组员：
【实验目的】
1. 掌握细胞融合的概念、融合细胞的识别及细胞融合率的计算方法。蚀刻液再生
【实验原理】
细胞融合（cell fusion）是指在自然条件下或用人工方法使两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的过程，包括质膜的连接与融合、胞质合并，细胞核、细胞器和酶等互成混合体系，亦称细胞杂交（cell hybridization）。
在通常情况下，由于细胞的完整性，相互接触的细胞并不发生融合现象。但在某些特殊融合诱导物的作用下，相互接触的细胞也可以发生细胞融合。依据融合过程中采用的助融剂不同，细胞融合采用的方法可分为：①生物诱导的细胞融合，如灭活的仙台病毒（Sendai virus）;
②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）；③电场诱导的细胞融合（电融合）。
细胞融合率=融合的细胞核数/总细胞核数X100%
除了诱导剂外，其他因素，如细胞类型和性质、温度、PH值、离子强度等也会影响细胞融合率。
聚乙二醇（PEG）是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同相对分子质量的多聚体。聚乙二醇能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触处质膜的脂类分子发生疏散和重组，改变接触处双分子层质膜的相互亲力和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合，产生体细胞杂合体。
细胞融合技术的运用：①生产单克隆抗体；②基因定位；③绘制人类基因图谱；④原生质体新培养体系；⑤培育抗逆植株；⑥生物药品的生产；⑦为发酵工程提供优良菌种等等。【实验用品】
1.实验材料：10%鸡红细胞悬液
2.实验器材：光学显微镜、离心机、水浴箱、刻度离心管、吸管、试管、试管架、天平、 酒精灯、载玻片
仙台病毒3.实验试剂：生理盐水、Alsver液、Hanks液、30%、50%、70%PEG(Mv=4000)、0.2%
次甲基蓝染液m2卡
【实验步骤】
1.取三支离心管，分别标记为1号，2号，3号。
玻璃钢拉挤模具2.取10%鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，再加入GKN液4ml混匀，进行以下离心处
理：1000r/min，离心时间为5min.
3.离心后，弃掉上清液，轻弹离心管底部使其细胞松散。
4.分别向1、2、3支离心管中加入37℃的预热后的30%、50%、70%的PEG溶液，同
时放入37℃的水浴箱中浴热1-2min。
5.取出后，分别向三支离心管中加入GKN液至5ml，于37℃水浴中保温5min。
6.混匀，静置，终止PEG，进行离心处理：1000r/min，离心时间：5min。
7.弃上清液，加入GKN液制成细胞悬液，再进行涂片，晾干。
固废焚烧
8.用0.2%的次甲基蓝染液对制成的涂片进行染10min，再冲洗染剂，晾干，镜检。【注意事项】
1.在向离心管内滴加PEG之前，一定要将离心管倒置在滤纸上，流尽剩余液体，否则残留
液会改变PEG的浓度。
2.滴加50%PEG时，要在37℃的水浴内进行，且应缓慢逐滴加入，每滴加一滴应轻弹试
管底部，滴加完毕后用吸管充分混合均匀。
【实验结果】
镜下观察显示：30%的PEG诱导的细胞可观察到部分细胞融合；50%的PEG诱导的细胞大部分细胞融合；70%的PEG诱导的细胞几乎观察不到细胞融合。
由镜检观察结果可知：30%的PEG诱导的细胞融合率比50%的PEG诱导的细胞融合率明显较低，而70%的PEG诱导的细胞融合率更明显低于前两者，50%的PEG诱导的细胞融合率最高。
结果讨论：在其他因素不变的情况下，在一定PEG浓度范围内，随PEG浓度的升高，细胞融合率随之升高。
【分析讨论】
1.影响细胞融合的因素有哪些？
除了诱导剂外，其他因素，如细胞类型和性质、温度、PH值、离子强度等也会影响细胞融合率。
2.细胞融合主要应用于哪些方面？
细胞融合技术的运用：①生产单克隆抗体；②基因定位；③绘制人类基因图谱；④原生质体新培养体系；⑤培育抗逆植株；⑥生物药品的生产；⑦为发酵工程提供优良菌种等等。
3.进行细胞融合的方法有哪些？
牙模细胞融合采用的方法可分为：①生物诱导的细胞融合，如灭活的仙台病毒（Sendai virus）;②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）；③电场诱导的细胞融合（电融合）。
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