学研究的必备工具。
2、扫描电子显微镜：
特点：电子显微镜为电子束为介质,由于电子束波长远较可见光小,故电子显微镜分辨率远比光学显微镜高.光学显微镜放大倍率最高只有约1500倍,扫描式显微镜可放大到10000倍以上. 扫描电子显微镜有一重要特是具有超大的景深(depth of field),约为光学显微镜的300倍,使得扫描式显微镜比光学显微镜更适合观察表面起伏程度较大的试片. 可进行多种功能的分析.与 X 射线谱仪配接,可在观察形貌的同时 进行微区成分分析;配有光学显微镜和单仪等附件时,可观察阴极荧光图像和进行阴极荧光光谱分析等. 可使用加热,冷却和拉伸等样品台进行动态试验,观察在不同环境 条件下的相变及形态变化等.
大部分电子扫描显微镜的抗污染能力低,必须提供真空系统和电源稳压系统.
用途： 二次电子象,背散射电子象,图象处理及分析,能做各种固体材料样品表面形貌及组织结构的分析.
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